肉毒梭菌 - Company课件

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肉毒梭菌Clostridiumbotulinum

演讲者:[Maimay.Pan][2013-08-08]06/12/202211肉毒梭菌是什么23456身边的小生物-肉毒梭菌Clostridiumbotulinum06/12/20222肉毒梭菌属于厌氧性梭状芽胞杆菌属，革兰氏染色阳性(老龄菌是阴性），约为4×1μm的大杆菌，多单在，偶见成双或短链，两侧平行，两端钝园，直杆状或稍弯曲，芽胞为卵圆形，大于菌体宽度，位于次极端，使菌体呈匙形或网球拍状，偶有位于中央，常见很多游离芽胞。有4~8根周生鞭毛，运动迟缓，无荚膜。身边的小生物-肉毒梭菌Clostridiumbotulinum06/12/20223培养特性肉毒梭状芽孢杆菌菌落

在固体培养基表面上，形成类圆形，边缘不整齐，约3毫米左右的菌落。菌落半透明，表面一般比较光滑也有的呈颗粒状，界线不明显，向外扩散。呈绒毛网状，常常扩散成菌苔。06/12/20225培养特性在含有肉渣的液体或者半流动培养基中，肉毒梭菌生长旺盛且产生大量气体，A、B、F三型表面浑浊，底部有粉状和颗粒状沉淀，并能消化肉块，变黑有臭味；而C、D、E三型表明清亮，絮片状生长，粘贴于管壁。

在葡萄糖鲜血琼脂平板上，菌落较小，扁平，颗粒状。中央低落，边缘不规则，有的菌落还有大的溶血环。在卵黄琼脂平板上生长，菌落及其培养基周围表面覆盖着特有的彩虹样薄层，但G型没有。06/12/20226肉毒梭菌的生化性状很不规律，即使同型，也常见到株间的差异。肉毒梭菌的生化特性

表1各型肉毒梭菌的生化反应06/12/20227检验方法1、检验标准：GB4789.12-20032、培养基和试剂培养基：庖肉培养基、卵黄琼脂培养基、明胶磷酸盐缓冲液。试剂：肉毒分型抗毒诊断血清、胰酶（活力1:250）、革兰氏染色液。另需实验动物（小白鼠）。

06/12/20228肉毒毒素检测注射液中若有肉毒毒素存在，小白鼠一般多在注射后24h内发病、死亡。液态或固体（明胶磷酸盐缓冲液）样品经过适当处理后离心，取上清液实验

上清液及其胰酶激活处理液

分别进行小白鼠腹腔注射，各3只，每只0.5mL，观察4d

确证试验毒力测定

定型试验

06/12/202210

选取证实含有肉毒毒素的增菌产毒培养物（必要时可重复一次适宜的加热处理）接种卵黄琼脂平板，35℃厌氧培养48h。肉毒梭菌在卵黄琼脂平板上生长时，菌落及周围培养基表面覆盖着特有的虹彩样(或珍珠层样)薄层，但G型菌无此现象。根据菌落形态及菌体形态挑取可疑菌落，接种庖肉培养基，于30℃培养5d，进行毒素检测及培养特性检查确证试验。分离培养（1）毒素检测：试验方法同上。

（2）培养特性检查：接种卵黄琼脂平板，分成两份，分别在35℃的需氧和厌氧条件下培养48h，观察生长情况及菌落形态。肉毒梭菌只在厌氧条件下生长而在需氧条件下不生长。06/12/202212肉毒梭菌属于厌氧性梭状芽胞杆菌属，具有该菌的基本特性，即厌氧性的杆状菌，形成芽胞，芽胞比繁殖体宽，呈梭状，新鲜培养基的革兰氏染色为阳性，产生剧烈细菌外毒素，即肉毒毒素。肉毒梭菌的致病性06/12/20221406/12/202215肉毒梭菌的致病性

肉毒梭菌能产生外毒素即肉毒毒素（大分子蛋白），根据毒素的抗原特异性将其分为A、B、C（1、2）、D、E、F、G七个型别。与毒素型别相对应，肉毒梭菌也分为同样的七个型别。其中A、B、E、F四型毒素对人有不同程度的致病性。

