生物制品质量监控

生物制品的质量监控23第一节概述4化学药物、生物药物、中药生物药物（来源和生产方法）生化药物生物合成药物生物制品5生物药物利用生物体、生物组织或组成生物体的各种成分，综合运用生物学、生物化学、微生物学、免疫学、物理化学和药学的原理与方法制得的一大类药物。6生化药物定义：指从动物、植物及微生物提取的，也可用生物-化学半合成或用现代生物技术制得的生命基本物质及其衍生物、降解物以及大分子的结构修饰物等，如氨基酸、多肽、蛋白质、酶、多糖、脂质、核甘酸类。7生物合成药物定义:由微生物代谢所产生的药物和必须利用微生物及其酶转化反应共同完成的半合成药物,如:山梨醇、木糖醇、甘露醇、维生素、甾体激素、酶与辅酶类药物等。8一、生物制品定义

生物制品(BiologicalProducts)是应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞及各种动物和人源的组织和液体等生物材料制备，用于疾病预防、治疗和诊断的药品。9二、生物制品分类

按生物制品的组成和性质可分为:疫苗（Vaccines）抗毒素及免疫血清(AntitoxinandAntisera)血液制品（BloodProducts）细胞因子和重组DNA产品（CytokinesandRecombinantDNAProducts）诊断制品(DiagnosticReagents)其他制品10细菌类疫苗由细菌、螺旋体或其衍生物制备而成，包括：减毒活疫苗：卡介苗、人用炭疽和人用鼠疫疫苗等灭活疫苗：霍乱菌体疫苗、钩端螺旋体疫苗等亚单位疫苗：脑膜炎球菌多糖疫苗、伤寒Vi多糖疫苗等重组DNA疫苗：重组疟疾疫苗、重组幽门螺杆菌疫苗等11病毒类疫苗由病毒、衣原体、立克次体或其衍生物制备而成，包括：减毒活疫苗：乙型脑炎减毒疫苗、麻疹疫苗、风疹疫苗、OPV等灭活疫苗：乙型脑炎灭活疫苗、出血热疫苗、狂犬疫苗等亚单位疫苗：重组乙肝疫苗等重组DNA疫苗：重组乙肝疫苗等12联合疫苗

由两种或两种以上疫苗抗原原液配制而成的具有多种免疫原性的疫苗。例如：吸附百白破联合疫苗麻风腮三联疫苗

13抗毒素及免疫血清

——由特定抗原免疫的动物血清而制备

主要产品：白喉抗毒素破伤风抗毒素抗狂犬病血清等14血液制品

——由健康人的血浆或特异免疫人血浆分离、提纯或由重组技术制成的血浆蛋白组分或血细胞组分制品。主要产品：人血白蛋白人免疫球蛋白人凝血因子等

15细胞因子和重组DNA产品

——由健康人血细胞增值、分离、提纯或由重组技术制成的多肽类或蛋白类制剂。主要产品：干扰素(IFN)

白细胞介素(IL)

集落刺激因子(CSF)

红细胞生成素(EPO)等16诊断制品

体外诊断制品

——由特定抗原、抗体或有关生物物质制成的用于体外诊断疾病的试剂或试剂盒，如伤寒、副伤寒等细菌的诊断菌液，沙门氏菌属诊断血清，HBsAg诊断试剂盒等。体内诊断制品

——由抗原制成的用于体内诊断疾病的试剂，如卡介苗纯蛋白衍生物（BCG-PPD）、锡克试剂毒素、标记的单克隆抗体等。

17其他制品

由有关生物材料或特定方法制成的，上述5类产品以外的生物制品，如变态反应原、微生态制剂、重组DNA产品、基因治疗产品、单克隆抗体制剂、某些细胞治疗制剂等。18生物制品按用途分类

预防类生物制品

疫苗、类毒素、被动免疫制剂

诊断类生物制品免疫学诊断试剂、基因诊断试剂、生化试剂

治疗类生物制品血液制剂、细胞因子制剂、酶和激素、

特异性抗体、非特异性免疫治疗制剂、基因及细胞治疗制品等

19（二）生物制品的分类2021（三）生物制品的特点22分子量不是定值。大部分生物制品的活性组分均为大分子的生命物质（如蛋白质、多肽、核酸、多糖类等）。组分相同，但相对分子量不同而产生不同的生理活性，因此常需进行相对分子量的测定。生化法结构确证。由于有效结构或分子量不确定，其结构的确证很难沿用化学药物或结构已知的生化药物所常用的方法，还需要生物化学分析如：氨基酸组成、N末端氨基酸序列、肽图等。232.需检查生物活性24

