动物细胞融合与单克隆抗体我要用ppt参考课件

番茄-马铃薯

（理想图）有梦想，才会有创造！如果将奶牛的细胞与植物细胞杂交，得到绿色的小奶牛，那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶吗？动物细胞也能融合吗？xuekewang动物细胞工程通常采用的技术手段

动物细胞培养动物细胞融合单克隆抗体动物细胞核移植是其他动物细胞工程技术的基础。动物细胞融合与单克隆抗体选修3：专题2细胞工程第二节动物细胞工程学习目标了解动物细胞融合的原理、过程和意义。理解单克隆抗体制备的过程和应用学习重点难点学习重点：单克隆抗体的制备和应用学习难点：单克隆抗体的制备过程植物体细胞杂交过程：植物细胞A植物细胞B去除细胞壁去除细胞壁原生质体A原生质体B诱导融合杂合的原生质体再生出细胞壁杂种细胞细胞分裂（脱分化）分化发育（再分化）愈伤组织杂种植株原生质体的制备原生质体的融合筛选组织培养思考：1、如果让动物细胞进行融合/杂交，应注意动、植物之间的哪些区别？无细胞壁全能性受限制，不能发育成杂种动物2、请设计动物细胞融合的流程。动物细胞融合与植物细胞杂交的不同：无需去除细胞壁不能培养成新的动物个体

动物细胞融合过程不同DNA的两个细胞

灭活的病毒有丝分裂两个完整的杂交细胞1、为什么可以用灭活的病毒？2、病毒不灭活可以吗？

不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。

病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。一、动物细胞融合（细胞杂交）（P52）1.概念：指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。2.结果：形成单核杂交细胞3.融合原理：细胞膜的流动性4.诱导方式物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（PEG)生物法：灭活的病毒5.意义：突破有性杂交局限，使远缘杂交成为可能广泛应用多个领域重要用途：制备单克隆抗体融合完成的标志？1.4比较植物体细胞杂交和动物细胞融合比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理融合前处理诱导方法用途细胞膜的流动性、植物细胞的全能性细胞膜的流动性用纤维素酶、果胶酶去壁用胰蛋白酶使细胞分散物理、化学方法物理、化学、灭活的病毒获完整植株主要用于制备单克隆抗体从动物的血清中分离抗体该法制备抗体的缺点：如何解决这个问题呢？抗体的传统生产方法抗原反复注射动物产量低纯度低特异性差灵敏度低1975年的实验室一个美丽的发现

每个B淋巴细胞——只能分泌一种特异性抗体怎样大量获得单一抗体进行无性繁殖（克隆）体外培养的细胞不能无限增殖？癌细胞但是一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞动物细胞培养技术动物细胞融合技术单克隆抗体你的设想既能产生特异性抗体，又能大量增殖的细胞阅读课本P52最后一段至P53第一段，回答以下问题：1.抗体是由何种细胞产生的？2.一个B淋巴细胞能产生多种抗体吗？3.动物机体免疫反应产生的抗体只有一种吗？4.简述获得抗体的传统途径？这种方法获得的抗体有什么缺陷？阅读、思考1.抗体是由何种细胞产生的？浆细胞（效应B细胞）2.一个B淋巴细胞能产生多种抗体吗？每一个Ｂ淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。3.动物免疫反应产生的抗体只有一种吗？

动物在免疫反应的过程中，体内产生的特异性抗体种类可多大百万种。阅读思考

抗原动物体内刺激B细胞

抗体抗原不纯抗体不纯筛选单一B细胞不能无限增殖产生大量抗体缺陷：产量低、纯度低、特异性差。4、传统抗体生成方法及缺陷如何解决这一问题呢？怎样才能得到产量高、纯度高、特异性强的抗体呢？思考：

科学家的设想：克隆（无性繁殖）单一的B淋巴细胞，形成细胞群，产生大量高纯度抗体。存在的困难：体外培养的B淋巴细胞不可无限增殖问题1：哪种细胞可以无限增殖呢？肿瘤细胞问题2：怎样让细胞既能大量繁殖，又能产生专一抗体呢？B淋巴细胞与肿瘤细胞进行细胞融合,