06/12/202216A、B型的分布最广其芽胞广泛分布于自然界，各大洲的许多国家均有检出；

C、D型的芽胞一般多存在于动物的尸体中，或在腐尸附近的土壤中；

E型菌及其芽胞存在于海洋的沉积物、水产品的肠道内，F型菌及其芽胞适应于深水的低温，使E型菌在海洋地区的广泛分布。肉毒梭菌的致病性06/12/202217A型毒素经60℃2分钟加热，差不多能被完全破坏，B、E二型毒素要经70℃2分钟才能被破坏；C、D二型毒素对热的抵抗更大些；C型毒素要经过90℃2分钟加热才能完全破坏，不论如何，只要煮沸1分钟或75℃加热5~10分钟，毒素都能被完全破坏。肉毒梭菌的致病性肉毒毒素对酸性反应比较稳定，对碱性反应比较敏感。某些型的肉毒毒素在适宜条件下，毒性能被胰酶激活和加强。06/12/202218肉毒中毒是由于误食含有肉毒毒素的食品而引起的纯粹的细菌毒素食物中毒。人的肉毒中毒发生并不多，但是发病急、病程发展快、病死率高。肉毒中毒是毒素中毒，潜伏期较短，一般为6至36小时，最长60小时。主要症状有：视力减弱、全身无力、伸舌和张口困难、抬头费力、瞳孔散大、呼吸麻痹等。肉毒梭菌毒素中毒06/12/202220重症患者，如果不及时治疗和抗毒素特异治疗，多在2至4天死亡。肉毒梭菌生长和产毒的最适温度是25至30℃，而在人的体温条件下细菌表现为丝状，几乎不能产毒、芽胞也不会发芽。肉毒梭菌毒素中毒06/12/2022212、肉毒毒素吸收后主要作用于颅神经核，外交神经、肌肉接头处及植物神经末梢，与运动神经终板结合，抑制乙酰胆碱释放，以阻断神经-肌肉接头的兴奋传递，使肌肉收缩运动障碍，发生软瘫，但肌肉仍能保持乙酰胆碱的反应性，静脉注射乙酰胆碱能使瘫痪的肌肉恢复功能。

3、病理变化主要是颅神经核及脊髓前角产生退行性变，使其所支配的应肌群发生瘫痪。脑及脑膜显著充血、水肿，并也广泛的点状出血和血栓形成。肉毒梭菌毒素作用机理06/12/2022231肉毒梭菌是什么2哪里会存在肉毒梭菌3456身边的小生物-肉毒梭菌Clostridiumbotulinum06/12/202224主要通过食物传播，多见于腌肉、腊肉、猪肉及制作不良的罐头食品，部分地区曾因食用豆豉、豆瓣酱、臭豆腐及不新鲜的鱼、猪肉、猪肝而发病肉毒梭菌传播06/12/2022261肉毒梭菌是什么2哪里会存在肉毒梭菌3如何辨别肉毒梭菌污染456身边的小生物-肉毒梭菌Clostridiumbotulinum06/12/202227

临床表现：起病突然，以神经系统症状为主。可有头痛、头晕、晕眩、乏力、恶心、呕吐。眼内外肌谈混可出现眼部症状，如视力模糊、复视、眼睑下垂、瞳孔散大，对光反射消失。重者出现吞咽、咀嚼、发音困难，甚至呼吸困难。肉毒梭菌毒素食物中毒肉毒杆菌食物中毒，亦称肉毒中毒是因进食含有肉毒杆菌毒素的食物而引起的中毒性疾病。临床上以神经系统症状如咽肌瘫痪为主要表现。如求救不及时，病死率较高。

06/12/202228是由于食用被细菌或细菌毒素所污染的食物后引起的急性中毒性疾病。按临床表现分为胃肠型和神经型两大类。

肉毒梭菌毒素食物中毒06/12/202230胃肠型食物中毒

本型食物中毒较常见，其特点为集体发病多见，潜伏期短，以恶心、呕吐、腹泻、腹痛表现为特征，多发生于夏秋季。引起本型食物中毒的细菌主要有沙门菌属、副溶血弧菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、空肠弯曲菌、变形杆菌、耶尔森菌等。

神经型食物中毒

神经型食物中毒是由于进食含有肉毒梭状芽胞杆菌(简称肉毒杆菌)外毒素的食物而引起的中毒性疾病，临床上以神经系统症状如眼肌和吞咽肌麻痹为主要表现。

肉毒梭菌毒素食物中毒06/12/202231胃肠型食物中毒1．流行病学

有不洁饮食史及集体发病的特点。

3．实验室检查

白细胞总数及中性粒细胞增高。大便镜检可见大量白细胞及脓细胞。可疑食品细菌培养可获阳性结果。2．临床表现

潜伏期大多较短，1～24h不等，多数在10h内，表现为腹痛、腹泻、呕吐等胃肠炎症状。初期呕吐物为进食的食物。剧烈呕吐可伴有胆汁和血液。腹泻可有血水样大便，重者出现脱水、酸中毒，甚至休克，部分可有发热等全身中毒症状，病程多在1～3d内结束。

