生化制药基本技术生化制药技术课件

第二章生物制药基本技术生物制药是把生物体内的具有生物活性的基本物质保持原来的结构和功能,又能在含有多种物质的液相或固相中较高纯度的分离出来。它是一项严格、细致、复杂的工艺过程,涉及物理、化学、生物学、工程等方面的知识和操作技术问题:1、标准化方法?2、如何发现或研制新药?·对于一个新研制的生物药物,从查阅文献开始,到探索实验、条件考察(记录客观)、总结制定工艺规程、制定分析鉴定方法,再进行中试放大,全面考察工艺是否成熟,是否稳定等。第二章生物制药基本技术1基本制造方法·1、提取法(Extraction2、发酵法(Zymotechnics)·3、化学合成(Chemicalsynthesize)组织培养法(Tissueculture)5、现代生物技术(Modernbiotechnics):Geneengineering,Enzymeengineering,Cellengineering,proteinEngineeringFermentationengineering基本制造方法2生化制药的六个阶段1.原料的选择和预处理2固液分离3.提取:从原料中经溶剂分离有效成分,制成粗品的工艺过程4.精制纯化:粗制品经盐析、有机溶剂沉淀、吸附、层析透析、超离心、膜分离、结晶等步骤进行精制的工艺过程。5,成品加工/浓缩、干燥及保存、制剂:原料药(精制品)经精细加工制成片剂、针剂、冻干剂、粉剂等供临床应用的各种剂型生化制药的六个阶段3、原料选择和预处理(RawMaterialSelectingandPretreatment)原料选择的基本准则:1、在大量的信息资料和实践经验的基础上,选择目标原料。2、选择有效成分含量高的新鲜材料;3、来源丰富易得4、制造工艺简单易行;5、成本比较低;6、原料的采集不破坏生态环境,选择对环境友好的原材料资源,防止生物入侵。、原料选择和预处理4预处理方法1、动物组织先要剔除结缔组织、脂肪组织等非活性部分植物种子去壳除脂;微生物要进行菌体与发酵液分离等基本操作。便于贮存和运输。2、冷冻法预处理:有些材料要冷冻保存或低温保存,以便抑制微生物和酶的作用。3、有机溶剂除去部分水分:用丙酮或乙醇进行脱水和脱脂有利于贮存。预处理方法5原料的粉碎:在提取前先将大块的原料粉碎或绞碎成适度的粒度,或将细胞破碎,使胞内活性物质充分释放到溶液中,有利于提取或吸附动物脏器组织:常用绞肉机机械法粉碎;植物肉质组织:常用磨碎法;微生物:常用自溶、冷热交替、加砂研磨、超声、加压等处理方法原料的粉碎:在提取前先将大块的原料粉碎或6·1.机械法:组织捣碎机、匀浆器、研钵、球磨机、万能粉碎机、绞肉机、击碎机、刨片机。动物组织多在冰冻状态绞碎、溶浆。2物理法A、反复冻融法:把待破碎的样品冷至-20℃-15℃,使之凝固,然后缓慢的溶解,如此反复操作,大部分动物性细胞及细胞内的颗粒可以破碎B、冷热交替法:将材料投入沸水中,在90℃左右维持数分钟,立即置于冰浴中,使之迅速冷却,绝大部分细胞被破坏。此法多用于细菌或病毒中提取蛋白和核酸·1.机械法:组织捣碎机、匀浆器、研钵、球磨机、万能粉碎7C、超声波处理法:多用于微生物材料,处理的效果与样品浓度、使用频率有关。用大肠杆菌制备各种酶时,常用50~100mg/L菌体浓度,在1~10Kc频率下处理10~15min。操作时注意避免溶液中气泡的存在加压破碎法:加气压或水压,达059~3432MPa(210-350kgf/cm2)的压力时,可使90%以上细胞被压碎。多用于微生物酶制剂的工业制备。C、超声波处理法:多用于微生物材料,处理的效果与83.生化及化学法A.自溶法:将新鲜的生物材料存放在一定的pH和适当温度下,利用组织细胞中自身的酶系将细胞破坏,使细胞内含物释放出来的方法。