要求安全性检查。生物制品组分复杂，有效成分浓度很低，生物大分子杂质含量比较高，生产工艺复杂，易引入特殊杂质和污染物。如重组乙型肝炎疫苗涉及的安全性检查包括：细胞外源因子检查、原液、半成品、成品中有关血清白蛋白残留量、CHO细胞DNA残留量检查、热原检查、过敏试验、异常毒性检查等。25

需做效价测定。对于生物制品有效成分的检测，除应有一般化学方法或理化分心进行有效成分含量测定外，更应根据产品的特异生理效应或专一化反应拟定其专属性的生物效价测定方法，以表征其所含生物活性成分的含量。例：人凝血酶原复合物的效价测定。26三、生物制品质量控制意义、目的与作用生物制品化学性质与生物学性质都很不稳定，又易受微生物污染，故对生物制品的均一性、有效性、安全性和稳定性等应有严格要求，以生产出具有药理活性高、针对性强、毒性低、副作用小，疗效可靠及营养价值高等特点的安全、高效的生物制品。为此，必须进行原材料、生产过程和最终产品的全程质量控制，以确保产品符合质量标准要求。27四、生物制品质量监控的标准与执行机构28生物制品及检定规程草案（1952年）生物制品制造检定规程（1959年）中国生物制品规程（2000年）中华人民共和国药典三部（2010年）收载生物制品101种29药典三部各论内容品名定义、组成及用途基本要求制造检定（原液、半成品、成品）保存运输及有效期使用说明（仅预防类含此项）30

生物制品品名定义、组成及用途基本要求制造检定（原液、半成品、成品）保存运输及有效期使用说明（仅预防类含此项）化学药品品名化学结构、分子式性状鉴别检查含量测定31第二节生物制品的质量监控32生物制品质量控制重点有效成分的同一性、结构确证有效成分的均一性、纯度检查有害物质及残余杂质等的控制高效、灵敏的生物活性及比活性等实验方法生物制品质量控制基本方法：鉴别试验杂质检查安全性检查含量测定（生物活性或效价）33（一）鉴别试验依据生物制品的化学结构、理化性质和生物学特点，利用化学法、物理法及生物学方法进行某些特殊反应，或测定某些专属的理化常数如紫外吸收系数、等电点、电泳迁移率、色谱保留时间和肽图等，判断与确证产品的真伪。（一组实验）需用标准品或对照品在同一条件下进行对照实验。34一、理化鉴别法1、化学鉴别法

利用药物与某试剂在一定条件下反应，生成有颜色的产物或沉淀进行鉴别。如胰岛素的沉淀反应。2、紫外分光光度法（红外）

蛋白质生物制品主要由芳香族氨基酸侧链如酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸产生紫外吸收。如重组人促红素最大吸收279nm。3、高效液相色谱法

（主峰保留时间和肽图的一致性）

例如脑蛋白水解液不同批次肽图的一致性

35363738肽谱分析394041二、生化鉴别法1、酶法利用酶对底物特异性的催化活力，做为酶类生物制品简便、快速鉴别方法。如尿激酶的鉴别2、电泳法

等电点聚焦电泳、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳等。可用于蛋白质类生物制品的鉴别。如重组人生长激素的鉴别：SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳

424344三、生物鉴别法（一）血清学法-体外抗原抗体试验抗原抗体类生物制品的鉴别抗原抗体在体外结合时，可因抗原物理性状不同或参与反应的成分不同而出现各种类型的反应，如凝集反应、沉淀反应、中和反应和补给结合反应，即经典血清学反应，在此基础上，又衍生出免疫扩散、免疫电泳、荧光标记、酶标记等高度敏感的检测技术。

45（二）生物学法利用生物体对生物制品特定的生物活性的反应为基础进行供试品的鉴别来鉴别药物。4647杂质检查48第三节杂质检查可用来判断药品的优劣。由于生物制品来自生物体，生物活性特特异性强，制造与纯化工艺复杂，分子结构常常不确定，有时产品并非单一，极微量杂质可能产生显著的效应，因此，其杂质检查显得尤为重要。主要包括：一般杂质检查特殊杂质检查安全性检查49

