疫苗预防脊髓灰质炎课件

第二十章生物制品分析第二十章生物制品分析1本章主要内容生物制品的分类生物制品的质量要求生物制品鉴别试验、检查内容本章主要内容生物制品生物制品的生物制品2起源与发展

10世纪时，中国发明了种痘术，用人痘接种法预防天花，这是人工自动免疫预防传染病的创始。种痘不仅减轻了病情，还减少了死亡。17世纪时，俄国人来中国学习种痘，随后传到土耳其、英国、日本、朝鲜、东南亚各国，后又传入美洲、非洲。1796年英国人E.詹纳发明接种牛痘苗方法预防天花，他用弱毒病毒（牛痘）给人接种，预防强毒病毒（天花）感染，使人不得天花。此法安全有效，很快推广到世界各地。牛痘苗可算作第一种安全有效的生物制品。起源与发展10世纪时，中国发明了种痘术，用319世纪中期，“免疫”概念已基本形成。1885年法国人L.巴斯德发明狂犬病疫苗，用人工方法减弱病毒的致病毒力，做成疫苗，被狂犬咬伤的人及时注射疫苗后，可避免发生狂犬病。巴斯德用同样方法制成鸡霍乱活疫苗、炭疽活疫苗，将过去以毒攻毒的办法改为以弱制强。19世纪末日本人北里柴三郎和德国人贝林，E.(A.）用化学法处理白喉和破伤风毒素，使其在处理后失去了致病力，接种动物后的血清中和相应的毒素，这种血清称为抗毒素，这种脱毒的毒素称为类毒素。

抗原—抗体反应概念的出现，有助于临床诊断。这些为微生物和免疫学发展奠定了基础，继续发展出各种生物制品，在预防疾病方面越发显得重要，是控制和消灭传染病不可缺少的步骤之一。19世纪中期，“免疫”概念已基本形成。4中国生物制品发展史

中国生物制品发展史5疫苗预防脊髓灰质炎课件61978年WHO作出扩大免疫规划(EPI），目的是对全球儿童实施免疫。EPI是用四种疫苗预防六种疾病，即卡介苗预防结核病；麻疹活疫苗预防麻疹；脊髓灰质炎疫苗预防脊髓灰质炎；百白破三联预防百日咳、白喉和破伤风，有计划地从儿童开始，使世界儿童都得到免疫。1981年，中国响应WHO的号召，实行计划免疫，按要求用国产四种疫苗预防六种疾病。1978年WHO作出扩大免疫规划(EPI）7生物制品及检定规程草案（1952年）生物制品制造检定规程（1959年）中国生物制品规程6版（2000年）中华人民共和国药典三部（2010年）生物制品质量标准的发展中国生物制品规程并入2005年版中国药典生物制品及检定规程草案（1952年）生物制品制造检定规程（182010版《中国药典》第三部生物制品131种,新增28种，修订103种内容：凡例、通则、各论、附录和索引各论收载：疫苗；抗毒素及抗血清；血液制品；重组DNA制品；体内诊断制品；其他制品2010版《中国药典》第三部生物制品131种,新增29

生物制品（biologicalproducts）：以微生物、细胞、动物或人源组织和体液等为原料，应用传统技术或现代生物技术制成，用于人类疾病的预防，治疗和诊断的制品。生物制品（biologicalproducts）：10第一节生物制品的分类根据生物制品的用途分为三类：预防类：细菌类疫苗、病毒类疫苗和联合疫苗治疗类：抗毒素及免疫血清、血液制品、细胞因子及DNA重组技术制品和单克隆抗体诊断类：体内诊断类和体外诊断类第一节生物制品的分类根据生物制品的用途分为三类：11根据所采用的材料、制法或用途不同，可分为四类:疫苗类药物抗毒素及抗血清类药物血液制品重组DNA制品根据所采用的材料、制法或用途不同，可分为12（一）疫苗类药物

定义:用病毒或立克次体接种于动物、鸡胚，或经组织培养后加以处理制造。分类:（1）细菌类疫苗：由有关细菌、螺旋体或其衍生物制成的减毒活疫苗、灭活疫苗、重组DNA疫苗、亚单位疫苗等。如：皮内注射卡介苗、吸附破伤风疫苗、乙型脑炎减毒疫苗、人用狂犬病疫苗等。