肉毒梭菌毒素食物中毒-诊断06/12/202232神经型食物中毒1．流行病学

有进食可疑食物史。特别是变质的罐头、腌肉等。

3．实验室检查

对可疑食物及粪便进行厌氧菌培养，可能发现肉毒杆菌。可疑食物之浸出物做动物试验，以检测其外毒素。

2．临床表现

潜伏期一般12～36h，可短至2h，长达l0d。潜伏期越短病情越严重。起病急骤，早期表现头晕、头痛、乏力，继而出现视物模糊、复视、眼睑下垂、瞳孔不等大、对光反射减弱等。常有吞咽、发音及呼吸困难等脑神经麻痹症状。体温多正常，意识清楚。大多在6～l0d内恢复。重者多死于中枢性呼吸衰竭。肉毒梭菌毒素食物中毒-诊断06/12/2022331、传染源

家畜、家禽及鱼类为传染源。病菌由动物肠道排出，牙孢污染食品，在缺氧环境下肉毒杆菌大量繁殖，产生大量外毒素。

2、传播途径

主要通过被肉毒杆菌外毒素污染的食物传播，多见于腊肉、罐头等腌制食品或发酵的豆、面制品。

3、易感性

普遍易感，无病后免疫力。肉毒梭菌毒素中毒-传染源06/12/2022341肉毒梭菌是什么2哪里会存在肉毒梭菌3如何辨别肉毒梭菌污染4肉毒梭菌的防治56身边的小生物-肉毒梭菌Clostridiumbotulinum06/12/202235胃肠型食物中毒1．一般治疗及对症处理适当休息，注意水、电解质平衡，有脱水症状者可给予口服补液，不能口服者静脉补液。有酸中毒者适当补充5％碳酸氢钠液或11．2％乳酸钠溶液。有休克者应进行抗休克治疗。腹痛剧烈者给予阿托品0.5mg肌注或溴丙胺太林(普鲁本辛)15～30mg口服。

2．抗茵治疗一般不用抗生素治疗，如有高热或脓血便者可选用喹诺酮类药物：吡哌酸0.5g，3／d口服或诺氟沙星0.2～0.4g，2～3／d口服；庆大霉素8万U肌注，每8h1次或16～24万U，l／d静脉滴注，儿童剂量酌减。其他如氨苄西林．氯霉素亦有较好疗效。

肉毒梭菌的防治06/12/202236神经型食物中毒1．一般对症治疗早期可用2％碳酸氢钠或1:4000高锰酸钾溶液洗胃。洗胃后可注入50％硫酸镁导泻。呼吸困难时给氧，人工呼吸或气管插管。吞咽困难可进行鼻饲或静脉补充营养。

2．抗茵及抗毒素治疗抗毒素血清5万～10万U静脉及肌内各半量注射．必要时6h后重复1次。一般于发病后24h内注射较好。注射前需做过敏试验，阳性者进行脱敏注射。如无继发感染不用抗生素，继发感染者根据菌敏试验选用抗菌药物治疗。

肉毒梭菌的防治06/12/202237患者应严格卧床休息。出院后10～15日内应避免体力劳动。

患者于食后4h内可用5％碳酸氢纳或1：4000高锰酸钾溶液洗胃，服泻剂并作清洁灌肠，以破坏胃肠内尚未吸收的毒素。

吞咽困难者宜用鼻饲及静脉输液。呼吸困难者吸氧，及早气管切开，人工呼吸。还应根据病情给予强心剂及防治继发性细菌感染等措施。

对症治疗

06/12/202238抗毒血清盐酸胍（Guanidine

hydrochloride）35～50毫克/公斤/日，分4～6次口服。中医：祛致病的肉毒杆菌及其肉毒毒素，为整个人体排毒、解毒，恢复整个人体代谢平衡和系统活力，从而消除了种种病症。治疗06/12/202239

1、严重管理与检查食品，特别是腊肉、罐头等腌制食品或发酵的豆、面制品制作和保存。2、禁止出售与食用变质食物。

3、预有同食者发生肉毒毒素中毒时，其余人员应立即给予多价抗度血清预防，1000U—2000U皮下注射，每周1次，共3次。预防06/12/2022401肉毒梭菌是什么2哪里会存在肉毒梭菌3如何辨别肉毒梭菌污染4肉毒梭菌的防治5最近的污染事件6身边的小生物-肉毒梭菌Clostridiumbotulinum06/12/2022412013年8月4日，质检总局公布包括娃哈哈多美滋在内4家企业进口了可能受肉毒杆菌污染的新西兰恒天然集团产品。事件06/12/202242事件06/12/202243/z/rouduganjun/

