生物化学实验讲义及实验报告

实验一生物化学实验原理和方法(PrinciplesandMethodsofBiochemical 实验二3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖和总糖(tativeDeterminationofReducingSugarandTotalSugarwith3,5-DinitrosalicylicAcid) 实验三Folin—酚法测定蛋白质含量(tativeDeterminationofProteinContentwiththeFolinPhenolReagent) 实验四蛋白质含量的测定-考马斯亮蓝G-250法(DeterminationofProteinbytheCoommassieBrilliantBlueG-250) 实验五聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳法鉴定胰岛素(VerticalGelElectrophoreticAssessmentof 实验六核酸的定量测定—定磷法(DeterminationofNucleicAcidbyInorganicPhosphate 实验七RNA含量的测定(苔黑酚法）(tativeDeterminationofRNAbytheOrcinolReaction) 实验八温度对酶活性的影响(EffectofChangesinTemperatureonEnzymeActivity)… 实验九pH对酶活性的影响(EffectofChangesinpHonEnzyme 实验十激活剂与抑制剂对酶促反应的影响(EffectsofActivatorandInhibitorontheEnzyme-catalyzedReaction) 实验十一维生素C的定量测定(tativeDeterminationofVitamin 实验十二谷丙转氨酶活性测定(ActivityDeterminationofGlutamicPyruvicTransaminase 附录一生物化学实验设备使用说 附录二DYCZ-24DN型垂直板电泳仪使用说明 实验一生物化学实验原理和方法 PrinciplesandMethodsofBiochemical一.实验内容学习规学习规洗衣粉，肥皂，洗洁精，去污 用于一般去污强酸，强碱，尿 去除蛋白质，核酸铬酸洗 去除油污及有机水（自来水，蒸馏水 用来冲洗容器洗涤方法：洗涤程序：泡→洗（→泡）→判断洗净的标准：洗净的玻璃仪器管壁光洁、清亮，无污渍；被水湿润烘干：尽量倒净仪器的水，将其倒立放在托盘上，放入烘箱烘干。普通仪器用80-100℃，容量分析仪器用37-40℃。干燥：体积小的容器急需干燥时，可用此法。洗净的仪器先用少量一次再少乙洗涤吹干不加热。规格（ml,μl：0.1，0.2，0.5，1.0，2.0，5.0，10.0ml;0~1000μl。①观察吸管有无破损，污渍。食指游离。下部的尖嘴待移取的液体中,左手拿洗耳球。取液：①垂直入液。②入液深度适中。③洗耳球吸取。④取液高度高于23m放液至容器：①刻度吸管垂直。②容器倾斜45℃。③使溶液自然流入容器，注意吹与不吹。待溶液不再流出时，等15s后再取出移液管。一根吸管只微量移液器的使用量程的调节:在调节量程时，如果要从大体积调为小体积，则按照正常的调节方法，逆时针旋转旋钮即可；但如果要从小体积调为大体积时，则可先顺时针旋转刻度旋钮至超过量程的刻度，再回调至设定体积，这样可以保证量取的最高精确度。在该过程中，千万不要将按钮旋出量程，否则会卡住内枪头（吸液嘴）的装配:正确的方法是将移枪（器）垂直枪头中，稍微用力左右微微转动即可使其紧密结合。很多人会使劲地在枪头盒子上敲几下，这时错误的做法，因为这样会导致移液枪的配件（如弹簧）因敲击产生的瞬时撞击力而变得松散，甚至会导致刻度调节旋钮卡住。移液的方法:吸取液体时，移液器保持竖直状态，将枪头液面下2－3毫米。在吸液之前，可以先吸放几次液体以润湿吸液嘴（尤其是要吸取粘稠或密度与水不同的液体时。用大拇指将按钮按下至第一停点，然后慢慢松开按钮回原点。吸取液体时一定要缓慢平稳地松开拇指，绝不允许突然松开，以防将溶液吸入过快而冲入取液器内腐蚀柱塞而造成漏气。接着将按钮按至第一停点排出液体，稍停片刻继续按按钮至第二停点吹出残余的液体。