一般杂质检查

氯化物、硫酸盐、磷酸盐、铵盐、铁盐、重金属、酸度、溶液的澄清度、溶液的颜色、水份及干燥失重、炽烧残渣50一、特殊杂质检查从原料中带入或生产工艺中或贮藏过程中引入的杂质根据生物制品的生产工艺特点与产品的稳定性，其特殊杂质分为：生物污染物：微生物污染、宿主细胞蛋白、外源性DNA、培养基成分等产品相关杂质：二聚体和多聚体、脱氨或氧化产物、突变物、裂解产物等工艺添加剂：残余抗生素、蛋白分离剂聚乙二醇、乙醇、佐剂氢氧化铝，产品稳定剂如辛酸钠、肝素，防腐剂苯酚、硫柳汞，细菌与病毒灭活剂甲醛、戊二醛等。5152535455（一）宿主细胞蛋白残留量测定生物制品生产用细胞、工程菌相关的特殊杂质。方法：ELISA56（二）外源性DNA残留量的检查测定方法：分子杂交技术基于DNA结合蛋白分析系统实时定量PCR方法57（三）产品相关杂质检查

生物制品在生产制造、分离纯化和贮藏保存过程中产生的与产品结构类似的同系物、异构体、突变物、氧化物、聚合体或降解物。常用HPLC法和电泳法。如重组人生长激素中相关蛋白质的测定总相关蛋白质含量不超过10%。58（四）残余抗生素的检查如果生物制品在生产过程中使用了抗生素，则不仅要在纯化工艺中除去，而且要在原液检定中增加残余抗生素活性的检测方法。常用方法：抑菌圈测量。结果判定：对照溶液有抑菌圈，阴性对照无抑菌圈，供试品溶液抑菌圈的直径小于对照溶液抑菌圈的59二、安全性检查（一）热原检查法和细菌内毒素检查法（二）异常毒性检查（三）过敏试验

检查异性蛋白（四）降压试验

检查组胺、类组胺或其他导致血压下降的物质（五）无菌试验检查药品及敷料是否有活菌的一种方法60第四节含量（效价）测定（一）含量测定表示方法：百分含量：适用于结构明确的小分子药物或经水解变成小分子的药物测定方法：1、HPLC2、SDS（二）效价测定表示方法：生物效价或酶活力：适用于酶类或蛋白质类药物。616263理化方法64一、理化分析法（一）滴定分析法根据生物制品中某些成分能与标准溶液定量地发生酸碱中和反应、氧化还原反应等特性，通过滴定进行含量测定。如胰酶中胰脂肪酶的测定。以橄榄油为底物，经胰脂肪酶水解后产生脂肪酸，用氢氧化钠液滴定。6566（二）光谱分析法1、比色法例如：硫酸软骨素的测定2、紫外分光光度法糜蛋白酶与底物N-乙酰-L-酪氨酸237nm测定3、荧光分光光度法反应物或反应产物激发产生应观荧光应用荧光试剂产生荧光应用另一酶的催化反应产生荧光67

（三）HPLC法特点：适合于对高沸点、大分子、强极性和热稳定性差

色谱柱：C8、C18流动相：甲醇-水（或缓冲液）、乙腈-水（或缓冲液）检测器：UV、荧光、ECD色谱条件：68高效凝胶过滤色谱法（HPGFC）多肽及蛋白质等生物药物的分离及其分子量测定特点：活性蛋白质可以回收流动相通常为缓冲液，为改善分离，可加少量有机改性剂或表面活性剂根据有效粒径分离

69HPGFC测定rh-TNF衍生物的分子量色谱条件：色谱柱：SEC-3000柱流动相：0.01mmol/LKH2PO4：0.1mmol/LNa2SO4（1：1），内加0.05%叠氮化钠流速：1mL/min柱温：检测波长:280nm色谱条件：7071二、生化分析法

72（一）酶法酶法

酶活力测定法—以酶为分析对象

酶分析法—以酶为分析工具或分析试剂酶活力测定法酶催化一定化学反应的能力。测定一个被酶所催化的化学反应速度。酶反应速度以单位时间底物的减少或产物的增加来表示。

酶活力73酶促反应的影响因素（1）底物浓度的影响：选择Km小的作底物

（2）pH的影响（3）温度的影响：温度控制在±0.1度（4）辅助因子的影响（5）空白和对照试验

空白：杂质反应和自发反应引起的变化量

对照实验：用纯酶或标准酶制剂测定。用于比较或测定的标准。

74酶法测定方法（1）取样测定法

停止酶反应的方法：添加变性剂加热使酶失效（2）连续测定法75检测方法1、UV-VIS—根据产物和底物特征吸收差别2、荧光3、旋光法4、酶偶联测定法例如：ELASA5、其他：电化学法、离子选择电极测定等76（二）酶分析法以酶为分析工具的方法。分析的对象可以是酶的底物、辅酶活化剂或酶抑制剂。影响因素：酶和作用物的浓度、反应时间、温度和pH77（二）电泳法生物制品药物分析的重要手段。在电解质溶液中，带电粒子或离子在电场作用下，以不同的速度向其