转基因作物的饲用安全性评价优选ppt资料

转基因作物(zuòwù)的饲用安全性评价第一页，共37页。转基因豆粕对肉仔鸡(zǎijī)饲用安全性的研究

刘莎莎

TheSafetyResearchofGeneticallyModifiedSoybeaninfeedonbroilers中国农业科学院北京(běijīnɡ)畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室-11第二页，共37页。1研究背景(bèijǐng)2目的意义3实验依据4实验设计5研究内容6结论.报告(bàogào)内容第三页，共37页。图1.世界范围(fànwéi)内转基因作物的种植情况1研究(yánjiū)背景第四页，共37页。图2.主要(zhǔyào)转基因作物的使用率第五页，共37页。转基因作物的种植引起(yǐnqǐ)了广泛的争论粮食(liángshi)与能源危机减轻贫困缓解环境污染能充分利用有限的耕地食用/饲用安全生态安全对子孙后代健康(jiànkāng)、繁衍的影响正方反方第六页，共37页。2目的意义转基因作物毕竟不是通过自然进化得来的,因为生物技术的局限性会使转基因作物产生各种“非期望效应”。转基因作物及其产物使用的前提是保证其安全性,而制定转基因作物安全性评价体系就是保证转基因技术发展和转基因作物使用的推动因素。目前已经有60%-70%的饲料与转基因作物有关,这些(zhèxiē)饲料饲喂的畜禽或者产品终端是人,所以转基因作物的饲用安全性评价体系是安全性评价体系中重要一环。第七页，共37页。1：ddH2O（Lec基因空白对照）；1-21d日粮组成及营养水平(shuǐpíng)(风干基础)胸腺Thymus2-9：肝、肾、脾、胸肌、腿肌、空肠(kōngcháng)、回肠、十二指肠。试验(shìyàn)4.禽代谢能ME(MJ/kg)3）粗蛋白Crudprotein,%BarnesiellaviscericolaDSM18177转基因豆粕组（27%/25%）粗脂肪Etherextract,k/kg动物营养学国家重点实验室转基因豆粕日粮对肉鸡免疫(miǎnyì)器官指数的影响（k/kg）总胆固醇CHOL,mmol/L21、42日龄实验组与对照组肉仔鸡小肠（十二指肠、空肠和回肠(huícháng)）iIEL数量均无显著差异（P）转基因豆粕组(27%/25%)抗草甘膦转基因豆粕日粮对AA肉鸡免疫功能的影响3实验(shíyàn)依据实质等同性原则（substantialequivalence）:如果一种新食品（或者食品成分）在实质（如化学(huàxué)组成、营养价值、是否有毒素等）上与现有食品（或食品成分）具有等同性,那么这种新食品（或者食品成分）就具有同样的安全性。第八页，共37页。实验设计1试验材料转基因豆粕为孟山都Roundup-Ready抗草甘膦基因大豆(dàdòu)（40-3-2），购买自秦皇岛金海粮油工业，常规非转基因豆粕为国产大豆(dàdòu)，购买自黑龙江庆丰集团克山昆丰油脂。2试验动物：拔益加肉鸡（AA）4第九页，共37页。3试验(shìyàn)设计免疫功能外源基因代谢残留检测肠粘膜免疫和肠道微生态为转基因作物(zuòwù)的饲用安全性评价提供依据。生长性能+器官发育(fāyù)+血清指标第十页，共37页。选择1日龄AA肉鸡720只，随机分为4个处理组，每个处理5个重复（每个重复36只），日粮豆粕共有27%/25%和36%/34%两个添加水平，添加的豆粕分别为抗草甘膦转基因豆粕和常规(chángguī)豆粕4试验日粮及营养水平试验期分为1~21、22~42两个阶段，基础日粮按我国（NY/T22-2004）肉鸡营养需要标准配制。见表1和表2。第十一页，共37页。原料Ingredient,%转基因豆粕27%常规豆粕27%转基因豆粕36%常规豆粕36%玉米Corn59.3558.3554.6353.33转基因豆粕TSM27.00——36.00——非转基因豆粕CSM——27.00——36.00玉米蛋白粉Cornproteinpowder7.008.002.003.30玉米油cornoil1.501.502.502.50石粉Limestone1.341.341.301.30磷酸氢钙CaHPO41.901.901.901.90赖氨酸Lysine0.310.310.060.06蛋氨酸Methionine0.250.250.260.26氯化胆碱Cholinechloride0.050.050.050.05食盐Salt0.300.300.300.30添加剂