最后松开按钮。移液器的正确放置:使用完毕，可将其竖直挂在移液枪架上，但要别掉下来。当移液器枪头里有液体时，切勿将移液器水平放置或倒置，以免液体倒流腐蚀活塞弹簧。如不使用，要把移液枪的量程调至最大值的刻度，使弹簧处于松弛状态以保护弹簧。移液器未装吸头时，切莫移液。移液器严禁吸取有强挥发性、强腐蚀性的液体（如浓酸、浓碱、有机物等。严禁使用移液器吹打混匀液体。⑶容量瓶（volumetricflask配制准确浓度需要容量瓶。先检查瓶塞是否严密;固体物质，先要在烧杯内溶解，再转移到容量瓶中,用毕后应立即用水冲洗干净。试漏:给滴定管装满水后夹在滴定管架上静置1－2分钟。若有漏水应更滴定管内装入标准溶液后，要将尖嘴内的气泡排出。方法是：把橡皮管向上弯曲，出口上斜，玻璃珠，使溶液从尖嘴快速喷出，气泡即可随之进行滴定操作时，用左手的拇指和食指捏住玻璃珠靠上部位，向手心方溶液出现瞬间颜色变化，随着瓶子的摇动很快。当接近终点时，颜色变化较慢，这时应逐滴滴入溶液，摇匀后由溶冲洗锥形瓶内壁，摇匀，如颜色变化不再，即为终点。⑸过滤过滤时要使盛有待过滤液体的烧杯的烧杯嘴与倾斜的玻璃棒相接触;玻璃棒的下端要与滤纸为三层的那一边相接触;漏斗的颈部要与接收滤液的接⑹匀浆器用匀浆器研磨动物组织之前必须把组织剪成很小的小块;将剪碎的组织置于管中，再套入研杆来回研磨，上下移动。适用于量少和动物脏器组织。使用匀浆器的时候都要用匀浆缓冲液,缓冲液在磨样的时候只加一小部分，其⑴旋涡仪(vortexer)⑵水浴箱(waterbathbox⑶天平托盘天平(platformbalance)；光电天平(photoelectric balance)；电子天平(electronicbalance)⑷离心机⑸分光光度计(spectrophotometer⑹电泳仪(electrophoresisapparatus) 2-3引言本实验的原理,2结果与AuthorandCo-:：三.思考题玻璃仪器洗涤干净的标准是什么如何正确使用移液管和移液枪如何正确使用托盘天平、电子天平如何正确使用分光光度计四.参考文献现物学基础实验指导,等,大学生物化学实验原理和方法,李建武等编,1994生物化学实验,等编,4版科学实验 Exp.2tativeDeterminationofReducingSugarandTotalSugarwith3,5-DinitrosalicylicAcid单糖和某些寡糖含有游离的醛基或酮基，有还原性，属于还原糖；而多糖和蔗糖等属于非还原性糖。利用多糖能被酸水解为单糖的性质可以通过测还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈橘红色，在540nm处有最大吸收。在一定范围内还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量和总糖的含量。 还原糖

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黄 橘红标准葡萄糖溶液（1mg/ml：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，溶于蒸馏水并定容至100ml，混匀，4℃冰箱中保存备用。2.3,5-二硝基水杨酸(DNS试剂:6.3gDNS262ml2mol/LNaOH500ml185g5g5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000ml，贮于棕色瓶中备用。6mol/LHCl:250mlHCl（35%-38500ml6mol/LNaOH:24gNaOH100ml:碘-5g碘，10g100ml试管、吸管、容量瓶、量筒、研钵、锥形瓶、玻璃漏斗、白瓷板、pH试61进行操作。以吸光光度为纵坐标，各标准液浓表 试 管0123450蒸馏水0DNS试剂蒸馏水葡萄糖含量00.5g3ml，在研钵中磨成匀浆，转入锥形瓶中，并用约30ml的蒸馏水冲洗研钵2-3次，洗出液也转入锥形瓶中。于50℃水浴中保温0.5h，不时搅拌，使还原糖浸出。将浸出液（含沉淀）用滤纸过滤，滤纸上的沉淀用20ml蒸馏水洗一次，再过滤,将二次过滤的上清液合并定容至100ml，混匀，作为还原糖待测液。