自溶的温度,动物材料在0-4℃,微生物在室温下。自溶时,需加少量的防腐剂,甲苯、氯仿,以防止外界细菌的污染。*由于自溶时间较长,不易控制,故制造具有活性的核酸和蛋白质时比较少用。3.生化及化学法9B.溶菌酶处理法:溶菌酶是专一地破坏细菌细胞壁的酶多用于微生物,对蜗牛酶、纤维酶及植物细胞也适用。如用噬菌体感染大肠杆菌细胞制造DNA时,采用pH8.0的0.1mol/LTris-0.01mo/LEDTA制成2亿/m的细胞悬液,然后加入100μg-1mg的溶菌酶,在37°C保温10min,细菌胞壁即被破坏。C.表面活性剂处理法:表面活性剂的分子中,兼有亲脂性和亲水性基团,能降低水的界面张力,具有乳化、分散、增溶作用。常用有:SDS、氯化十二烷基吡啶、去氧胆酸钠。B.溶菌酶处理法:溶菌酶是专一地破坏细菌细胞壁的酶10生化制药基本技术生化制药技术课件11生化制药基本技术生化制药技术课件12生化制药基本技术生化制药技术课件13生化制药基本技术生化制药技术课件14生化制药基本技术生化制药技术课件15生化制药基本技术生化制药技术课件16生化制药基本技术生化制药技术课件17生化制药基本技术生化制药技术课件18生化制药基本技术生化制药技术课件19生化制药基本技术生化制药技术课件20生化制药基本技术生化制药技术课件21生化制药基本技术生化制药技术课件22生化制药基本技术生化制药技术课件23生化制药基本技术生化制药技术课件24生化制药基本技术生化制药技术课件25生化制药基本技术生化制药技术课件26生化制药基本技术生化制药技术课件27生化制药基本技术生化制药技术课件28生化制药基本技术生化制药技术课件29生化制药基本技术生化制药技术课件30生化制药基本技术生化制药技术课件31生化制药基本技术生化制药技术课件32生化制药基本技术生化制药技术课件33生化制药基本技术生化制药技术课件34生化制药基本技术生化制药技术课件35生化制药基本技术生化制药技术课件36生化制药基本技术生化制药技术课件37生化制药基本技术生化制药技术课件38生化制药基本技术生化制药技术课件39生化制药基本技术生化制药技术课件40生化制药基本技术生化制药技术课件41生化制药基本技术生化制药技术课件42第二章生物制药基本技术生物制药是把生物体内的具有生物活性的基本物质保持原来的结构和功能,又能在含有多种物质的液相或固相中较高纯度的分离出来。它是一项严格、细致、复杂的工艺过程,涉及物理、化学、生物学、工程等方面的知识和操作技术问题:1、标准化方法?2、如何发现或研制新药?·对于一个新研制的生物药物,从查阅文献开始,到探索实验、条件考察(记录客观)、总结制定工艺规程、制定分析鉴定方法,再进行中试放大,全面考察工艺是否成熟,是否稳定等。第二章生物制药基本技术43基本制造方法·1、提取法(Extraction2、发酵法(Zymotechnics)·3、化学合成(Chemicalsynthesize)组织培养法(Tissueculture)5、现代生物技术(Modernbiotechnics):Geneengineering,Enzymeengineering,Cellengineering,proteinEngineeringFermentationengineering基本制造方法44生化制药的六个阶段1.原料的选择和预处理2固液分离3.提取:从原料中经溶剂分离有效成分,制成粗品的工艺过程4.精制纯化:粗制品经盐析、有机溶剂沉淀、吸附、层析透析、超离心、膜分离、结晶等步骤进行精制的工艺过程。5,成品加工/浓缩、干燥及保存、制剂:原料药(精制品)经精细加工制成片剂、针剂、冻干剂、粉剂等供临床应用的各种剂型生化制药的六个阶段45、原料选择和预处理(RawMaterialSelectingandPretreatment)原料选择的基本准则:1、在大量的信息资料和实践经验的基础上,选择目标原料。