来源新西兰奶粉里的肉毒杆菌从何而来肉毒杆菌的全名叫肉毒梭状杆菌（也叫肉毒梭菌），是自然界广泛存在的一种细菌，比如土壤、动物粪便中经常可以见到它。它们可以随着空气中漂浮的灰尘、小液滴飘散到四面八方。任何食品的生产环境都不可能无菌，各种微生物都在想法设法渗透进来。奶粉中的肉毒杆菌也很可能是乘着空气中的小颗粒物飞入生产管线，恰巧又逃过了定期消毒程序的清理。乳品标准怎么规定？其实目前为止没有任何规定（我国婴幼儿配方对金葡、沙门和板岐是有规定的）。肉毒杆菌在乳品中并不是常见的污染物，而标准的管理是要考虑成本的，正因如此，各国都不把它写入标准。全世界都没有乳粉中肉毒杆菌的限量标准。事件06/12/202244乳清蛋白粉是采用先进工艺从牛奶分离提取出来的珍贵蛋白质，以其纯度高、吸收率高、氨基酸组成最合理等诸多优势被推为“蛋白之王”。乳清蛋白不但容易消化，而且还具有高生物价、高效化率、高蛋白质功效比和高利用率，是蛋白质中的精品。含有人体所需的所有必需氨基酸，其氨基酸组成模式与骨骼肌中的氨基酸组成模式几乎完全一致，极其容易被人体所吸收。乳清蛋白粉06/12/202245

乳清蛋白乳蛋白酪蛋白大豆蛋白生物价104917774蛋白质功效比3.23.12.52.1净利用率92827661乳清蛋白06/12/202246乳清蛋白的生产06/12/202247膜分离技术发展使得乳清处理更加具有商业可行性，不同等级的膜滤工艺能够分离不同大小的分子。常见的膜分离工艺包括微滤（MF）、超滤（UF）、纳滤（NF）和反渗透（OR）。微滤能够过滤细菌、脂肪和部分蛋白质；超滤能够过滤全部细菌、脂肪和蛋白质；纳滤只允许部分矿物质（盐）通过；而反渗透只允许水分子通过。卡伯特乳品厂采用的复合式膜分离系统，唯一产生的副产品就是牛奶中的水分，而这些水也可以用来清洗厂房等等。乳清蛋白的生产06/12/202248乳清首先经过净化和除奶酪细粒（cheesefine），再巴氏杀菌，然后储存于10000加仑的奶罐中。随后，乳清经过超滤，蛋白质浓缩到35%。浓缩蛋白经过色谱分离，分离出乳铁蛋白。再经过渗滤（diafiltration），蛋白质含量提高到80%。整个膜分离系统的可编程序逻辑控制器通过以太网连接向中央控制室反馈数据。被分离出蛋白质的乳清渗透物首先被注入巴氏杀菌设备，然后经过反渗透处理除去2/3的水分。然后经过浓缩的乳清渗透物通过降膜TVR蒸发器（fallingfilmTVRevaporator）将总固体含量提高到60%。接下来，浓缩乳清渗透液被注入结晶槽（crystallizers），卡伯特乳品厂共配备5个热量6000加仑的结晶槽，结晶槽夹层里充满乙二醇，浓稠的浓缩乳清渗透物就在这里产生乳糖结晶。在结晶过程中，要持续不断的搅拌18~24小时，就像在搅拌粘稠的糖浆。乳清蛋白的生产06/12/202249从乳清中分离乳糖，并且将乳糖干燥制成细腻的颗粒是一项难以掌握的工艺。乳清蛋白的生产06/12/202250结晶以后，浓缩物被注入多段式干燥器（multi‐stagedryingsystem），外界空气通过丙烷被加热，然后与喷入干燥塔内的雾化浓缩渗透液混合。干燥浓缩渗透液的干燥塔高达90英尺，浓缩渗透液在5000~6000psi的压强下被喷入干燥塔内，并且被雾化。干燥时间与干燥塔的高度有关，干燥浓缩乳清蛋白的干燥塔要小得多，高度只有14英尺，直径最大处仅10英寸，而干燥浓缩乳清渗透液的干燥塔其直径达10英尺。乳清蛋白的生产06/12/202251气旋能够重新控制住大部分渗透物，使其不会落在干燥器底部，干燥器底部的一个同步传输带则通过液床干燥器（fluidbeddryer）来运输渗透物。随后，干燥物在气压的作用下以每小时5400磅的速率被注入一个储存罐。这时，乳清渗透物的水分含量被降低到3%，而乳清渗透液原始的水分含量是94%。卡伯特乳品厂每年可生产3500万磅干燥乳清渗透物。乳清蛋白的生产06/12/202252奶粉生产工艺分干法、湿法两种奶粉的生产工艺06/12/202253乳粉的一般生产工艺流程如下：