取1ml进行还原糖的测定（表2）。准确称取0.5g面粉，加蒸馏水约3ml，在研钵中磨成匀浆，转入锥形瓶12ml2-36mol/LHCl10ml，搅拌均匀后在沸水中水解0.5h1-2滴置于白瓷板上，加1滴碘-碘化钾溶液检查水解是否完全。解完全，则不显蓝色。水解完毕，冷却置室温后用6mol/LNaOH溶液中至中性，然后用蒸馏水定容至100ml，过滤，取滤液10ml，用蒸馏水定容至100ml，取1ml总糖水解液，测定其还原糖含量（表2。2试 管067待测样品液0蒸馏水00DNS试剂蒸馏水C1ω（还原糖 —————ω（总糖 ————— C2：水解后还原糖的质量浓度(mg/ml)V1:样品中还原糖提取液的体积(ml)V2:样品中总糖提取液的体积(ml)m1:测定还原糖的样品质量(mg)m2:测定总糖的样品质量(mg)生物化学实验,等编,4版科学实验 Exp.3tativeDeterminationofProteinContentwiththeFolinPhenolReagent一、实验原理：蛋白质浓度可从其物理化学性质，如折射率、、紫外吸收等测定而得知，也可用化学方法，如定氮、双缩脲反应、Folin-酚试剂反应等方法来求Folin-酚法也是测定蛋白质浓度的常用方法。此法操作简便、迅速，不需要复杂而昂贵的设备，能适合一般的要求。Folin-酚法灵敏度100倍。Folin-酚法所用的试剂由两部分组成。试剂甲相当于双缩脲试剂，可与蛋白质中的肽键起显色反应，试剂乙（磷钨酸和磷钼酸混合液）在碱性条件下极不稳定，易被酚类化合物还原而呈兰色反应（钼兰和钨兰混合物，由于蛋白质中含有带酚基的酪氨酸故有此呈色反应。所呈兰色深浅与蛋白质浓度成正比，可作比色测定。此法除测定蛋白质浓度外，也适用于酪氨酸和色氨酸的定量测定。其不足之处是此反应受多种因素干扰。人：使用前稀释1001250.1N氢氧化钠溶液润湿，溶解，加蒸馏水到250毫升，则配成500微克/毫升的标准酪蛋白溶液。Folin-酚试剂甲：由下述四种溶液配制而成。①4%碳酸钠溶液液，在使用前，将①与②等体积混合配成碳酸钠-用Folin-酚试剂乙滴定标准氢氧化钠溶液（1N左右，以标定Folin-酚试剂乙的酸度，以酚酞为指示剂。当溶液颜色由红色变为紫红、紫灰、再突然转变成墨绿时，即为终点。该试剂酸度一般为2N左右，此为液。也可以用氢氧化钠去滴定Folin-酚试剂乙，但终点较不易掌握。此时溶液颜色由浅黄试管及试管架、吸量管（5；1；0.5毫升、721法和步骤将6支干净试管，按下表加入标准酪蛋白溶液、蒸馏水、Folin-酚试10Folin-酚试剂乙,30℃保温（或室温下放置）30分钟,测定A500nm。表5.1234560蒸馏水0Folin-酚试剂甲Folin-酚试剂乙以光吸收值(A)为纵坐标，以酪蛋白溶液浓度为横坐标，绘制出酪蛋白的标准曲线。取2支试管，分别加入0.2ml稀释液，再加入0.8毫ml蒸馏水使1毫升。其余操作与“标准曲线”相同。（约0.5%左右、胍（0.5%左右、硫酸钠（1、硝酸钠（1（0.5%、乙醇（5%、乙醚（5%、（0.5%）等溶液对显色无影响。这些物质浓度高时，必须做校正曲线。含硫酸铵的溶液只需加浓碳酸钠-氢氧化钠溶液即可显色测定。若样品酸度较高，显色后色浅，则必须提高碳酸钠-氢氧化钠溶液的浓度1—2倍。另外，此法也适用于酪氨酸和色氨酸的定量测定。Folin-酚乙试剂在酸性条件下较稳定，而Folin-酚甲试剂是在碱性条件下与蛋白质作用生成碱性的铜-蛋白质溶液。当Folin-酚乙试剂加入后，应迅速稀释的倍数应使蛋白质含量在标准曲线范围之内，若超过此范围则需将情稀。四、实验结果将样品的光吸收值在标准曲线上查出相应的标准酪蛋白溶液的浓度，再折算成每毫升稀释液含蛋白质的微克数。然后乘以稀释倍数，得出每毫升未稀释含蛋白质的克数。最后，再折算成临床化验上通用的单位——克%，即100毫升中蛋白质的克数。五、思考题1、Folin-酚法的优缺点是什么？哪些因素可干扰Folin-酚法测定蛋白含六、参考文献现物学基础实验指导,等,大学生物化学实验原理和方法,李建武等编,1994生物化学实验,等编,4版科学 Exp.4DeterminationofProteinbytheCoommassieBrilliantBlueG-250一、实验原理当与蛋白质结合后呈蓝色。