2、选择有效成分含量高的新鲜材料;3、来源丰富易得4、制造工艺简单易行;5、成本比较低;6、原料的采集不破坏生态环境,选择对环境友好的原材料资源,防止生物入侵。、原料选择和预处理46预处理方法1、动物组织先要剔除结缔组织、脂肪组织等非活性部分植物种子去壳除脂;微生物要进行菌体与发酵液分离等基本操作。便于贮存和运输。2、冷冻法预处理:有些材料要冷冻保存或低温保存,以便抑制微生物和酶的作用。3、有机溶剂除去部分水分:用丙酮或乙醇进行脱水和脱脂有利于贮存。预处理方法47原料的粉碎:在提取前先将大块的原料粉碎或绞碎成适度的粒度,或将细胞破碎,使胞内活性物质充分释放到溶液中,有利于提取或吸附动物脏器组织:常用绞肉机机械法粉碎;植物肉质组织:常用磨碎法;微生物:常用自溶、冷热交替、加砂研磨、超声、加压等处理方法原料的粉碎:在提取前先将大块的原料粉碎或48·1.机械法:组织捣碎机、匀浆器、研钵、球磨机、万能粉碎机、绞肉机、击碎机、刨片机。动物组织多在冰冻状态绞碎、溶浆。2物理法A、反复冻融法:把待破碎的样品冷至-20℃-15℃,使之凝固,然后缓慢的溶解,如此反复操作,大部分动物性细胞及细胞内的颗粒可以破碎B、冷热交替法:将材料投入沸水中,在90℃左右维持数分钟,立即置于冰浴中,使之迅速冷却,绝大部分细胞被破坏。此法多用于细菌或病毒中提取蛋白和核酸·1.机械法:组织捣碎机、匀浆器、研钵、球磨机、万能粉碎49C、超声波处理法:多用于微生物材料,处理的效果与样品浓度、使用频率有关。用大肠杆菌制备各种酶时,常用50~100mg/L菌体浓度,在1~10Kc频率下处理10~15min。操作时注意避免溶液中气泡的存在加压破碎法:加气压或水压,达059~3432MPa(210-350kgf/cm2)的压力时,可使90%以上细胞被压碎。多用于微生物酶制剂的工业制备。C、超声波处理法:多用于微生物材料,处理的效果与503.生化及化学法A.自溶法:将新鲜的生物材料存放在一定的pH和适当温度下,利用组织细胞中自身的酶系将细胞破坏,使细胞内含物释放出来的方法。自溶的温度,动物材料在0-4℃,微生物在室温下。自溶时,需加少量的防腐剂,甲苯、氯仿,以防止外界细菌的污染。*由于自溶时间较长,不易控制,故制造具有活性的核酸和蛋白质时比较少用。3.生化及化学法51B.溶菌酶处理法:溶菌酶是专一地破坏细菌细胞壁的酶多用于微生物,对蜗牛酶、纤维酶及植物细胞也适用。如用噬菌体感染大肠杆菌细胞制造DNA时,采用pH8.0的0.1mol/LTris-0.01mo/LEDTA制成2亿/m的细胞悬液,然后加入100μg-1mg的溶菌酶,在37°C保温10min,细菌胞壁即被破坏。C.表面活性剂处理法:表面活性剂的分子中,兼有亲脂性和亲水性基团,能降低水的界面张力,具有乳化、分散、增溶作用。常用有:SDS、氯化十二烷基吡啶、去氧胆酸钠。B.溶菌酶处理法:溶菌酶是专一地破坏细菌细胞壁的酶52生化制药基本技术生化制药技术课件53生化制药基本技术生化制药技术课件54生化制药基本技术生化制药技术课件55生化制药基本技术生化制药技术课件56生化制药基本技术生化制药技术课件57生化制药基本技术生化制药技术课件58生化制药基本技术生化制药技术课件59生化制药基本技术生化制药技术课件60生化制药基本技术生化制药技术课件61生化制药基本技术生化制药技术课件62生化制药基本技术生化制药技术课件63生化制药基本技术生化制药技术课件64生化制药基本技术生化制药技术课件65生化制药基本技术生化制药技术课件66生化制药基本技术生化制药技术课件67生化制药基本技术生化制药技术课件68生化制药基本技术生化制药技术课件69生化制药基本技术生化制药技术课件70生化制药基本技术生化