（一）疫苗类药物13

（2）减毒类疫苗：由病毒、衣原体、立克次体或其衍生物制成的减毒活疫苗、灭活疫苗、重组DNA疫苗、亚单位疫苗等。如：口服脊髓灰质炎减毒疫苗麻疹减毒活疫苗风疹减毒活疫苗腮腺炎减毒活疫苗重组乙型肝炎疫苗甲型肝炎减毒活疫苗流感全病毒灭活疫苗（2）减毒类疫苗：由病毒、衣原体、立克次体或其衍生物14

（3）联合疫苗：指两种或两种以上疫苗原液按特定比例配合制成的具有多种免疫原性的灭活疫苗或活疫苗。如：伤寒副伤寒甲乙联合疫苗吸附百白破联合疫苗麻疹腮腺炎联合减毒疫苗

（3）联合疫苗：指两种或两种以上疫苗原液按15

（4）双价疫苗及多价疫苗：由单一型抗原成分组成的疫苗通称单价疫苗。有两个或两个以上同一种但不同型抗原合并组成的含有双价或多价抗原成分的一种疫苗，则分别称为双价疫苗或多价疫苗。如双价肾综合征出血热灭活疫苗。（4）双价疫苗及多价疫苗：由单一型抗原成分组成16（二）抗毒素及抗血清类药物

定义：凡用细菌类毒素或毒素免疫马或其他大动物所得的免疫血清叫抗毒素或抗毒血清。如：破伤风抗毒素白喉抗毒素肉毒抗毒素凡用细菌或病毒本身免疫马或其他大动物所得的免疫血清叫抗菌或抗病毒血清。如：抗蝮蛇毒血清抗五步蛇毒血清抗狂犬病血清（二）抗毒素及抗血清类药物定义：凡用17（三）血液制品定义：由健康人的血液或经特异免疫的人血浆，经分离、提纯或重组DNA技术制成的血浆蛋白成分，以及血液细胞有形成分统称为血液制品。如：人血白蛋白人免疫球蛋白人凝血因子（三）血液制品定义：由健康人的血液或经特异免18（四）重组DNA制品（四）重组DNA制品19重组DNA制品的类别：细胞因子类生长因子类激素类酶类疫苗类诊断制品重组DNA制品的类别：20生物制品的特点◆◆都是来自生物体或通过生物手段获得◆分子量都较大：几十KD～几千KD，不是固定值化学结构式难以确认，单单是光谱分析方法难以进行◆在生产过程中需要全面的质量控制往往需要进行安全性检查热源、过敏、异常毒性、致突变、生殖毒性◆生物制品的特点◆◆都是来自生物体或通过生物手段获得◆分子量都21第二节生物制品的质量要求1、安全性：使用安全，副作用小。2、有效性：使用后能产生相应的效力。3、可接受性：生产工艺、储运条件、成品的药效、稳定性、外观、包装、使用方法和价格是可接受的。第二节生物制品的质量要求1、安全性：使用安全，副作用小。22生物制品的全程质量控制生物制品的全程质量控制23疫苗预防脊髓灰质炎课件24

生物制品品名定义、组成及用途基本要求制造检定（原液,半成品,成品）保存运输及有效期使用说明（仅预防类含此项）化学药品品名化学结构、分子式性状鉴别检查含量测定药典三部各论内容药典二部各论内容生物制品化学药品药典三部各论内容药典二部各论内容25

第三节鉴别试验

免疫学法：体外抗体抗原试验（1）免疫双扩散法在琼脂糖凝胶板上按一定距离打数个小孔，在相邻的两孔内分别加入抗原与抗体，若抗原、抗体互相对应，浓度、比例适当，则一定时间后，在抗原与抗体孔之间形成免疫复合物的沉淀线。第三节鉴别试验26（2）免疫电泳法将供试品通过电泳分离成区带的各抗原，然后与相应的抗体进行双相免疫扩散，当两者比例合适时形成可见的沉淀弧。（3）免疫印迹法以供试品与特异性抗体结合后，抗体再与酶标抗体特异性结合，通过酶学反应的显色，对供试品的抗原特异性进行检查。（2）免疫电泳法27（4）免疫斑点法同免疫印迹法，具体操作有所不同。（5）酶联免疫法（ELISA法）让抗体与酶复合物结合，然后通过显色来检测。（4）免疫斑点法28第四节生物制品检查内容理化检定安全检定效力检定第四节生物制品检查内容理化检定29（一）物理性状的检查1、外观通过特定的人工光源进行目测，不同的制品有不同的要求。2、真空度及溶解速率3、装量容量法测试。（一）物理性状的检查1、外观30（二）蛋白质含量测定检测有效成分，计算纯度和比活度。凯氏定氮法、酚试剂法和双缩脲法（二）蛋白质含量测定检测有效成分，计算纯度31（三）防腐剂和灭活剂含量测定非有效成分，控制限度