原料验收→预处理与标准化→浓缩→喷雾干燥→冷却储存→包装→成品奶粉的生产工艺06/12/202254原料乳的验收及预处理

配料

乳粉生产过程中，除了少数几个品种(如全脂乳粉、脱脂乳粉)外，都要经过配料工序，其配料比例按产品要求而定。配料时所用的设备主要有配料缸、水粉混合器和加热器。

均质

生产全脂乳粉、全脂甜乳粉以及脱脂乳粉时一般不必经过均质操作，但若乳粉的配料中加入丁植物油或其他不易混匀的物料时，就需要进行均质操作．均质时的压力一般控制在14～21MPa，温度控制在60℃为宜。均质后脂肪球变小，从而可以有效地防止脂肪上浮，并易于消化吸收。杀菌

具体应用时，不同的产品可根据本身的特性选择合适的杀菌方法。日前最常见的是采用高温短时灭菌法，因为使用该方法牛乳的营养成分损失较小，乳粉的理化特性较好。

奶粉的生产工艺06/12/202255真空浓缩

牛乳经杀菌后立即泵入真空蒸发器进行减压(真空)浓缩，除去乳中大部分水分(65％)，然后进入于燥塔中进行喷雾干燥，以利于产品质量和降低成本。

—般要求原料乳浓缩至原体积的1／4，乳干物质达到45％左右。浓缩后的乳温—般47～50℃，不同的产品浓缩程度如下：

全脂乳粉

浓度：11.5～13波美度；相应乳固体含量；38％～42％。

脱脂乳粉

浓度：20～22波美度；相应乳固体含量：35％～40％。

个脂甜乳粉

浓度：15～20波美度，相应乳固体含量：45％～50％，生产大颗粒奶粉时浓缩乳浓度提高。

喷雾干燥

浓缩乳中仍然含有较多的水分，必须经喷雾干燥后才能得到乳粉，各种喷雾干燥脱脂乳粉见图2。冷却

在不设置二次干燥的设备中，需冷却以防脂肪分离，然后过筛(20～30目)后即可包装。在设有二次干燥设备中，乳粉经二次干燥后进人冷却床被冷却到40℃以下．再经过粉筛送入奶粉仓，待包装。奶粉的生产工艺06/12/2022561肉毒梭菌是什么2哪里会存在肉毒梭菌3如何辨别肉毒梭菌污染4肉毒梭菌的防治5最近的污染事件6生活中的应用身边的小生物-肉毒梭菌Clostridiumbotulinum06/12/202257美国上流社会、好莱坞……总之，一切有爱美之心的人们中间就一直流传着这样一个热门话题：

用肉毒杆菌毒素去除皱纹，使自己看起来更年轻。据说，有立竿见影的神奇疗效。

身边的小生物-肉毒梭菌Clostridiumbotulinum06/12/202258来由：军队常常将这种毒素用于生化武器。人们食入和吸收这种毒素后，神经系统将遭到破坏，出现头晕、呼吸困难和肌肉乏力等症状。身边的小生物-肉毒梭菌Clostridiumbotulinum06/12/202259科学家和美容学家正是看中了肉毒杆菌毒素能使肌肉暂时麻痹这一功效。医学界原先将该毒素用于治疗面部痉挛和其他肌肉运动紊乱症，用它来麻痹肌肉神经，以此达到停止肌肉痉挛的目的。身边的小生物-肉毒梭菌Clostridiumbotulinum06/12/202260在治疗过程中，医生们发现它在消除皱纹方面有着异乎寻常的功能，其效果远远超过其他任何一种化妆品或整容术。

因此，利用肉毒杆菌毒素消除皱纹的整容手术应运而生，并因疗效显著而在很短的时间内就风靡整个美国。Botox06/12/202261将少量稀释过的肉毒杆菌毒素注入人体，毒素将在24至48小时内发挥作用，使面部肌肉暂时麻痹和停止收缩，从而达到拉紧面部皮肤，消除面部皱纹的目的。但要想一直保持面部光滑无皱纹，只打一针是不够的，因为毒素将慢慢失去效用。人们需要每4个月左右到医院去打上一支“毒针”才能常葆青春。

Botox06/12/202262目前这种