外周血铁调素25 mRNA及蛋白表达水平在白血病患儿中的临床价值

外周血铁调素25mRNA 及蛋白表达水平在白血病患儿中临床价值杨卫红;李培岭;李树军【摘要】ObjectiveTostudytheexpressionofHepc-25mRNAandproteininperipheralbloodofchildrenwithleukemiaandtoexplorethecorrelationbetweenexpressionlevelandefficacyofchemotherapy.Method93casesofchildrenwithleukemiawhowereadministeredwithMRregimenwereincludedasstudygroup,whileanother20casesofhealthychildrenwereenrolledascontrolgroup;peripheralbloodwasextractedtodeterminetheHepc-25mRNAandpro-teinlevelsusingRT-PCRandELISA;thecorrelationbetweenHepc-25andefficacywasanalyzed.ResultHepc-25mRNAandproteinlevelsinstudygroupweresignificantlyhigherthanthoseinthecontrolgroup(P<0.05).Aftertreat-ment,Hepc-25mRNAandproteinlevelsinchildrenwithresponseweresignificantlydecreased(P<0.05),andtherewerenosignificantdifferencesbeforeandaftertreatmentinchildrenwithoutresponse(P>0.05).ConclusionTheexpressionofHepc-25inperipheralbloodofchildrenwithleukemiaishigh,whichisusefulinpredictingrecurrence,andiscloselycorrelatedtheefficacyofchemotherapy.%（ALL）患儿外周血铁调素25（Hepc-25）mRNA 和蛋白表达情况，并探讨其与ALL化疗疗效的关系。方法选取接受MR方案治疗的白血病患儿93例作为观察组，另选取同20例健康体检儿童作为对照组。采用实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）和酶联免疫吸附法（ELISA）测定两组外周血中Hepc-25mRNA 和蛋白表达水平。分析Hepc-25与ALL疗效的关系。结果白血病患儿外周血Hepc-25mRNA 及蛋白表达水平均高于对照组，差异具有统计学意义（P﹤0.05）；经治疗好转组患儿外周血Hepc-25mRNA 及蛋白表达水平较治疗前均下降（P﹤0.05）；而治疗无效组患儿Hepc-25mRNA 及蛋白表达水平较治疗前比较，差异无统计学意义（P﹥0.05）。结论ALL患儿外周血Hepc-25过表达对疾病复发有一定的预测价值，白血病患儿的化疗疗效有密切关系。《癌症进展》2016(014)004【总页数】4页(P360-362,365)【关键词】急性淋巴细胞白血病;患儿;Hepc-25;化疗疗效【作者】杨卫红;李培岭;李树军【作者单位】4531000;4531000;4531000【正文语种】中文【中图分类】R733.7急性淋巴细胞白血病（acutelymphoblasticleukemia，ALL）是一类造血干细胞贫血、出血、感染、发热以及肝、脾、淋巴结肿大和骨骼疼痛［1-2］。白血病的5病因学的研究也获得了一些进展［3-5］。铁调素（hepcidin，Hepc）是一种由细胞系统铁释放，是一种重要的负性铁调节激素［6-7］Hepc有密切联系，近几年的研究证实，HepcHepc缺乏则导致多数家族性血色沉着病和无效性红细胞生成性贫血伴随铁离子吸收增加，其中，Hepc-25是其主要活性部分［8-10］。目前，国内外对Hepc-25在白血病中的发生与疾病进展机制研究鲜见报道，本研究观察分析了白血病患儿外周血Hepc-25mRNA和研究对象经新乡医学院第一附属医院医学伦理委员会批准，选取2011年2月至2014年293ALL［11］；②排除63302～13岁，平均年龄（8.7±2.4）岁。所有患儿均根据文献11］的标准化疗方案进行治20仪器与试剂MPBiomedicals公司；SYBRGreen通用型qPCRMasterMixRoche生物公司；RT-PCR扩增仪购自Bio-RadTAKARA公司；Hepc-25蛋白ELISAR&D公司。检测方法RT-PCR分析外周血Hepc-25mRNA 变化抽取观察组患儿治疗前与治疗后抗凝外周血各5m并抽取对照组健康儿童外周血作为对照。