临床医学检验新技术

可编辑可编辑精品精品荧光定量PCR所谓实时荧光定量PCR所谓实时荧光定量PCRPCR荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。技术原理：将标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后，完成高TaqmanCT临床应用价；地中海贫血、血友病、性别发育异常、智力低下综合症、胎儿畸形等优生优流式细胞术流式细胞术（FCM）是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定点，成为当代最先进的细胞定量分析技术。技术原理仪器中一系列光学系统（透镜、光阑、滤片和检测器等）收集荧光、光散射、光临床应用学研究，并已开始用于细菌鉴定，病毒感染细胞的识别和艾滋病感染者T4细胞的记数。FCMFCM治疗有重要作用。目前FCM用的各种单克隆抗体试剂已经发展到了百余种，可以对各种血细胞和组织细胞的表型进行测定分析。一、一、在血液病诊断和治疗中的应用FCM通过对外周血细胞或骨髓细胞表面抗原和DNA的检测分析，对白血FCM通过对外周血细胞或骨髓细胞表面抗原和DNA的检测分析，对白血病等各种血液病的诊断、预后判断和治疗起着举足轻重的作用。二、在血栓与出血性疾病中的应用FCM可以通过单抗免疫荧光标记(血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa,CD62，CD63病等各种血液病的诊断、预后判断和治疗起着举足轻重的作用。二、在血栓与出血性疾病中的应用FCM可以通过单抗免疫荧光标记(血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa,CD62，CD63等)监测血小板功能及活化情况，有利于血栓栓塞性疾病的诊断和治疗。而用FCMFCMFCM灵敏度高的优点。酶联免疫分析技术酶联免疫吸附测定(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay,ELISA)技20世纪70技术原理后加入酶反应底物，根据底物被酶催化产生的颜色及其吸光度(A)值的大小进行定性或定量分析的方法。的常用方法。临床应用：ELISA法是免疫诊断中的一项新技术，现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。1寄生虫感染如阿米巴、弓形虫、锥虫等。2、蛋白质如各种免疫球蛋白，肿瘤标志物如甲胎蛋白、癌胚抗原、前列腺碱性磷酸酶，激素如hCG,FSH,TSH,hGH,酶如肌酸激酶-MB，其他蛋白质如铁蛋白等。3、非肽类激素如T3,T4，雌二醇，皮质醇等。4、药物治疗心脏病药物如地高辛，抗哮喘药物如茶碱，抗生素如庆大霉素等。免疫印迹技术免疫印迹法(Westernblotting)是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合的杂交技术基本原理：免疫印迹与DNASouthernNC时间分辨荧光分析法时间分辨荧光分析法（Timeresolvedfluoroisnmunoassay,TRFIA）是近十年发展起来的非同位素免疫分析技术，是目前最先进的免疫检测技术。技术原理：使用三价稀土离子（如Eu3+时间分辨荧光分析法时间分辨荧光分析法（Timeresolvedfluoroisnmunoassay,TRFIA）是近十年发展起来的非同位素免疫分析技术，是目前最先进的免疫检测技术。技术原理：使用三价稀土离子（如Eu3+Tb3+Sm3Dy3+）作为示踪物，通过这些稀土离子与具有双功能结构的螯合剂以及抗原形成稀土离子-螯合剂-抗原螯合物。当标记抗原、待测抗原共同竞争抗体，形成免疫复合物，由射的荧光强度，从而确定待测抗原的量。性增强液，稀土离子从免疫复合物中解离出来，和增强液中的β-二酮体、三正辛基氧化膦、TritonX-100万倍。零以后，再测定长寿命标记物的荧光。TRFIA一、TRFIA法在内分泌学中的应用但不能产生抗体，不具有免疫原性，它们属于半抗原。对这些半抗原的测定，一二、TRFIA在肿瘤学中的应用对一些完全抗原，它们大多是既有免疫反应性又有免疫原性的蛋白质类，主要包括促甲状腺激素、血清胰岛素、血清癌胚抗原、血清甲胎蛋白、乙型肝炎表面抗原等，主要采用非竞争性TRFIA法进行测定。三、TRFIA法在免疫学中的应用某些免疫细胞（如NKLAKT）的活性，可以用TRFIA检测。