Premix1.001.001.001.00营养水平Nutrient禽代谢能ME/(MJ/kg)3）12.5412.5412.5412.54粗蛋白CP,%21.3321.3121.7821.74钙Ca,%1.011.011.021.02总磷P,%0.670.670.690.70有效磷AP,%0.450.450.460.46赖氨酸Lys,%1.171.181.161.17蛋氨酸Met,%0.600.610.580.60蛋+胱氨酸Met+Cys,%0.930.950.920.94表1.1-21d日粮组成及营养水平(shuǐpíng)(风干基础)第十二页，共37页。原料Ingredient,%转基因豆粕25%常规豆粕25%转基因豆粕34%常规豆粕34%

玉米Corn61.4961.2357.4556.97转基因豆粕TSM25.00——34.00——非转基因豆粕CSM——25.00——34.00玉米蛋白粉Cornproteinpowder7.107.371.301.71玉米油Cornoil1.901.873.003.00石粉Limestone1.301.301.211.27磷酸氢钙CaPHO41.591.591.571.57赖氨酸Lysine0.190.210.000.00蛋氨酸Methionine0.080.080.120.13氯化胆碱Cholinechloride0.050.050.050.05食盐Salt0.300.300.300.30添加剂

Premix1.001.001.001.00营养水平Nutrientlevel禽代谢能ME(MJ/kg)3）12.7112.5812.7412.58粗蛋白CP,%19.6819.6819.9319.93钙Ca,%0.920.900.900.90总磷P,%0.610.620.630.64有效磷AP,%0.400.400.400.41赖氨酸Lys,%1.001.001.021.00蛋氨酸Met,%0.420.400.420.40蛋+胱氨酸Met+Cys,%0.760.760.770.78表2.22-42d日粮组成(zǔchénɡ)及营养水平(风干基础)第十三页，共37页。试验1.转基因豆粕营养成分分析及对肉鸡血清生化指标和器官发育的影响试验2.抗草甘膦转基因豆粕日粮对AA肉鸡免疫功能的影响试验3.转基因豆粕日粮对AA肉鸡肠道微生态的影响试验4.转基因豆粕日粮中外源基因在肉鸡体内代谢残留(cánliú)检测5研究(yánjiū)内容第十四页，共37页。试验(shìyàn)1.转基因豆粕营养成分分析及对肉鸡血清生化指标和器官发育的影响1）豆粕常规(chángguī)营养成分指标

ParameterRR豆粕Xs豆粕豆粕*水分Moisture,%10.7011.0211.00粗蛋白Crudprotein,%45.0042.4244.20粗纤维Crudfiber,k/kg5.905.505.90粗脂肪Etherextract,k/kg0.773.101.90粗灰分Ash,k/kg,5.845.266.10无氮浸出物Nitrogenfreeextract,k/kg31.7932.728.3表3.转基因豆粕常规营养成分和矿物(kuàngwù)元素含量分析第十五页，共37页。2）两个(liǎnɡɡè)转基因豆粕日粮对肉鸡生产性能的影响日龄指标转基因豆粕组常规豆粕组转基因豆粕组常规豆粕组转基因豆粕AgeParameter（27%/25%）（27%/25%）(36%/34%)(36%/34%)水平P

日增重ADG(g/日/只)26.82

±0.48

26.71

±0.51

26.67

±0.29

26.24

±0.59

0.78521d日采食量ADFI(g/日/只)49.64

±0.83

50.42

±0.53

51.12

±0.39

49.23

±0.15

0.143料重比F/G1.85

±0.03

1.89

±0.04

1.92

±0.03

1.88

±0.04

0.138日增重ADG(g/日/只)72.13a±0.4069.06b±1.2675.68a±1.3169.50b±0.910.64642d日采食量ADFI(g/日/只)126.55a±0.66125.17b±1.63131.51a±2.38126.07b±0.970.079

