化学发光测定仪

上海丰汇生物研究有限公司化学发光介绍发光免疫技术发光免疫技术(luminescenceimmunoassay,LIA)是将发光分析和免疫反应相结合而建立的一种新的免疫分析技术。这种方法不仅具有发光分析的高灵敏度和抗原抗体反应的高度特异性,而且还具有分离简便,可以实现自动化分析特点,使之成为医学、生物学研究领域中一种新的重要的免疫学分析手段。按化学反应类型化学发光的分类酶促化学发光：辣根过氧化物酶系统：丰汇、强生碱性磷酸酶系统：贝克曼非酶促化学发光：

吖啶酯系统：雅培电化学发光：罗氏闪光（Flash）:按发光持续时间发光时间在数十分钟以上，如：

HRP-Luminol系统

AP-AMPPD系统无须原位进样、以速率法测量。发光时间在数秒内，如吖啶酯以原位进样(InSituInjector)和时间积分法测量辉光（Glow）:时间发光信号辉光坪区速率法测量原位进样积分法测量闪光尖峰闪光与辉光及其测量方式的差别

发光与化学发光剂一、发光一种物质由电子激发态回复到基态时，释放出的能量表现为光的发射，称为发光(luminescence)。根据形成激发态分子的激发能可将发光分为三种类型:1.光照发光2.生物发光3.化学发光。1.光照发光发光剂经短波长入射光照射后进入激发态，当回复至基态时发出较长波长的可见光

。电子e光子基态能级2.生物发光典型例子为萤火虫发光。反应底物为萤火虫荧光素(fireflyluciferin)，在荧光素酶(luciferase)的催化下利用ATP产能，生成激发态的氧化萤火虫荧光素(oxyluciferin)，后者在回复到基态时多余的能量以光子形式放出。3.化学发光化学发光是在常温下经化学反应所产生的发射光。化学发光是一个多步骤的过程，其机制为某些化合物(发光剂或发光底物)可以利用一个化学反应产生的能量使其产物分子或反应中间态分子上升至电子激发态。当此产物分子或中间态分子衰退至基态时，以发射光子的形式释放能量(即发光)。化学发光免疫技术中常用的化学发光剂或发光底物

酶促反应的发光底物直接化学发光剂

电化学发光剂1．酶促反应的发光底物酶促反应的发光底物是指经酶的降解作用而发出光的一类发光底物，目前化学发光酶免疫技术中常用的酶有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（ALP），相应发光底物为：

HRP的发光底物：价格低廉、国内技术成熟

ALP的发光底物：价格昂贵、国内无成熟技术(1)HRP的发光底物

常用的底物为鲁米诺或其衍生物。鲁米诺或其衍生物鲁米诺的氧化反应在碱性缓冲液中进行。（2）ALP的发光底物常用的底物为3-（2-螺旋金刚烷-4-甲氧基-4-甲基-4-（3-磷酸氧基）-苯基-1，2-二氧乙烷（AMPPD）和4-甲基伞形酮磷酸盐（4-MUP，荧光底物）。AMPPD

AMPPD在碱性条件下，被ALP酶解生成相当稳定的AMP-D阴离子，其有2-30min的分解半衰期，发出波长为470nm的持续性光，在15min时其强度达到高峰，15~60min内光强度保持相对稳定。2．直接化学发光剂这类发光剂不需酶的催化作用，只需改变溶液的pH等条件就能发光，如吖啶酯（acridinium,AE）在含过氧化氢的稀碱溶液中即能发光。3.电化学发光剂是指通过在电极表面进行电化学反应而发出光的物质。化学发光剂三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+（图19-1）和电子供体三丙胺（TPA）在阳性电极表面可同时失去一个电子而发生氧化反应。二价的[Ru(bpy)3]2+被氧化成三价，成为强氧化剂，TPA失去电子后被氧化成阳离子自由基TPA+，它很不稳定，可自发地失去一个质子（H+），形成自由基TPA.，成为一种很强的还原剂，可将一个高能量的电子递给三价的[Ru(bpy)3]3+使其形成激发态的[Ru(bpy)3]2+.。3.电化学发光剂激发态的三联吡啶钌不稳定，很快发射出一个波长为620nm的光子，回复到基态的三联吡啶钌。这一过程可在电极表面周而复始地进行，产生许多光子，使光信号增强。酶促化学发光免疫分析就是利用酶对发光底物催化作用而直接发光，通过光强度的测定而直接进行定量。酶促化学发光免疫分析（双抗体夹心法）

化学发光免疫技术是免疫测定技术继酶免技术（EIA）、放免技术（RIA）、荧光免疫技术（FIA）和时间分辨荧光免疫技术（TRFIA）之后发展的一项新兴测定技术。化学发光免疫技术是一种高度敏感的微量测定技术，凡具有抗原性的物质（包括半抗原）都可以用化学发光免疫技术测定。其起步于80年代初，快速发展于90年代，在国外化学发光免疫技术的应用处于蓬勃发展的阶段。

化学发光免疫技术具备以下特点：①高度敏感，极限达10-17~10-19M/L，远高于RIA、EIA、TRFIA。②特异性强，重复性好C.V.＜10％。③测定范围宽，可达7个数量级。④试剂稳定性好，无污染有效期6－12月。⑤操作简单，易于自动化。在对环保很重视的国家，CLIA成了取代RIA的首选方法。化学发光原理

