myxjyjy0501-初级检验师(临床免疫学和免疫检验)讲义资料文档

PAGE33页第五章凝集反应第一节凝集反应的特点第二节直接凝集反应第三节间接凝集反应第四节自身红细胞凝集试验第五节抗球蛋白试验第一节凝集反应的特点细菌、红细胞等颗粒抗原，或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合成致敏颗粒后，它们与相应抗体（或抗原）在适当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应。可以进行半定量检测，即将抗体作一系列稀释，与抗原结合产生凝集的最高稀释倍数作为其效价或滴度。凝集试验是一个定性的检测方法，即根据凝集现象的出现与否判定结果阴性或阳性。凝集反应分为两个阶段：①抗原抗体的特异性结合；②出现可见的颗粒凝聚。第二节直接凝集反应。参加凝集反应的抗原称凝集原，抗体则称为凝集素。从方法上来讲，有玻片法和试管法两类。（一）玻片凝集试验主要用于抗原的定性分析，短时间便能观察结果，一般用来鉴定菌种或分型；也用于人类ABO血型的测定。（二）试管凝集试验，可以用来协助临床诊断或流行病原调查研究。例如肥达试验、外斐试验、输血时也常用于受体和供体两者间的交叉配血试验。第三节间接凝集反应溶性抗原（或抗体表面，然后与相应抗体（抗原）作用，在适宜电解质存在的条件下，出现特异性凝集现象。一、间接凝集反应的类型（一）正向间接凝集反应红细胞包被抗原，用以检测抗体的血凝反应，称为正向间接血凝反应（PHA）。（二）反向间接凝集反应红细胞包被抗体，用以检测抗原的血凝反应，称为反向间接血凝反应（RPHA）。（三）间接凝集抑制反应先将可溶性抗原（或抗体）与相应的抗体（或抗原）混合，然后再加入抗原（或抗体）则能抑制原先的血凝现象，称为正向（或反向）间接血凝抑制试验。间接血凝抑制试验可用于检测抗体、自身抗体、变态反应性抗体，也可测定抗原。（四）协同凝集反应协同凝集反应与间接凝集反应的原理相类似，但所用载体既非天然的红细胞，也非人工合成的聚合物颗粒，而是一种金黄色葡萄球菌ASPA具有与IgG的FcIgG。颗粒等。二、间接血凝试验间接血凝试验其原理是将抗原（或抗体）包被于红细胞表面，成为致敏载体，然后与相应的抗体（抗原）结合，从而使红细胞被动的凝聚在一起，出现可见的凝集现象。（一）载体红细胞是大小均一的载体颗粒，最常用的为绵羊、家兔、鸡的红细胞及O型人红细胞。致敏的新鲜红细胞保存时间短，且易变脆、溶血和污染，只能使用2～3天。为此一般在致敏前先将红细胞醛化，可长期保存而不溶血。常用的醛类有甲醛、戊二醛、丙酮醛等。红细胞经醛化后体积略有增大，两面突起呈圆盘状。（二）致敏接法。（三）血凝试验血凝试验可在微量滴定板或试管中进行，将标本倍比稀释，一般为1:64对照孔。凡红细胞沉积于孔底，集中呈一圆点的为不凝集（－）。如红细胞凝集，则分布于孔底周围。根据红细胞凝集的程度判断阳性反应的强弱，以＋＋凝集的孔为滴度终点。三、胶乳凝集试验胶乳凝集试验也是一种间接凝集试验，所用载体为聚苯乙烯胶乳，是一种直径约为0.8μm大小的圆形颗粒，带有负电荷，可物理性吸附蛋白分子，但这种结合牢固性差。胶乳凝集试验分试管法和玻片法两种。四、明胶凝集试验。该方法具有高灵敏度、简便、快速等优点，广泛应用于HIV-1抗体和抗精子抗体检测等。五、间接凝集反应的应用（一）抗原的检测反向间接凝集试验用于检测病原体可溶性抗原，也可用于检测各种蛋白质成分。（二）抗体的检测测抗人类免疫缺陷病毒抗体以诊断艾滋病、胶乳凝集试验用于检测抗溶血素O。第四节自身红细胞凝集试验检测标本中的抗体。第五节抗球蛋白试验Coombs试验和间接Coombs。Coombs试验除广泛应用于血液病的检测外，如自身免疫性溶血性贫血、药物诱导的溶血