料重比F/G1.75

±0.01

1.81

±0.06

1.74

±0.04

1.81

±0.03

0.128表4.转基因豆粕对肉鸡生产性能(xìngnéng)的影响3）两个转基因豆粕日粮对肉鸡血清生化指标(zhǐbiāo)的影响第十六页，共37页。日龄Age指标Parameter转基因豆粕组(27%/25%)常规豆粕组(27%/25%)转基因豆粕组(36%/34%)常规豆粕组(36%/34%)转基因水平P谷丙转氨酶ALT,IU/L3.07

2.67

2.932.930.840谷草转氨酶ASL,IU/L216.00215.05239.20244.400.208碱性磷酸酶ALP,IU/L7068.876011.436914.804961.330.938r-谷氨酰基转移GGT,IU/L15.0418.5317.5319.330.228乳酸脱氢酶LDH,IU/L828.27946.67862.75866.330.77021d血清淀粉酶AMY,IU/L513.40547.30575.27593.130.346总钙Ca,mmol/L2.492.502.762.910.236磷P,mmol/L2.392.322.612.930.350空腹葡糖糖GLU,mmol/L17.8519.0718.4318.790.630尿酸UA,umol/L667.20697.30615.87648.800.468总胆固醇CHOL,mmol/L3.613.963.883.900.314甲状腺素T4,nmol/L6.886.2712.5213.790.204

三碘甲腺原氨酸T3,nmol/L2.953.082.923.100.500谷丙转氨酶ALT,IU/L3.002.532.33a2.27b0.093谷草转氨酶ASL,IU/L3.253.503.413.540.419碱性磷酸酶ALP,IU/L1240.131304.401018.80a1498.27b0.199r-谷氨酰基转移GGT,IU/L22.3324.5323.4726.000.600乳酸脱氢酶LDH,IU/L1.561.291.321.390.215血清淀粉酶AMY,IU/L3.925.585.945.640.09442d总钙Ca,mmol/L2.612.612.582.670.563磷P,mmol/L2.372.362.382.480.802空腹葡糖糖GLU,mmol/L11.0710.8711.2711.480.489尿酸UA,umol/L2.492.572.772.270.440总胆固醇CHOL,mmol/L3.613.753.573.590.806甲状腺素T4,nmol/L20.5322.6520.3922.650.958

三碘甲腺原氨酸T3,nmol/l0.680.800.840.640.401表5.转基因豆粕对肉鸡血清生化指标(zhǐbiāo)的影响第十七页，共37页。4）两个转基因豆粕日粮对肉鸡器官(qìguān)发育的影响日龄Age指标Parameter,k/kg转基因豆粕组（27%/25%）常规豆粕组（27%/25%）转基因豆粕组(36%/34%)常规豆粕组(36%/34%)转基因水平P心脏Heart6.21±0.075.92±0.225.99±0.265.95±0.180.452肝脏Liver30.13±2.4532.43±0.7333.49±2.3828.77±1.440.354肺Lung3.22±0.043.18±0.053.07±0.172.88±0.140.444肾Kidney4.08±0.094.00±0.184.39±0.134.19±0.130.09421d胰脏Pancreas4.24±0.264.01±0.134.35±0.164.13±0.200.726腺胃Proventriculuse6.52±0.276.08±0.096.29±0.086.55±0.220.450肌胃Gizzard23.25±0.3821.89±0.4922.15±0.8021.21±0.710.246

嗉囊Crop5.20±0.305.54±0.195.87±0.105.43±0.270.068心脏Heart4.59±0.124.45±0.144.59±0.414.41±0.090.996肝脏Liver18.09±0.9419.50±0.7519.60±2.0720.24±1.090.282肺Lung3.11±0.323.48±0.253.11±0.323.77±0.190.990肾Kidney3.03±0.073.11±0.123.29±0.093.11±0.030.05742d胰脏Pancreas1.94±0.061.94±0.071.97±0.101.78±0.060.772腺胃Proventriculuse3.31±0.203.11±0.103.41±0.133.57±0.090.685肌胃Gizzard15.16±0.3013.98±0.4614.41±0.2215.00±0.320.257