制备单克隆抗体怎样获得大量高纯度抗体呢？二、单克隆抗体的制备

问题1：怎样让动物产生特异性针对某种抗原的B淋巴细胞（浆细胞）？对动物注射这种抗原，产生免疫反应

问题2：诱导融合后，培养液中会有几种细胞？如何处理？问题探究：5种（B—B;B—瘤;瘤—瘤;B细胞;瘤细胞），筛选

问题3：从动物体内提取B淋巴细胞时，能否确保B淋巴细胞的单一性？杂交的细胞是否都是符合要求的？

不能，可能存在多种B淋巴细胞，融合为多种杂交瘤细胞，所以需多次检验、筛选后，才能大规模培养，获得专一抗体。请设计单克隆抗体制备过程的简要方案：效应B淋巴细胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合多种杂交细胞在具有筛选作用的培养基上培养专一抗体检验阳性克隆上述杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞单克隆抗体注射到小鼠体内体外培养单克隆抗体的制备过程第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞。特异性强，灵敏度高产生相应的B淋巴细胞技术？杂交细胞灭活的病毒等手段小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞经免疫的小鼠提取杂交瘤细胞第一次筛选用特定的选择性培养基第二次筛选能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞体外培养注射到小鼠腹腔提取单克隆抗体三、单克隆抗体的应用（1）作为诊断试剂——最广泛的用途准确、高效、简易、快速

如：同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等（2）用于治疗疾病和运载药物2、生物导弹=单克隆抗体+药物，治疗肿瘤(“生物导弹”——单抗制导瞄准，药物为弹药)1、主要用于癌症治疗——瞄准癌细胞的生物导弹4、优势：既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。3、主要是利用抗原抗体结合的特异性动物细胞融合单克隆抗体制备过程：原理：细胞膜的流动性意义：突破有性杂交局限，使远缘杂交成为可能应用：主要用于制备单克隆抗体制备过程：特点：特异性强,灵敏度高,产量大应用：用作诊断试剂，治疗疾病和运载药物小结：1．在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）A．结果是相同的

B．杂种细胞的形成过程基本相同C．操作过程中酶的作用相同D．诱导融合的手段相同Ｂ练习：2.用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，科学家得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）

A.经过免疫的B淋巴细胞

B.经过免疫的T淋巴细胞

C.不经过免疫的T淋巴细胞

D.不经过免疫的B淋巴细胞A３.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）

①淋巴细胞②小鼠骨髓瘤细胞③B淋巴细胞自身融合细胞④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞⑤杂交瘤细胞

A．②④B．①③⑤

C．①②③④

D．②③C4、研究单克隆抗体治疗癌症的思路是（）A．利用单克隆抗体特异性地对抗癌细胞B．以单克隆抗体作抗癌药物杀死癌细胞C．抗癌物质在克隆细胞中大量合成D．单克隆抗体携带抗癌药物特异性地与癌细胞结合DB体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC

5.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案制备单克隆抗体

不能，没有注射抗原，无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞。(1)该实验方案的目的是：(2)该方案能达到预期效果吗？为什么？(3)A是从小鼠的脾脏中取得__________该细胞能够产生______。(4).图中B为________________过程，常用_________________诱导，该细胞继承双亲细胞的遗传特性，既能__

________,又能___________。B淋巴细胞抗体细胞融合灭活的病毒分泌专一抗体迅速大量增殖谢谢①例5、右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：（1）该方案能达到预期效果吗？

。原因是

____________________________________________________________。

（2）图中②为

过程，常用

作为诱导剂。该细胞继承了_____________________

，因此不仅能分泌

___________，还有

本领。

不能

没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生专一抗体的B淋巴细胞

细胞融合

灭活病毒

双亲细胞的遗传物质

特异性抗体

大量增殖制备单克隆抗体（3）该方案的目的是_________________________。植物体细胞杂交示意图动物细胞融合过程示意图活动4：

请同学们仔细阅读P53-P54单克隆抗体的制备过程，完成导学案P5第4题。3、整个制备过程为何要经过两次筛选?（第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。

由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。）

思考：1、本过程利用了哪些原理？免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体任务：阅读教材52页，完成下列问题

限时5分钟1.动物细胞融合的概念2.动物细胞融合的结果3.动物细胞融合的原理4.诱导动物细胞融合的方法提问？1.抗体是由何种细胞产生的？

效应B细胞（浆细胞）。2.一个Ｂ淋巴细胞(浆细胞)能分泌多种抗体吗？

每一个Ｂ淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。3.简述获得抗体的传统途径？