DB54-T 0159-2018牛羊东毕吸虫毛蚴孵化诊断方法

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DB54西 藏 自 治 区 地 方 标 准DB54/T0159—2018牛羊东毕吸虫毛蚴孵化诊断方法2018-07-20发布 2018-08-19实施西藏自治区市场监督管理局 发布DB54/T0159—2018DB54/T0159—2018PAGE\*ROMANPAGE\*ROMANII目  次前言 II范围 1术语和定义 1牛羊东毕吸虫病的诊断 1诊断结果 2附录A（规范性附录）实验用品与试剂 3附录B（规范性附录）样本采集、保存、送检 4前  言本标准按照GB/T1.1的规则起草。本标准由西藏自治区农牧业标准化技术委员会提出并归口。本标准由西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所，中国农业科学院上海兽医研究所负责起草。本标准主要起草人：刘建枝、刘金明、石斌、李浩、夏晨阳、陆珂、唐文强、朱传刚、单曲拉姆。本标准为首次制定。DB54/T0159—2018DB54/T0159—2018PAGEPAGE4牛羊东毕吸虫毛蚴孵化诊断方法范围本标准规定了牛羊东毕吸虫病及其流行区的定义、临床诊断、实验室诊断及结果判定等技术。本标准适用于西藏自治区境内牛羊东毕吸虫病的诊断、防治效果考核、检疫和流行病学调查。术语和定义下列术语及定义适用于本标准。2.1牛羊东毕吸虫病2.2东毕吸虫病流行区存在东毕吸虫的中间宿主，有牛和羊感染的地区。牛羊东毕吸虫病的诊断临床诊断来源于东毕吸虫流行区的家畜，有以上症状者，列为疑似病例，但确诊需进行实验室诊断。实验室诊断实验步骤（只家畜的粪样分别进行1250g，羊粪10g。羊粪加样取羊粪10g加入长颈平底烧瓶并编号,往长颈平底烧瓶内加入25℃水至瓶口下4cm～5cm处。牛粪加样将50克牛粪放入铜筛中，铜筛置塑料量筒上部，加水淹没粪样，用竹筷搅拌至稀浆状，捞出铜筛，沥干后再次浸入，搅拌，如此3次。再将塑料量筒中的粪样静置沉淀15min～20min（室温超过20℃时静置时间不超过10min），弃上层清液，将沉淀物倒入长颈平底烧瓶，加水至瓶口下4cm～5cm。毛蚴孵化用玻璃棒将折叠好的1cm～1.5cm厚的松软脱脂棉推入长颈平底烧瓶,使脱脂棉刚好浸入液面,补加水至液面高出脱脂棉2cm～3cm将装好粪样的长颈平底烧瓶放置于20℃～30℃环境中，在光照（日光或灯光）条件下进行孵育，避免阳光直射。如室温低于20℃，可将长颈平底烧瓶放入25℃温箱（内加入日光灯）或水浴锅中进行孵化。毛蚴观察孵化（或在光线充足的地方结果判定东毕吸虫毛蚴形态及运动特征毛蚴眼观为针尖大小、灰白色、梭形，折光性强，在脱脂棉上层清液中作水平或斜向直线运动。阴性、阳性判定发现毛蚴，则判定为阳性；阴性样本复查1次，如未发现毛蚴，则判定为阴性。诊断结果有流行病学接触史的动物，出现本病临床症状。确诊粪便孵化发现毛蚴。附录A（规范性附录）实验用品与试剂实验用品孵育室（箱）室温低于2020℃～25500mL(500ml)40目～80试剂水（瓶50L水加明矾3g～5g，充分搅拌，澄清。用NaOH或HCL调节pH值至6.8～7.2。自来水在盛器中存放去氯过程中需敞口，不能盖盖子。附录B（规范性附录）样本采集、保存、送检样本采集20g～25g（只