嗉囊Crop3.02±0.083.00±0.213.20a±0.063.76b±0.170.135表6：转基因豆粕对肉鸡器官指数(zhǐshù)的影响第十八页，共37页。5)两个(liǎnɡɡè)转基因豆粕日粮对肉鸡小肠发育的影响日龄Age指标Parameter转基因豆粕组（27%/25%）常规豆粕组（27%/25%）转基因豆粕组(36%/34%)常规豆粕组(36%/34%)转基因水平P空肠Jejunum41.95±0.0142.61±0.0041.78±0.0041.59±0.010.81621d回肠Ileum39.38±0.0139.74±0.0140.12±0.0141.33±0.010.429十二指肠Duodenum18.77±0.0117.65±0.0018.10±0.0117.08±0.000.547空肠Jejunum40.84±0.7240.83±0.5842.44±0.5742.98±0.660.12242d回肠Ileum40.98±0.6941.05±0.9538.77±0.8638.62±0.720.080

十二指肠Duodenum18.98±0.6517.96±0.3418.79±0.8118.41±0.250.861表7.转基因豆粕对肉鸡小肠指数(zhǐshù)的影响第十九页，共37页。试验2.抗草甘膦转基因豆粕日粮对AA肉鸡免疫(miǎnyì)功能的影响1）两个转基因豆粕日粮对肉鸡免疫(miǎnyì)器官指数影响日龄Age指标Parameter转基因豆粕组(27%/25%)常规豆粕组(27%/25%)转基因豆粕组(36%/34%)常规豆粕组(36%/34%)转基因水平P胸腺Thymus3.03±0.382.66±0.183.00±0.152.86±0.210.95621d脾脏Spleen0.85±0.060.92±0.040.94±0.060.88±0.050.299法氏囊Bursa2.46±0.182.36±0.202.84±0.202.42±0.160.200胸腺Thymus2.75±0.222.65±0.252.62±0.152.40±0.080.63642d脾脏Spleen0.94±0.070.96±0.071.05±0.041.10±0.020.195

法氏囊Bursa0.73±0.050.73±0.030.72a±0.050.86b±0.110.845表8.转基因豆粕日粮对肉鸡免疫(miǎnyì)器官指数的影响（k/kg）第二十页，共37页。2）两个(liǎnɡɡè)转基因豆粕日粮对肉鸡血清蛋白含量的影响日龄Age指标Parameter转基因豆粕组(27%/25%)常规豆粕组(27%/25%)转基因豆粕组(36%/34%)常规豆粕组(36%/34%)转基因水平P白蛋白,g/L13.0613.3614.2514.200.25221d球蛋白,g/L11.2112.0612.9612.460.059白蛋白/球蛋白1.131.121.101.150.378白蛋白,g/L13.4613.9713.8013.920.32642d球蛋白,g/L14.05a15.43b14.7215.520.086

白蛋白/球蛋白0.960.910.940.920.318表9.转基因豆粕对肉鸡血清蛋白的影响(yǐngxiǎng)第二十一页，共37页。3）两个(liǎnɡɡè)转基因豆粕日粮对肉鸡新城疫抗体滴度和血清溶菌酶的影响指标Parameter21d新城疫抗体滴度ND溶菌酶,μg/mlLysozyme,μg/ml

42d新城疫抗体滴度ND溶菌酶,μg/mlLysozyme,μg/ml转基因豆粕27%3.24

1.21

2.52

3.95常规豆粕27%3.23

1.32

2.87

3.67转基因豆粕36%3.29

1.37

2.73

3.02

常规豆粕36%3.32

1.40

2.83

3.91

转基因豆粕水平P

0.7340.182

0.4320.035

表10.转基因豆粕对肉鸡新城疫抗体(kàngtǐ)滴度和溶菌酶的影响第二十二页，共37页。4）两个转基因豆粕日粮对肉鸡T、B细胞(xìbāo)转化率和T细胞(xìbāo)亚群的影响指标ParameterT细胞转化率ConAStimulateB细胞转化率LPSStimulateCD4%CD8%CD4%/CD8%转基因豆粕27%0.851.2336.03

4.718.92常规豆粕27%0.861.1931.354.297.86转基因豆粕36%0.921.1431.674.238.89常规豆粕36%0.901.0234.735.506.78转基因豆粕水平P0.1730.2190.2740.5360.981表11.转基因豆粕对42d肉鸡T细胞(xìbāo)和B细胞(xìbāo)转化率的影响第二十三页，共37页。1试验3.转基因豆粕对肉鸡肠粘膜免疫和肠道微生态(shēngtài)的影响