（四）纯度检查电泳法或高效液相色谱法。（三）防腐剂和灭活剂含量测定非有效成分，控制限度32（五）相对分子质量或分子大小的测定对提纯的蛋白质制品和多糖疫苗测定分子质量或大小。凝胶层析法、SDS法和超速离心分析法

（六）其他水分测定、酸碱度、氯化钠测定等（五）相对分子质量或分子大小的测定对提纯的蛋白质33（七）安全检查1、安全检查对象菌毒种和主要原材料、半成品（包括原液）和成品。（七）安全检查342、安全检查内容（1）过敏性物质的检查1）过敏性试验2）牛血清含量的测定3）血型物质的检测（2）杀菌、灭活和脱毒检查无菌试验、活毒检查和解毒试验。2、安全检查内容35（3）残余毒力和毒性物质的检查1）残余毒力检查2）无毒性检查3）毒性检查4）防腐剂检查（4）外源性污染检查1）野毒检查2）热原试验3）乙型肝炎表面抗原（3）残余毒力和毒性物质的检查36（八）生物制品的效力测定

生物学方法:利用生物体来测定待检品的生物活性或效价的一种方法。1、免疫力试验2、活菌数和活病毒滴度测定3、血清学试验（八）生物制品的效力测定37

一般杂质检查（同化学药）

特殊杂质检查：生物污染物、产品相关杂质和工艺添加剂

（九）杂质检查一般杂质检查（同化学药）

特殊杂质检查：生物38特殊杂质检查1、宿主细胞蛋白残留量的检查目的：控制异源蛋白的含量以防超量后引起机体免疫反应测定法：酶联免疫吸附剂测定法－ELISA2、外源性DNA残留量的检查目的：防止外源性DNA对人类的危害测定法：DNA探针杂交法、荧光染色法特殊杂质检查1、宿主细胞蛋白残留量的检查393、残余抗生素的检查目的：控制生物制品制备时抗生素的用量测定法：抑菌试验4、产品相关杂质的检查－同系物、异构体、降解产物等3、残余抗生素的检查40第五节生物制品质量控制实例人血白蛋白质量控制规程参考ChP2010三部正文第五节生物制品质量控制实例人血白蛋白质量控制规程41小结生物制品分类生物制品质量控制要求鉴别试验检查内容小结生物制品分类42练习与思考1、生物制品特殊杂质检查、安全性检查分别包括哪些项目？2、生物制品包括哪几类？3、与化学合成药物的分析相比，生物药物的分析有何特点？练习与思考43

第二十章生物制品分析第二十章生物制品分析44本章主要内容生物制品的分类生物制品的质量要求生物制品鉴别试验、检查内容本章主要内容生物制品生物制品的生物制品45起源与发展

10世纪时，中国发明了种痘术，用人痘接种法预防天花，这是人工自动免疫预防传染病的创始。种痘不仅减轻了病情，还减少了死亡。17世纪时，俄国人来中国学习种痘，随后传到土耳其、英国、日本、朝鲜、东南亚各国，后又传入美洲、非洲。1796年英国人E.詹纳发明接种牛痘苗方法预防天花，他用弱毒病毒（牛痘）给人接种，预防强毒病毒（天花）感染，使人不得天花。此法安全有效，很快推广到世界各地。牛痘苗可算作第一种安全有效的生物制品。起源与发展10世纪时，中国发明了种痘术，用4619世纪中期，“免疫”概念已基本形成。1885年法国人L.巴斯德发明狂犬病疫苗，用人工方法减弱病毒的致病毒力，做成疫苗，被狂犬咬伤的人及时注射疫苗后，可避免发生狂犬病。巴斯德用同样方法制成鸡霍乱活疫苗、炭疽活疫苗，将过去以毒攻毒的办法改为以弱制强。19世纪末日本人北里柴三郎和德国人贝林，E.(A.）用化学法处理白喉和破伤风毒素，使其在处理后失去了致病力，接种动物后的血清中和相应的毒素，这种血清称为抗毒素，这种脱毒的毒素称为类毒素。

