犬猫弓形虫病分析课件

犬猫弓形虫病分析

宠医053谢娇指导老师张斌江苏畜牧兽医职业技术学院摘要本文通过对上海爽佳宠物诊所41例临床病例（主要为犬、猫）进行随机抽取血液样本以提取血清，用层析法-弓形虫IgM试纸条进行免疫检测，通过对检测线的识别来判别检测其为阳性或阴性。分析检测结果来统计家养犬、猫的弓形虫感染情况，结果表面有41%的宠物携带弓形虫，对人畜危害较大。关键词弓形虫检测犬猫1.材料与方法

1.1材料血清：临床随机抽取犬与猫的血液样本来提取弓形虫抗体试剂盒：该试剂盒由杭州科彤畜牧兽医研究所、杭州亨力动物医院总经销，试剂盒置2-8℃可保存数月，可常温运输，不可冷冻10ul微量移液枪、5ML注射器、冰箱计时器：检测时计算试剂与样本的反应时间1.2方法

1.2.1准备工作对可疑临床病例进行饲养管理等个方面的详细记录。准备好抽血所要用到的酒精棉球、橡皮带等工具材料。1.2.2血清样本的制备先用注射器抽取可疑临床病例的前或后肢静脉血液2～3ML，于试管中，放入离心机中离心2000r/min，10min。离心机分离出血清（无溶血），生理盐水作1比1稀释血清后使用，或置冰箱待用。1.2.3方法（1）检测前将待检血清样本从冰箱取出，在室温或37℃恒温箱中平衡10分钟。（2）将试剂盒置室温静置数分钟。（3）检测前将检测卡，试剂，样本和对照品平衡至室温（15-30℃）。（4）检测卡放置于洁净的水平面上。（5）检测卡上矩形检测窗口底部蓝带下面的样本膜区加10ul样本液。需将样本完全润湿膜区（这会使固定化抗原最大限度保证捕捉到抗体，增强检测的特异灵敏度）。检测所用到的10ul吸液管使用说明：压挤吸液管上部，然后释放吸液，确保吸液水平线恰在黑色标志处。接触至装置样本区域的膜上，轻轻释放出液体使之全部被加入到膜上。（6）垂直滴加试剂满3滴（100-120ul/滴）到试剂孔（7）5-10分钟读取结果。1.3结果判定结果判定标准（请参照上述插图）阳性：检测线和对照线均出现。（注：低效价的抗体出现的检测线有时会较浅阴性；只出现检测线。无效：未出现对照线。此结果出现应使用新的检测装置重新检测3分析与讨论

3.1病原学

弓形虫属顶端复合物亚门、孢子虫纲、真球虫目，细胞内寄生性原虫。其生活史中出现5种形态，即滋养体（速殖子）；包囊（可长期存活于组织内），呈圆形或椭圆形、直径10～200μm、破裂后可释出缓殖子、裂殖体；配子体和卵囊。前3期为无性生殖，后2期为有性生殖。弓形虫生活史的完成需双宿主：在终宿主（猫与猫科动物）体内，上述5种形成俱存。卵囊随动物粪便排出，在适宜温度（24℃）和湿度环境中，约经2～4天发育成熟，抵抗力强，可存活1年以上，如被中间宿主吞入，则进入小肠后子孢子穿过肠壁，随血液或淋巴循环进入全身各组织细胞内以纵二分裂法进行增殖。3.2流行病学3.2.1感染来源：各种患病及带虫动物都是感染来源，其中急性患病动物的肉、乳、分泌物及排泄物中含有滋养体，慢性动物的肉、眼及脑中含有包囊。猫感染后经3-20天开始排出卵囊，每天排出10-100万，并持续5-14天。3.2.2易感动物：人、各种畜禽及多种野生动物均可感染，但以幼龄动物易感性最高。3.2.3感染途径：主要经口感染，滋养体型对绵羊和人也可通过胎盘感染。3.2.4地理分布及季节动态：该病存在于各地，无明显季节性，但春季和秋季发病较多。猫弓形虫病症状①急性病例：肺炎症状，持续高热、厌食、嗜睡、呼吸急促，咳嗽等。也有出现脑炎症状、早产和流产的病例。②慢性弓形虫病时常复发。厌食、中枢神经障碍、心肌疾患，肝损伤，流产或死胎，以及经抗生素治疗无效的发热、死前出现呼吸困难。某些急性、慢性患病猫出现虹膜炎。弓形虫病和犬瘟热鉴别诊断的方法：弓形虫病原为龚地弓形虫（原虫），呈稽留热型（体温一般为40-42），典型症状为肺炎（带有脓性鼻液）、弓形虫性肌炎和肌肉麻痹；犬瘟热病原为犬瘟热病毒（副黏病毒科麻疹病毒属，RNA病毒），呈双相热（先升高到40随后降低，最后持续在40以上），以肺炎（脓性鼻液，鼻尖开成结痂）、神经炎症反应（肌肉震颤）、角腊翳、溃疡及足垫增厚、变硬为典型症状。弓形虫广泛寄生犬，而且有些犬出去时体内便带有病原，一般在犬免疫状态良好条件下不会发病，但可终生存在于机体，而仅有极少数能够表现临床症状。当幼龄犬在断奶后失去母源抗体而自身免疫功能还不够完善时，便容易发病，该阶段是犬发生各种传染病的最主要时期。此时可能单独发生弓形虫病，也可能与犬瘟热同时发生。3.4检测技术弓形虫病诊断方法大致可分为三类：一是病原学的检查方法如镜检、滋养体分离法、卵囊分离法等；二是免疫学的方法，如ELISA、补体结合实验、免疫印迹和免疫层析等方法；三是主要以分子生物学术如分子杂交技术、DNA体外扩增技术即聚合酶链反应等为基础发展起来的方法，如控针技术、免疫PCR和巢式PCR等。常用的确诊弓形虫感染的方法①体液涂片镜检：显微镜下找弓形虫速殖子或孢囊。临床上可取标本有骨髓、脑脊液、腹水、痰等。该法虽检出率低，但一经发现即可确诊。②血清学检查：采用酶联免疫吸附试验检测血清弓形虫IgM型抗体，该法微量、快捷、敏感和特异性高，且在感染早期出现。③PCR检测弓形虫特异性DAN片段，该法灵敏度高，但有时出现假阳性，可作为辅助诊断。④有条件单位，采用动物接种或组织培养物分离弓形虫。所取动物最好采用刚断乳乳鼠，观察动物的发病情况，分时间段解剖小鼠，观察病变组织，直接镜检或作血清检测特异性抗体、抗原复合物。在预防动物弓形虫病中，应限制养畜（禽）场养猫，防止饲料被猫污染；采取灭鼠措施，切断鼠-猫-畜禽的传递环节；用屠宰场废弃物和动物尸体做动物饲料时，必须经高温无害处理；发现患病动物应隔离治疗；在疾病流行期，可应用磺胺类药物预防，控制疾病的爆发流行。为避免人体感染，在接触患病动物、尸体、病料后应严格消毒；养成反前洗手的卫生习惯，不食生肉；限制养猫，减少与猫的接触机会。参考文献[1]蒋金书.动物医生手册[M].北京：中国农业出版社，2005年[2]张秀美.新编兽医实用手册[M].山东科文技术出版社，2004年[3]李慧珠.弓形虫与弓形虫病[J].生物学通报,2002,(05)[4]陈西岐.犬猫的弓形虫病[J].农家参谋,2004,(11)[5]吕元