在一定范围内，蛋白质-考马斯亮蓝G-250复合物在595nm下的吸光度与蛋白质含量成正比。G-250结合在几分钟的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温1h内保持稳定。该法1976Bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏Lowry法还4倍，可Bradford法的突出优点是：灵敏度高：蛋白质－复合物具有很高的消光系数，因此蛋白质测测定快速、简便：与蛋白质的结合，大约只需2分钟，结合物的1Lowry法那样费时和严格地控制时干扰物质少。如干扰Lowry法的K+、Na+、Mg2+离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不干扰此测定法。由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此仍有一些物质干扰此法的测定，主要的干扰物质有：去污剂、TritonX-100、十二烷基硫酸钠（SDS）和0.1M的NaOH，少量的去污剂可通过用适当的二、实验用品⑴标准溶液：牛白蛋白0.9NaCl⑵标准蛋白质溶液：称取200mg牛白蛋白，用0.9%NaCl溶液溶解并定容至2000ml,制成0.1mg/ml的原液。⑶0.01%考马斯亮G-250染液：称0.1g考马斯亮蓝G-250，溶于50ml90%乙醇中，加入85%（m/v）的磷酸100ml，最后用蒸馏水定容至1000ml。此溶液不宜久存，在常温中可放置1-2个月。法和6.123456700.9%NaCl溶液考马斯亮蓝G-250染液蛋白质量0四、实验结果Excel绘制，并计算出样品液中的蛋白质含量。要求很迅速地测定一系列试管（30支）生物化学实验原理和方法,李建武等编,1994ThetoolsofBiochemistry,Terrance生物化学实验,等编,4版科学 VerticalGelElectrophoreticAssessmentof一、目的二、原单体丙烯酰胺（Acr）和甲叉双丙烯酰胺（Bis）二者决定胶孔大电荷效应:pH条件下蛋白质所带电荷不同在一定的电场条BpHC:原理完全相同,操作方法也相似，不同的仅仅在于圆盘电泳凝胶是装在凝胶三、实验器材1、电泳仪（2001×（50μl750mlX1（X2四、实验试剂1、丙烯酰胺（CH2=CH-CONH2）（Acr3、N,N,N’,N’-四甲基乙二胺（TEMED4、N,N’-亚甲基双丙烯酰胺（交联剂，简称Bis5、过硫酸铵（A.R.）(聚合用催化剂8.936.66.7；5.988.36.109、0.05%10、20%11、染色液：0.25gR25091ml50甲醇，9ml12、7%13、1mol/L五、操然后斜插板挤紧玻璃板。如果是做单板胶，另一侧用单胶Acr3.2g，Bis16mg16mg1TEMED2滴（2mm）,混匀。用吸管吸取分离胶，2/3左右，上30-60min即可凝聚，凝聚后，用小滤纸条吸TEMED1滴，混匀。用吸管吸取浓缩胶加到分离胶的上面，直至浓缩胶的高度为1.5cm，这时将梳板，注意梳齿的边缘不能带入气丙烯酰胺会流入孔格内，再慢慢聚合后，使不平，将影响电泳条带的形10mg/ml50μl20%200V，待指示剂把垂直平板电泳槽上的玻璃轻轻，将凝胶取下，放染色缸内染色20-30min7%室温高时，过硫酸铵可以少加些，加10mg本试验所用分离胶的浓度为 %，样品不同所用分离胶的浓度不同，本试验分离胶的量适用于 的垂直平板电泳槽，实验时可根据电泳槽大小一定量的分离胶浓缩胶的浓度 3%-4%，不同样品所用浓缩胶的浓度不同实验六核酸的定量测定—定磷法Exp.6DeterminationofNucleicAcidbyInorganicPhosphateAssay一、实验原理4当有还原剂存在时，Mo6Mo4，此4价钼再与试剂中MoO4—结合Mo(MoO4)2Mo3O8钼兰Mo(MoO4)2或Mo2O8二、实验用品6mol/LH2SO410mol/LH2SO42.5%10%⑸定磷试剂 在使用前将上述试剂按以下比例混合,蒸馏水：6NH2SO4：=2：1：1：1（V/V恒温水浴箱，分光光度计,试管。