抗原—抗体反应概念的出现，有助于临床诊断。这些为微生物和免疫学发展奠定了基础，继续发展出各种生物制品，在预防疾病方面越发显得重要，是控制和消灭传染病不可缺少的步骤之一。19世纪中期，“免疫”概念已基本形成。47中国生物制品发展史

中国生物制品发展史48疫苗预防脊髓灰质炎课件491978年WHO作出扩大免疫规划(EPI），目的是对全球儿童实施免疫。EPI是用四种疫苗预防六种疾病，即卡介苗预防结核病；麻疹活疫苗预防麻疹；脊髓灰质炎疫苗预防脊髓灰质炎；百白破三联预防百日咳、白喉和破伤风，有计划地从儿童开始，使世界儿童都得到免疫。1981年，中国响应WHO的号召，实行计划免疫，按要求用国产四种疫苗预防六种疾病。1978年WHO作出扩大免疫规划(EPI）50生物制品及检定规程草案（1952年）生物制品制造检定规程（1959年）中国生物制品规程6版（2000年）中华人民共和国药典三部（2010年）生物制品质量标准的发展中国生物制品规程并入2005年版中国药典生物制品及检定规程草案（1952年）生物制品制造检定规程（1512010版《中国药典》第三部生物制品131种,新增28种，修订103种内容：凡例、通则、各论、附录和索引各论收载：疫苗；抗毒素及抗血清；血液制品；重组DNA制品；体内诊断制品；其他制品2010版《中国药典》第三部生物制品131种,新增252

生物制品（biologicalproducts）：以微生物、细胞、动物或人源组织和体液等为原料，应用传统技术或现代生物技术制成，用于人类疾病的预防，治疗和诊断的制品。生物制品（biologicalproducts）：53第一节生物制品的分类根据生物制品的用途分为三类：预防类：细菌类疫苗、病毒类疫苗和联合疫苗治疗类：抗毒素及免疫血清、血液制品、细胞因子及DNA重组技术制品和单克隆抗体诊断类：体内诊断类和体外诊断类第一节生物制品的分类根据生物制品的用途分为三类：54根据所采用的材料、制法或用途不同，可分为四类:疫苗类药物抗毒素及抗血清类药物血液制品重组DNA制品根据所采用的材料、制法或用途不同，可分为55（一）疫苗类药物

定义:用病毒或立克次体接种于动物、鸡胚，或经组织培养后加以处理制造。分类:（1）细菌类疫苗：由有关细菌、螺旋体或其衍生物制成的减毒活疫苗、灭活疫苗、重组DNA疫苗、亚单位疫苗等。如：皮内注射卡介苗、吸附破伤风疫苗、乙型脑炎减毒疫苗、人用狂犬病疫苗等。

（一）疫苗类药物56

（2）减毒类疫苗：由病毒、衣原体、立克次体或其衍生物制成的减毒活疫苗、灭活疫苗、重组DNA疫苗、亚单位疫苗等。如：口服脊髓灰质炎减毒疫苗麻疹减毒活疫苗风疹减毒活疫苗腮腺炎减毒活疫苗重组乙型肝炎疫苗甲型肝炎减毒活疫苗流感全病毒灭活疫苗（2）减毒类疫苗：由病毒、衣原体、立克次体或其衍生物57

（3）联合疫苗：指两种或两种以上疫苗原液按特定比例配合制成的具有多种免疫原性的灭活疫苗或活疫苗。如：伤寒副伤寒甲乙联合疫苗吸附百白破联合疫苗麻疹腮腺炎联合减毒疫苗