根据RNA提取试剂盒说明书和逆转录试剂盒提取RNA，并逆转录为cDNA。根据GeneBank供的Hepc-25序列，设计如下引物：Hepc-25-F：5'-ACGGCACGATCGCACTGAGC-3' ；Hepc-25-R：5'-TCGCCTCCTTCGCCTCTGGA-3' 。。采用实时荧光定量PCR仪析Hepc-25mRNA 的表达水平。ELISAHepc-25蛋白表达水平抽取观察组患儿治疗前和治疗后2m4000r/min10minELISAELISAHepc-253492nm波长测OD值。采用同种方法检测对照组儿童外周Hepc-25蛋白表达水平。随访与观察终点治疗后根据《儿童急性淋巴细胞白血病诊疗建议（第三次修订草案）准进行疗效评价［11］，（完全缓解+部分缓解）例数/总例数×100%，未缓解视为治疗无效。随访至2014年12月，对93例患儿均完成全部随访观察，随访率为100%。统计学方法所有数据均采用SPSS13.0软-件进行统计分析，计量资料采用均数±标准差tPearsonP＜0.05意义。两组儿童外周血Hepc-25mRNA 和蛋白表达水平比较结果显示，观察组患儿外周血Hepc-25mRNA 水平高于对照组健康儿童（P=0.008）；Hepc-25差异有统计学意义（P＜0.01）。（1）观察组患儿治疗前后外周血Hepc-25mRNA 和蛋白表达水平比较观察组患儿经治疗后随访结果显示，完全缓解14例，部分缓解47例，未缓解例。好转率为64.89%。根据疗效评价结果将观察组分为好转组（61例）与无效组（32例），好转组患儿治疗前外周血Hepc-25mRNA 和蛋白表达水平均低于无效组患儿，差异有统计学意义（P=0.014P=0.007）；治疗后好转组患儿Hepc-25mRNA 和蛋白表达水平亦低于治疗前（P＜0.01、P=0.012）；而无效组患儿Hepc-25mRNA 和蛋白表达水平较治疗前比较差异无统计学意义（P＞0.05）。（表2）2.3Hepc-25mRNA 及蛋白表达水平与疗效的关系如上结果所述，Hepc-25mRNA 和蛋白表达水平较高的患儿疗效较差，而Hepc-25mRNA 和蛋白表达水平较低的患儿疗效较好。相关性分析显示mRNA 和蛋白表达水平与患儿的疗效呈负相关（r=-1.032，P＜0.05）。无定论，因而较缺乏针对性的病因预防手段［12-13］。根据白血病细胞不成熟的现贫血、出血和感染症状［14］。Hepc-25具有广谱杀菌、抑菌作用，属于防御性蛋白家族。目前国内外多项研究已证实Hepc-25是Hepc的主要活性成分。Hepc由肝细胞分泌，又叫肝脏抗菌多肽。Hepc作为一种炎症急性期反应蛋白，积极参与了机体对贫血、组织缺氧和血等与铁代谢相关性疾病中也具有一定作用［15-17］。研究显示，贫血、组织缺HepcHepc-25还与多种炎性和转录因子相关，它们共同影响了炎性反应的发生［18-20］。Nicolas［21］对慢性炎症和贫血小鼠尿液的分析结果显示，与对照组比较，Hepc的升高可达100倍，而在较轻的炎性疾病中，尿液中Hepc-25相应减少，且与血清急性期反应蛋白铁蛋白水平成正比。陈姣等［22］采用RT-PCR和ELISA法分析了54例多发性骨髓瘤患者外周血Hepc-25mRNA 及蛋白表达水平，研究Hepc-25的动态变化与患者临床表现的相关性及对预后的临床预测价值，结果发现，患者的Hepc-25蛋白表达水平高与慢性贫血密切相关，且较高水平的Hepc-25蛋白表对临床复发具有一定的预测价值，并与患者疗效、预后有密切关系。本研究检测了白血病患儿外周血中Hepc-25mRNA 和蛋白表达水平，研究结果显示，与对照组比较，白血病患儿外周血中Hepc-25mRNA 和蛋白表达水平均升高提示Hepc-25蛋白表达水平是白血病发生过程中较敏感指标，并有可能成为白血病临床辅助诊断指标。另外，本研究结果发现，好转组患儿Hepc-25mRNA 和蛋白表达水平低于无效组患儿，提示Hepc-25mRNA 和蛋白表达水平可作为临床判断白血病患儿化疗疗效的预测指标。好转组患儿在接受治疗后Hepc-25mRNA 和蛋白表达水平下降，无效组患儿治疗前后Hepc-25mRNA 和蛋白表达水平比较差异无统计学意义。进一步说明Hepc-25mRNA 和蛋白表达水平与白血病患儿化疗疗效存在密切关系，原因可能是Hepc-25蛋白是一种炎症急性期蛋白，其水平代表患儿机体炎性水平的高低，炎性水平愈高，则治疗效果越不佳。综上所述，白血病患儿体内Hepc-25mRNA 和蛋白表达水平高于正常儿童，且与患儿的化疗疗效密切相关，对白血病患儿的临床治疗与复发诊断亦具有指导意义。【相关文献】［1］LuXT.Therapeuticstrategiesforchildhoodhigh-riskacutelymphoblasticleukemiaDaXueXueBao，2013，45（2）:327-332.［2］2008，15（2）:355-357.［3］KarakaZ，KoBS， 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