1、抗草甘膦转基因豆粕对肉仔鸡(zǎijī)肠粘膜免疫屏障的影响

iIELsIgAIL-2/IL-6IFN-γ第二十四页，共37页。A：转基因豆粕组肉仔鸡十二指肠淋巴细胞；B：常规豆粕组肉仔鸡十二指肠淋巴细胞；C：转基因豆粕组肉仔鸡空肠淋巴细胞；D：常规豆粕组肉仔鸡空肠淋巴细胞；E：转基因豆粕组肉仔鸡回肠(huícháng)淋巴细胞；F：常规豆粕组肉仔鸡回肠(huícháng)淋巴细胞。箭头所指的细胞为上皮内淋巴细胞。观察到，试验肉鸡小肠绒毛结构正常，iIEL散布于小肠绒毛上皮柱状细胞之间，胞浆极少，细胞核大而圆，染色较深。1）第二十五页，共37页。表12.小肠绒毛上皮内淋巴细胞(xìbāo)平均数（个/100个柱状细胞(xìbāo)）21、42日龄实验组与对照组肉仔鸡小肠（十二指肠、空肠和回肠(huícháng)）iIEL数量均无显著差异（P）第二十六页，共37页。表13.转基因豆粕对肉鸡空肠食糜SIGA含量(hánliàng)（ΜG/MG）空肠组织IFN-Γ含量(hánliàng)(PG/MG)的影响

转基因豆粕组与非转基因豆粕组肉仔鸡空肠食糜中sIgA含量(hánliàng)无显著差异（P）；同21日龄肉仔鸡相比，42日龄肉仔鸡空肠食糜中sIgA含量(hánliàng)极显著增加(P<0.01)，但组间无差异。IFN-γ主要有活化的T细胞和NK细胞产生，具有抗病毒、抗肿瘤的作用(zuòyòng)，对肠粘膜免疫进行调节。第二十七页，共37页。表14.抗草甘膦转基因豆粕对肉仔鸡(zǎijī)肠道TH1/TH2免疫平衡的影响

日龄Age指标Criteria常规豆粕组CSMgroup转基因豆粕组TSMgroupP值PValue21dIL-21.93±0.381.74±0.360.736IL-60.14±0.030.11±0.030.541IL-2/IL-614.47±0.5917.40±0.1730.17042dIL-22.57±0.172.33±0.090.244IL-60.44±0.030.41±0.010.324IL-2/IL-65.37±0.365.86±0.300.321第二十八页，共37页。2、转基因豆粕对肉鸡肠道微生态(shēngtài)的影响第二十九页，共37页。肠道微生物全DNAPCR扩增

图1.肉鸡盲肠(mángcháng)微生物图2.肉鸡回肠微生物

第三十页，共37页。1)42d肉鸡肠道微生物菌种数量(shùliàng)图3.肉鸡回肠（左图）和盲肠（右图）微生物PCR-DGGE指纹图谱肠道Intestine常规豆粕组CSMgroup转基因豆粕组TSMgroupP值PValue回肠Ileum33.6±0.6832.4±1.080.373盲肠Cecum38.6±2.1438.8±1.320.93842天肉仔鸡回、盲肠微生物PCR-DGGE电泳图谱，图谱上不同的泳带反映了肠道中优势菌群的种类，泳带的亮度反映了相应(xiāngyīng)微生物的数量。第三十一页，共37页。2)PCR-DGGE电泳图谱的聚类分析图4.肉鸡回肠(huícháng)（左图）和盲肠（右图）PCR-DGGE条带聚类分析显示(xiǎnshì)，除盲肠样品6和7之间的相似性超过85%以外，其它样品间相似性都较低。盲肠和回肠菌群，总样本间的相似性分别为58%和62%，表明肉鸡肠道优势菌群的种类存在较大的个体差异。第三十二页，共37页。3)DGGE图谱中部分优势(yōushì)条带的序列比对条带编号序列长度/bp最相似的菌种名称相似性%GenBank登录号M-1189Unculturedbacteriumclonecc_269100GQ175524M-2189UnculturedbacteriumcloneNO5098AY916251M-3192UnculturedbacteriumcloneWD3_aak03c0193EU510227M-4172Clostridialesbacterium21-4c100HQ452858M-5189BarnesiellaviscericolaDSM18177100