（3）联合疫苗：指两种或两种以上疫苗原液按58

（4）双价疫苗及多价疫苗：由单一型抗原成分组成的疫苗通称单价疫苗。有两个或两个以上同一种但不同型抗原合并组成的含有双价或多价抗原成分的一种疫苗，则分别称为双价疫苗或多价疫苗。如双价肾综合征出血热灭活疫苗。（4）双价疫苗及多价疫苗：由单一型抗原成分组成59（二）抗毒素及抗血清类药物

定义：凡用细菌类毒素或毒素免疫马或其他大动物所得的免疫血清叫抗毒素或抗毒血清。如：破伤风抗毒素白喉抗毒素肉毒抗毒素凡用细菌或病毒本身免疫马或其他大动物所得的免疫血清叫抗菌或抗病毒血清。如：抗蝮蛇毒血清抗五步蛇毒血清抗狂犬病血清（二）抗毒素及抗血清类药物定义：凡用60（三）血液制品定义：由健康人的血液或经特异免疫的人血浆，经分离、提纯或重组DNA技术制成的血浆蛋白成分，以及血液细胞有形成分统称为血液制品。如：人血白蛋白人免疫球蛋白人凝血因子（三）血液制品定义：由健康人的血液或经特异免61（四）重组DNA制品（四）重组DNA制品62重组DNA制品的类别：细胞因子类生长因子类激素类酶类疫苗类诊断制品重组DNA制品的类别：63生物制品的特点◆◆都是来自生物体或通过生物手段获得◆分子量都较大：几十KD～几千KD，不是固定值化学结构式难以确认，单单是光谱分析方法难以进行◆在生产过程中需要全面的质量控制往往需要进行安全性检查热源、过敏、异常毒性、致突变、生殖毒性◆生物制品的特点◆◆都是来自生物体或通过生物手段获得◆分子量都64第二节生物制品的质量要求1、安全性：使用安全，副作用小。2、有效性：使用后能产生相应的效力。3、可接受性：生产工艺、储运条件、成品的药效、稳定性、外观、包装、使用方法和价格是可接受的。第二节生物制品的质量要求1、安全性：使用安全，副作用小。65生物制品的全程质量控制生物制品的全程质量控制66疫苗预防脊髓灰质炎课件67

生物制品品名定义、组成及用途基本要求制造检定（原液,半成品,成品）保存运输及有效期使用说明（仅预防类含此项）化学药品品名化学结构、分子式性状鉴别检查含量测定药典三部各论内容药典二部各论内容生物制品化学药品药典三部各论内容药典二部各论内容68

第三节鉴别试验

免疫学法：体外抗体抗原试验（1）免疫双扩散法在琼脂糖凝胶板上按一定距离打数个小孔，在相邻的两孔内分别加入抗原与抗体，若抗原、抗体互相对应，浓度、比例适当，则一定时间后，在抗原与抗体孔之间形成免疫复合物的沉淀线。第三节鉴别试验69（2）免疫电泳法将供试品通过电泳分离成区带的各抗原，然后与相应的抗体进行双相免疫扩散，当两者比例合适时形成可见的沉淀弧。（3）免疫印迹法以供试品与特异性抗体结合后，抗体再与酶标抗体特异性结合，通过酶学反应的显色，对供试品的抗原特异性进行检查。（2）免疫电泳法70（4）免疫斑点法同免疫印迹法，具体操作有所不同。（5）酶联免疫法（ELISA法）让抗体与酶复合物结合，然后通过显色来检测。（4）免疫斑点法71第四节生物制品检查内容理化检定安全检定效力检定第四节生物制品检查内容理化检定72（一）物理性状的检查1、外观通过特定的人工光源进行目测，不同的制品有不同的要求。2、真空度及溶解速率3、装量容量法测试。（一）物理性状的检查1、外观73（二）蛋白质含量测定检测有效成分，计算纯度和比活度。凯氏定氮法、酚试剂法和双缩脲法（二）蛋白质含量测定检测有效成分，计算纯度74（三）防腐剂和灭活剂含量测定非有效成分，控制限度

（四）纯度检查电泳法或高效液相色谱法。（三）防腐剂和灭活剂含量测定非有效成分，控制限度75（五）相对分子质量或分子大小的测定对提纯的蛋白质制品和多糖疫苗测定分子质量或大小。凝胶层析法、SDS法和超速离心分析法

（六）其他水分测定、酸碱