化学发光检测主要是借助抗原和抗体在体外特异结合后出现的各种现象，对样品中的抗原或抗体进行定性、定量、定位的检测。抗原：可诱导动物免疫系统产生免疫应答的物质。抗体：由动物免疫系统产生，可特异性结合某种物质的球蛋白。

化学发光反应基本原理双抗体夹心法（三明志法）原理试剂1酶标记抗体待测物超顺磁珠夹心法的剂量--反应关系曲线信号强度（Y）线性范围待测物浓度（X）Hook(前滞)效应分析灵敏度（最低检测限）（95%可信度）：

S0+2SD在该曲线上所对应的浓度值。功能灵敏度：测定误差（变异）≤20%的最低可检测浓度。线性范围：（分析）功能灵敏度---变异≤20%的最高检测浓度相关系数≥0.99的曲线范围竞争法的原理待测物试剂1酶标记抗原超顺磁珠竞争法的剂量--反应关系曲线待测物浓度（X）信号强度（Y）线性范围分析灵敏度（最低检测限）（95%可信度）：

S0-2SD在该曲线上所对应的浓度值功能灵敏度：测定误差（变异）≤20%的最低可检测浓度线性范围：

（分析）功能灵敏度---变异≤20%的最高检测浓度相关系数≥0.99的曲线范围发光免疫分析基本操作步骤（一步法）

待测样品酶标记抗体或抗原磁场中洗涤去除未结合的反应物发光底物仪器检测反应管反应10分钟反应0-5分钟超顺磁珠标记生物素的抗体或抗原发光免疫分析基本操作步骤（二步法）

待测样品洗涤去除未结合的反应物发光底物仪器检测反应管反应10分钟反应0-5分钟酶标记抗体或抗原洗涤去除未结合的反应物反应10分钟超顺磁珠标记生物素的抗体或抗原化学发光的应用传染性疾病的检测：HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb、anti-HCV、HIV等甲状腺功能检测：TT3、TT4、T3、T4、TSH糖尿病检测：INS、C-P等肿瘤标志物检测：AFP、CEA、PSA、fPSA、NSE、CA50、CA12-5、CA15-9、CA19-9等性腺激素检测：E2、Testo、Prog、PRL、FSH、LH、HCG等各品牌对比类别丰汇雅培罗氏贝克曼方法学检测试剂酶促化学发光纯液相反应通用型纳米免疫磁珠亲和素-生物素免疫放大系统成熟的增强型鲁米诺发光体系吖啶酯直接化学发光半液相反应非通用型磁珠，磁珠上标记抗体（抗原）电化学发光纯液相反应通用型纳米免疫磁珠亲和素-生物素免疫放大系统酶促化学发光纯液相反应通用型纳米免疫磁珠亲和素-生物素免疫放大系统碱性磷酸酶发光体系仪器性能及参数自动化程度真正的全自动无人伺候真正的全自动无人伺候真正的全自动无人伺候真正的全自动无人伺候检测速度单机检测速度最快一步法：恒速400test/h；两步法：恒速200test/h，自测试开始第16.5分钟出第一个测试结果，以后每隔9秒出一个结果最高速度200test/h最高速度180test/h100test/h操作模式随机检测，急诊插入功能随机检测，急诊插入功能随机检测，急诊插入功能随机检测，急诊插入功能反应杯120个永久性免维护反应杯一次性塑料杯，成本高一次性塑料杯，成本高一次性塑料杯，成本高各品牌对比(续上表）

丰汇雅培罗氏贝克曼仪器性能及参数加样方式四智能加样手，各试剂独立加样，杜绝交叉污染智能加样手智能加样手智能加样手试剂位83个，超大独立冷藏双试剂盘独立冷藏试剂位独立冷藏试剂位独立冷藏试剂位孵育方式金属浴，温度控制随意可调，精度达±0.1度金属浴金属浴金属浴搅拌方式双独立搅拌手单独立搅拌手单独立搅拌手单独立搅拌手可用方法学夹心法、竞争法、间接法、特殊方法学可随机编辑夹心法、竞争法、间接法夹心法、竞争法、间接法夹心法、竞争法、间接法最小反应体积100ul＞200ul＞200ul＞200ul检测方法单光子计数单光子计数单光子计数单光子计数灵敏度10pg/ml10pg/ml10pg/ml10pg/ml一次性耗材无有≥5元/test有≥5元/test有≥5元/test丰汇化学发光测定仪磁力清洗站十二步清洗工作站独立的搅拌系统独创永久性反应装置高精密度单光子计数系统单光子计数器是目前高灵敏度发光检测仪的核心部件光电倍增管高压高速放大器高速比较器高速分频器发光样品产生光子激发光阴极产生光电子在阳极上形成较强信号脉冲信号相对发光单位数字脉冲(RLU)在各打拿极之间得到能量和数目的倍增高精密度微量加样系统精准的加样手系统丰汇全自动液相化学发光检测系统具有完全自主知识产权；速度快：全球最快的全自动化学发光，最高恒速可达600test/小时，目前雅培i2000理论速度为200test/小时实际速度为165test/小时左右；罗氏的电化学发光理论速度为180test/小时，实际速度150test/小时左右；全球首创永久性反应杯：无一次性耗材（如一次性反应杯、TI