0.5ml50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，配制成含磷量为10ug/ml的标准无机磷溶液。试剂。加毕，摇匀，于45℃水浴保温15分钟，冷却，用分光光度计分别测定其光吸收值（A660nm。9012345标准磷溶液0蒸馏水定磷试剂3.0ml3.0ml，摇匀，45℃保温15分钟，冷却。测其A660nm。3.0ml3.0ml，4515分钟，冷却，测其四、实验结果数（X。按下试计算样品中核酸百分含量。X/ml)核酸样品重量五、思考题六、参考文献现物学基础实验指导,等,大学生物化学实验原理和方法,李建武等编,1994生物化学实验,等编,3版或4版科学实验七RNA含量的测定(苔黑酚法）Exp.7tativeDeterminationofRNAbytheOrcinolReaction一、实验原理当RNA与浓盐酸共热时，即发生降解，RNA分子中的核糖基转变成α-呋，后者与3，5-二羟（苔黑酚）反应，在高铁离子的催化下可反应生670nm10～100μg/ml范围内其光吸收值与RNA浓度有线形关系，可用比色法测定。二、实验用品RNA2、RNARNA10.0mg，用少量蒸馏水溶解（如不溶，pH7.010.0mlmlRNA1mg。刻度，此溶液为100μg/ml。10～100μg/mL苔黑酚-100mg100ml浓盐酸中，再加入100mgFeCl3·6H2O，临用时配置。71.5cm×15cm8支（0.50ml2支，1.0ml支，2.0ml3支）法和冷却，然后在670nm波长出测定光吸收值。0123450RNA量0蒸馏水0苔黑酚试剂四、实验结果RNA的μg数，按下式计算待测样品的RNA的含量。w=（m1W:RNA的质量百分数（%；m1样液中测得的RNA的质量（μg；m2：五、思考题生物化学实验原理和方法,李建武等编,1994ThetoolsofBiochemistry,Terrance生物化学实验,等编,3版或4版科学实验八温度对酶活性的影响Exp.8EffectofChangesinTemperatureonEnzyme一、实验原理2降低甚至丧失，一般在比较低温的范围内（例如0~40。温度对酶蛋白变性的影速变性，可使酶的活剧下降甚至完全不可逆的丧失其活性（见图99-1。因此，每种酶都有它的最适温度(optimumtemperature)，在这个温度下，酶表现出最高的。植物或微生物体内存在的酶，其最适温度在50℃左右，如温度C=O+H2O

奈斯勒试 碘化双铵（橙黄色二、实验用品（1）pH6.6奈斯勒（Nessler）55毫升蒸馏水中，加红沉淀不再溶解时，再加40毫升50%氢氧化钠溶液，稀释至100毫升，混匀，先保温5分钟。12.123550~5℃(水浴5540~50℃(水浴5590~100℃(水浴四、实验结果哪些因素对酶的最适温度有影响六.参考文献现物学基础实验指导,等,大学生物化学实验原理和方法,李建武等编,1994实验九pHExp. EffectofChangesinpHonEnzyme一、实验原理pHpH范围内，酶才pHpH(optimumpH)，图 pH-酶活性关系pH1.5~2.5pHpH为8左右，而十二指肠附近肠道的pH值近乎中性。本实验使用唾液淀粉酶(salivaryamylase)pH对酶活性的影响。唾液二、实验用品（3）0.1M试管及试管架、2ml5ml50ml法和取8个50毫升锥形瓶，。按下表中的比例，用吸量管加入0.2M磷酸氢二钠溶液和0.1M柠檬酸溶液，pH5.0—8.0的8种缓冲溶液。13.pH5.0～8.00.2M磷酸氢二钠0.1M柠檬酸12345678实验结果成为橙黄色时，向所有试管依次添加1~2滴碘化钾-碘溶液，充分混匀。加碘化钾溶液时间间隔，由第一管起，也均为1分钟，摇匀，观察各试管内容物出其最适pH值。五、思考题六、参考文献现物学基础实验指导,等,大学生物化学实验原理和方法,李建武等编,1994实验 EffectsofActivatorandInhibitorontheEnzyme-catalyzedReaction一、实验原理唾液淀粉酶可催化淀粉逐步水解，生成分子大小不同的糊精及最后水解成麦芽糖。淀粉及糊精遇碘各呈不同的颜色反应。直链淀粉(即可溶性淀粉)遇碘呈蓝色，糊精按分子的大小遇碘可呈蓝色、紫色，褐色和红色。