01组织学与胚胎学之绪论

组织学与胚胎学

教学课件浙江中医药大学绪论(Introduction)

I.什么是组织学(Histology)?组织学是研究人体正常细微结构及其相关功能的科学。A.微观结构:1.光学显微镜(Lightmicroscope，LM):计量单位是微米(μm)。(1μm=0.001mm)。2.电子显微镜(Electronmicroscope，EM):计量单位是纳米(nm)。(1nm=0.001μm)。B.相关功能:微观结构和其功能相适应，反之亦然。C.人体结构的4个层次:1.细胞(Cell):人体结构的基本结构和功能单位。2.组织(Tissue):由一群结构和功能相同或相似的细胞(及其细胞间质)构成。人体内有4种基本组织：上皮组织，结缔组织，肌组织和神经组织。3.器官(Organ):由组织有机地结合起来而构成。4.系统(System):由结构相似且功能相关的器官构成。胚胎学:研究人体在子宫内正常发育和异常发育的科学。精子卵子胚胎分娩受精卵3-8w9-38w1day-2w联体畸胎7w(Fertilization)II.为什么要学习组织学?1.组织学又叫微观解剖学(Microanatomy)，是解剖学知识的进一步完善。2.结构是功能的基础，学好组织学是学好生理学(Physiology)的基础。3.只有了解正常结构，才能学习其异常变化。因此组织学是病理学(Pathology)的基础。4.组织学成绩不及格，必须补考，重修和留级。

问题

解决方法

观察对象太小

放大

显微镜

观察对象无色，无反差

染色（HE染色）

观察对象生化成分不同

细胞化学、免疫组织化学

观察对象是活体

培养组织胚胎学研究技术III.怎样学习组织学?A.LM技术:分辨率(Resolution)是指能够分辨相邻两点之间的最小距离。LM的分辨率约为200μm。1.切片(Section):将组织切薄使光线可以透过。a.固定(Fixation):为保存新鲜组织的微观结构，尽快将组织浸入到酒精，甲醛，苦味酸，Bouin’s液或Zenker’s液等固定剂中。b.石蜡包埋(Paraffinembedding):*脱水(Dehydration):用浓度逐渐升高的酒精(70~100%)将组织中的水完全置换出来。*透明(Clearing):用二甲苯完全置换出酒精。*浸蜡(Infiltration):在60~62◦C时，用液态石蜡完全置换出二甲苯。室温时石蜡凝固成固态，内含待切组织。c.切片:用切片机将组织切成1~20μm厚的蜡片，然后将其放到温水上，待其完全展开后，裱到有粘附剂的载玻片上。除切片外，还有其他处理组织的方法：*铺片(Wholemount):用于很薄的组织，如肠系膜。*磨片(Groundsection):用于很坚硬的组织，如骨和牙。*涂片(Smear):用于液态组织，如血液，精液和唾液。2.染色(Staining):染料可以将微观结构显示不同的颜色以便观察鉴别。在染色前，需要脱蜡入水，因为染料是水溶性的。a.

最常用的染料是苏木素(Hematoxylin,

H)和伊红(Eosin,

E)。*苏木素是碱性染料，蓝紫色，可以使细胞核等着色。被苏木素着色的结构本身为酸性，具有嗜碱性(Basophilic)。

*伊红是酸性染料，粉红色。可以将大多数细胞的细胞质染成红色。被伊红着色的结构本身为碱性，具有嗜酸性(Acidophilic)。*不易被苏木素和伊红着色的结构具有嗜中性(Neutrophilic)。HE染色：苏木精（Hematoxylin）伊红（Eosin）染色碱性染料将嗜碱性物质（本身酸性）染成蓝色酸性染料将嗜酸性物质（本身碱性）染成红色细胞核中的DNA、RNA细胞质中的RNA细胞质、膜性结构（线粒体、溶酶体、滑面内质网）

肥大细胞的颗粒被甲苯铵蓝(一种蓝色染料)染成紫红色b.

如果某结构显示的颜色和染料本身的颜色不同，该结构具有异染性(Metachromasia)。c.

如果某结构能将银离子还原成银原子，并吸附银原子而使自身显示棕黑色，该结构具有嗜银性(Argyrophilic)。网状纤维具有嗜银性，因此可以用银盐染色来显示。

H&E染色的中等动静脉d.

不同的染色方法，其结果不同。醛复红染色的中等动静脉在染色后，重新进入酒精和二甲苯，最后用中性树胶封片，以便长期保存。*切片:固定

→梯度酒精→二甲苯→石蜡。*染色:石蜡→二甲苯→梯度酒精→水。*保存:水→梯度酒精→二甲苯→中性树胶。B.EM技术:1.

EM可分为透射电镜(TEM)和扫描电镜(SEM)2类。2.

EM的原理和LM相似，但用电子束代替光线，磁场代替玻璃透镜。分辨率约为0.2nm。

3.

EM的组织的制备与LM的相似，但有以下不同:a.

通常使用戊二醛和四氧化锇作双重固定。b.

切片超薄(厚度小于90nm)，塑胶包埋。c.

用重金属盐如醋酸铀或醋酸铅等染色。因此，所有原始的电镜图片都是黑白的。SEM显示巨噬细胞表面扫描电镜图(SEM)脾血窦细胞分裂TEM显示胰腺腺泡细胞内部结构。C.特殊的染色方法:1.组织化学(Histochemistry,

细胞化学)法:通过生物化学的方法在原位产生不溶解的有颜色的反应产物，来显示微细结构的位置，然后用显微镜观察。

PAS反应:用来显示多糖的分布。先用过碘酸(Periodicacid)将多糖氧化，在多糖表面形成戊二醛结构，然后用无色亚硫酸品红(Schiff试剂)还原戊二醛形成紫红色沉淀。肝脏的PAS染色免疫细胞（组织）化学

利用抗原（antigen,Ag），抗体（antibody）特异结合的原理，用已知抗体检测未知抗原的一种方法。免疫细胞化学(Immunocytochemistry)染色法:a.

待测结构或化学物质被看作抗原(Antigen)，通过非常敏感和专一的免疫反应使抗原和被标记的抗体(Antibody)结合，然后显示标记物，在原位产生不溶有色的反应产物，最后用显微镜观察。b.

2种基本染色法:*直接法:第一抗体被标记。*间接法:第一抗体也被看作抗原，而第二抗体被标记。因为信号被放大，因此更加敏感。3.放射自显影(Autoradiography):给细胞所要代谢的物质分子上标记放射性物质如I125等，间隔照相，从而追踪该物质代谢途径。原位杂交原理:根据单链核酸片段能和经过标记的已知互补核酸链（探针）特异性结合的原理定位识别细胞内特异性DNA或RNA序列。digitoxin荧光原位杂交术hybridization原位杂交术（地高辛标记）细胞培养(cellculture)学习组织学应注意的问题:1.体内结构为立体的，三维的，而课本、讲义和显微镜下的结构均为平面的，二维的。2.学习组织学应注意静态与动态、理论与实践相结合。单层立方上皮模式