蛋白质和氨基酸的呈色反应

实验一

蛋白质和氨基酸的

呈色反应

蛋白质和氨基酸的呈色反应共13页，您现在浏览的是第1页!一、实验目的1、了解蛋白质和氨基酸的呈色反应原理2、学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。3、了解呈色反应在定性和定量分析中的应用。蛋白质和氨基酸的呈色反应共13页，您现在浏览的是第2页!（一）双缩脲反应

1、原理

一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。

蛋白质和氨基酸的呈色反应共13页，您现在浏览的是第3页!2、试剂

（1）尿素

（2）10%氢氧化钠溶液

（3）1%硫酸铜溶液

（4）2%卵清蛋白溶液

3、操作

（1）取少量尿素结晶，放在干燥试管中。用微火加热使尿素熔化，尿素放出氨。熔化的尿素开始硬化时，停止加热，形成双缩脲。冷后，加10%氢氧化钠溶液约1ml，振荡混匀，再加1%硫酸铜溶液1滴，再振荡。观察出现的粉红颜色。添加要避免过量硫酸铜，否则，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。（2）向另一试管加卵清蛋白溶液约1ml和10%氢氧化钠溶液约2ml，摇匀，再加1%硫酸铜溶液2滴，随加随摇。观察紫玫瑰色的出现。蛋白质和氨基酸的呈色反应共13页，您现在浏览的是第4页!2、试剂

（1）蛋白质溶液

（新鲜蛋清：水=1:9)

100ml（2）0.5%甘氨酸溶液

（3）0.1%茚三酮水溶液

（4）0.1%茚三酮-乙醇溶液

3、操作

（1）取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液1ml，再各加0.5ml0.1%茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热1~2分钟，观察颜色由粉色变紫色再变蓝。

（2）在一小块滤纸上滴一滴0.5%甘氨酸溶液，风干后，再在原处滴一滴0.1%茚三酮乙醇溶液，在微火旁烘干显色，观察紫红色斑点的出现。剂i]蛋白质和氨基酸的呈色反应共13页，您现在浏览的是第5页!2、试剂（1）鸡蛋清溶液

（2）头发（3）指甲（4）0.5%苯酚溶液（5）浓硝酸

（6）0.3%色氨酸溶液

（7）0.3%酪氨酸溶液

（8）10%氢氧化钠溶液

3、操作

向6个试管中分别按下表加入试剂，观察各管出现的现象，有的试管反应慢可略放置或用微火加热。待各管出现黄色后，于室温下逐滴加入10%氢氧化钠溶液至碱性，观察颜色变化。蛋白质和氨基酸的呈色反应共13页，您现在浏览的是第6页!剂i]

（四）乙醛酸反应1、原理紫红色蛋白质和氨基酸的呈色反应共13页，您现在浏览的是第7页!剂i]

(五)考马斯亮蓝反应

1、原理

考马斯亮蓝G250具有红色和蓝色两种色调。在酸性溶液中，其以游离存在呈棕红色；当它与蛋白质通过疏水作用结合后变为蓝色。

它染色灵敏度高，比氨基黑高3倍。反应速度快，约在2分钟左右时间达到平衡，在室温一小时内稳定。在0.01~1.0mg蛋白质范围内，蛋白质浓度与A595nm值成正比。所以常用来测定蛋白质含量。

2、试剂（1）蛋白质溶液（鸡蛋清：水=1：20）

5ml（2）考马斯亮蓝染液

300ml

考马斯亮蓝G250100mg溶于50ml95%乙醇中，加100ml85%磷酸混匀，配成原液。临用前取原液15ml，加蒸馏水至100ml，用粗滤纸过滤后，最终浓度为0.01%。

蛋白质和氨基酸的呈色反应共13页，您现在浏览的是第8页!剂i]（二）茚三酮反应

蛋白质和氨基酸的呈色反应共13页，您现在浏览的是第9页!剂i]

（三）黄色反应

1、原理

蛋白质和氨基酸的呈色反应共13页，您现在浏览的是第10页!剂i]

管号123456材料（滴）蛋白质溶液4指甲

少许头发

少许0.5%苯酚40.3%色氨酸40.3%酪氨酸4浓硝酸（滴）24040444现象

蛋白质和氨基酸的呈色反应共13页，您现在浏览的是第11页!剂i]

2、试剂：(1)蛋白质溶液鸡蛋清：水＝1：20(2）冰醋酸(3)浓硫酸(分析纯)3、操作向试管中加数滴蛋白质溶液，再加冰醋酸约1ml,倾斜试管，谨慎地沿着管壁加浓硫酸(A．R．)约1ml，使其重叠，勿使两者混合。静置后，观察在两液界面上出现的红紫色环，于水浴中微热，可帮助颜色形成。用20%白明胶作乙醛酸反应。白明胶分子中无色氨酸，所以不呈此反应。蛋白质和氨基酸的呈色反应共13页，您现在浏览的是第12页!剂i]

3、操作

取2支