最小的有些物质可作为激活剂，能提高酶活性，有些物质可作为抑制剂，能降低酶活性，也能影响淀粉被水解的程度。因此，通过与碘产生的颜色反应判二、实验用品唾液(进食前的)100~400倍.（1）0.10.1克，先用少量的水调成糊状，然后缓缓倾入沸蒸馏水中，边加变搅，最后以沸蒸馏水稀释至100ml。（2）1％NaCl溶液：1gNaCl100ml（3）0.1％CuSO4溶液：0.1gCuSO4100ml（4）碘化钾-碘溶液:10g20g100ml蒸馏水，然后稀释到1000ml，摇匀，贮于棕色瓶中。3支试管,表17.1231％11蒸馏水1333稀释唾液11137℃,15min111四、实验结果1、2、3管各有何用意六、参考文献生物化学实验原理和方法,李建武等编,1994生物化学实验,等编,3版或4版科学实验十一维生素CExp.11tativeDeterminationofVitamin一、实验原理C（抗坏血酸）L-糖构型的不饱和多羟化合物，属于水溶性2，6-2，二、实验用品NaHCO352mg5ml5ml1%2，6-2，6-二氯酚靛酚钠溶液的浓度，最后将26-二氯酚靛酚钠溶液调整至每毫升相当于抗坏血酸（3）标准抗坏血酸溶液：溶解100毫克纯抗坏血酸粉状结晶于1%草酸中，再稀释到500毫升。50ml三角瓶、乳钵、5ml微量滴定管、10ml吸量管、量筒、50ml量瓶10.542克，样品必须50ml2~31%盐酸稀释滤液至刻度并混匀，每次量取5或10ml放入小锥形瓶内进行滴定。20.001N2，6-二氯酚靛酚钠溶液（兰色）15—30秒不褪色。滴定过程宜迅速，不超过2分钟。要使结果准确，滴定使用的2，6-二氯酚靛酚钠不应少于1ml或多于4ml。假如滴定结果在1~4ml以外，则必须增1HCl510ml作空白对照滴定。ABC0.088100100g样品中维生素C的mg数。DD=滴定所取的被检液ml数；五、思考题现物学基础实验指导,等,大学生物化学实验,等编,3版或4版科学实验十 谷丙转氨酶活性测Exp.12ActivityDeterminationofGlutamicPyruvic一、实验原理酸进行转氨作用时，都由其专一的转氨酶催化，它们的最适pH接近7.4。在各 目前普遍采用的是法，在本方法丙转氨酶作用于丙氨酸和酮4.5mlpH7.40.1mol/L磷酸缓冲液，制成10%肝匀浆，冰冻保存。（1）0.1M磷酸缓冲液0.1MKH2PO450ml，0.1NNaOH39.3ml，再加蒸10.7ml，混匀（2）酸钠标准液（2.0umol/ml：29.2mgDL10ml至完全溶1NNaOH1NHCl校正pH=7.40.1M磷酸缓冲100ml1.0ml含α2.0200微克分子。将A·R纯2，4—二肼19.8mg加入200ml锥形瓶内，加100ml1NHCl012345磷酸缓冲溶液(0.1M2，4-二肼/将试管置于37℃水浴中保温，平衡管内外温度，向各管内加0.5ml2，4—二200.4NNaOH5升，然后再向第2号试管内加0.1毫升，再继续保温20分钟，保温冷却时0.4NNaOH5520nm进行比色测定未知管的光吸收值（在显色后30分钟至2小时内其色度稳定。见下表:12稀释肝匀浆0稀释肝匀浆0NaOH(0.4N)四、实验结果杯中，加入两倍体积的（无水）混匀后，置冰箱中数小时，则有白色酸多用α－DL氨基酸（因较L－氨基酸价廉如采用α－L－氨基酸，则需按α－DL氨基酸的用量减半。五、思考题六、参考文献 大学生物化学实验,等编,4版科 附录一生物化学实验设备使用说一、离心机的使用、（LD4-2医用离心机厂时，转速开关或G值旋钮应放在低档位，启动后再逐步调节到所需要的数值。一次工作后，须将旋纽调至低档位再次工作，在高转速挡或高G值档直接均密度超 时；转头受到高温时X光拍片检各种离心管的拉力强度和伸长度都不同，应按需要选用，离心管可由许对于低温离心样品，应先将空的转头在2000rpm预冷一定时间，预冷5亿转处理真空泵油一次，工作500h应检查驱动电机炭刷，最好用吸尘用1500h左右应驱动部位轴承并加上高速润滑油脂，转轴与转头接合部应1～2次，每次0．5h，保证各部位的正常运转。二、紫外分光光度计（UV-759精密科学仪器预热仪器将选择开关置于“T”，按下“电源”开关，钨灯点亮；按下1”挡，灵敏度不够时再逐渐升高。但换挡改T=0%轻轻旋动零旋钮，使数字显示