四、TRFIA法在微生物学中的应用目前TRFIA已广泛应用于乙型肝炎病毒、脑炎病毒、流感病毒、呼吸道合胞体病毒、副粘病毒、风疹病毒、马铃薯病毒、轮状病毒、人类免疫陷病毒、出血热病毒和梅毒螺旋体的抗原抗体以及某些细菌和寄生虫抗体的检测。最近,潘利华等用 TRFIA法进行了人血清中丙型肝炎病毒抗体(Anti-HCV)的检测，效果明显高于酶联免疫法。飞行时间质谱技术十个，甚至数百个蛋白，同时极大的提高了诊断的灵敏度和特异性。技术原理U型飞行之后，达到传感器。不同离子到达传感器的时间不同，借此来选择m/z。通常的假设认为离子只能带一个电荷，如此，得到的信号，直接对应检测到离子的相对原子质量。临床应用：在肿瘤早期诊断中的研究进展——液体芯片-飞行时间质谱技术在的生物标记物进行鉴定。化学发光免疫分析化学发光免疫分析(chemiluminescenceimmunoassay,CLIA),是将具有一项最新免疫测定技术。灵敏度高是化学发光免疫分析关键的优越性。技术原理的氧化,形成一个激发态的中间体,当这种激发态中间体回到稳定的基态时,同时发射出光子(hM),利用发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体)直接标记在抗原(化学发光免疫分析)或抗体(免疫化学发光分析)上,或酶作用于发光底物。临床应用：用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物肿瘤标记物、内分泌功能、传染性疾病等多种检测项目。生物芯片DNA组织等技术原理DNA、RNA、多肽、蛋白质以及其他生物成分（寡核苷cDNAgenomic、多肽、抗体、抗原等）固着于硅片、玻璃片（珠塑料片（珠、凝胶、尼龙膜等固相递质上形成的生物分子点阵。临床应用：从正常人的基因组中分离出DNA与DNA芯片杂交就可以得出标准图谱。从病人的基因组中分离出DNA与DNA芯片杂交就可以得出病变图谱。通过比较、分析这两种图谱，就可以得出病变的DNA信息。这种基因芯片诊断技术以其快速、高效、敏感、经济、平行化、自动化等特点，将成为一项现代化诊断新技术。免疫浊度法免疫浊度法抗原定量检测。技术原理应液的浊度随之增加，与一系列的标准品对照，即可计算出受检物的含量。临床应用：1G、A、M，κ、λ，C3、C42、心血管疾病监测:载脂蛋白A、B，脂蛋白(a)，C-反应蛋白等。3、炎症状况监测:C-反应蛋白，a-酸性糖蛋白，触珠蛋白，铜蓝蛋白等。4、风湿性疾病检测：ASO、RF、CRP5、肾脏功能检测：尿微量白蛋白，a-微球蛋白，β-微球蛋白，转铁蛋白，免疫球蛋白G等。6、营养状态监测：白蛋白，前白蛋白，转铁蛋白等。7、凝血及出血性疾病的检测：抗凝血酶Ⅲ，转铁蛋白，触珠蛋白等。8、血脑屏障监测：脑脊液白蛋白，免疫球蛋白G、A、M。免疫荧光标记技术免疫荧光标记技术性的荧光素（异硫氰荧光黄或罗丹明B200)用化学方法结合在特异的抗体或抗的结合是高度特异的，所以只要知道其中的一种因子，也就知道了另一种因子。技术特点：12、利用了物理、化学、组织学、细胞学、生物学等综合性技术，使免疫荧光技术成为一种独立完整的一门方法学。3、一种荧光抗体可以检查多种抗原抗体复合物。4、只要知道一种抗体或抗原，就可以知道其对应的抗原或抗体。临床应用：1、在细菌诊断中的应用：主要用于鉴定细菌和对抗原结构的研究。如对甲型链球菌的快速诊断和分型鉴定，脑膜炎双球菌的快速诊断等。23、在病毒学诊断中的应用：快速诊断中对流感病毒、乙脑、狂犬病、脊髓灰白质炎、恙虫病等的快速检出；也可用来检查血清中的抗病毒抗体。45、血液中B及T细胞的鉴定。6、激素和酶的局部组织定位。7、一些器官移植抗原鉴定。8、组织中免疫球蛋及补体组分的检测。9、在诊断自身免疫病方面的应用：(1)抗核抗体（ANA)：是自身免疫性疾病最常出现的一种抗体，特别是系统性红斑狼疮，阳性率更高。其它如类风湿性关节炎、硬皮病、慢性肝炎等血中亦可出现较高效价的抗体。1：25698％慢性活动性肝炎在31％左右。线粒体抗体在胶原性疾病中可见（2-8％）且效价远较自身免疫性肝炎低。异性。其临床意义对于自身免疫性肝炎约82％，HBsAg甲状腺球蛋白的抗体：甲状腺球蛋白是甲状腺腺泡内主要激素贮存形而形成自身抗原，从而刺激机体产生自身抗体。抗体可用于诊断重症肌无力，抗肾上腺抗体诊断阿狄森氏病。胶体金技术域，目前已成为一种最常用的快速的检测技术。技术原理：该技术以微孔膜作为固相，固相膜有很多孔，像滤纸一样，常用的固相膜为法。临床应用：1、感染性疾病的抗原、抗体的检测：可检测的抗原