2023版高三一轮总复习生物（浙科版）教案：选择性必修3 第9单元 第34讲基因工程

第34讲基因工程1．工具酶的发现和基因工程的诞生(a)2．基因工程的原理和技术(b)3．基因工程的应用(a)4．活动：提出生活中的疑难问题，设计用基因工程技术解决的方案(c)一、基因工程赋予生物新的遗传特性1．基因工程是在多个生物学分支学科的基础上发展而来(1)基因工程：指有意识地把一个人们所需要的基因转入另一个生物体中，使后者获得新的遗传性状或表达所需要产物的技术。(2)优点：通过在分子水平上对基因进行直接操控，打破常规育种难以突破的物种间的界限。(3)基因工程的核心：构建重组的DNA分子。2．对DNA进行剪切、连接和复制是实现重组DNA技术的基础(1)限制性内切核酸酶(简称“限制酶”)①来源：主要存在于细菌等微生物中。②功能：能够识别双链DNA上特定的一小段核苷酸序列，并催化其中特定的两个核苷酸之间的磷酸二酯键水解，使得DNA双链在特定的位置断开。③断开后的DNA末端a．黏性末端：末端有凸出的单链部分。b．平末端：末端没有单链部分。(2)DNA连接酶①作用：将不同来源的2个DNA分子的双链通过磷酸二酯键分别连接起来，形成一个稳定的重组DNA分子。②种类种类比较E．coliDNA连接酶T4DNA连接酶来源大肠杆菌T4噬菌体特点只能连接黏性末端既可以连接黏性末端，又可以连接平末端(3)载体①概念：具备自主复制能力的DNA分子。②作用：能与外源DNA相连接并将其送入受体细胞中进行扩增。③理想的载体应具有以下3个特征：①含有复制起点，能够独立自主复制并稳定存在；②含有一种或多种限制酶的识别序列，方便外源基因插入载体中；③具有筛选作用的标记基因，以便能够通过表型鉴别含有载体的细胞。(4)种类：质粒，有些动、植物病毒及噬菌体。3．DNA的粗提取和鉴定(1)实验原理①提取原理a．提取核DNA先要破坏细胞，幼嫩的植物材料如果经过冷冻后再研磨，细胞结构容易被破坏；用十二烷基硫酸钠(SDS)处理材料，能使核蛋白变性并与DNA分离；乙二胺四乙酸二钠(EDTA)能抑制DNA酶活性，防止核DNA被酶解。b．DNA在2mol/L的NaCl溶液中溶解度高，且Na＋与DNA形成钠盐；DNA钠盐不溶于酒精而某些蛋白质能溶于酒精，若在提取液中加入95%的冷酒精，能使DNA钠盐形成絮状沉淀物而析出。②鉴定原理：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。(2)方法步骤：研磨→过滤→离心→加冷酒精→鉴定。二、基因工程的一系列操作可使生物获得新的遗传特性1．基因结构(1)原核基因①编码蛋白质的核苷酸序列是连续的。②启动子位于基因的“上游”，有RNA聚合酶结合的位点，控制转录的开始。③终止子位于基因末端，当RNA聚合酶到达时，释放出RNA产物，转录结束。(2)真核基因①真核细胞基因也具有启动子、终止子等调控序列，但是编码蛋白质的核苷酸序列是不连续的。②编码蛋白质的序列称为外显子，外显子之间不能编码蛋白质的序列称为内含子。③不同基因内含子和外显子的数目及长度是不同的。2．获取目的基因是基因工程操作的第一步(1)用化学合成法合成目的基因条件：需要已知目的基因全部序列。缺点：成本较高，适于合成序列较短的基因。(2)借助载体建立基因文库是获取目的基因的一种常用方法①基因组文库：把某种生物的基因组DNA切成适当大小，分别与载体组合，导入微生物细胞，形成克隆。基因组中所有DNA序列克隆的总汇被称为基因组文库。②利用成熟的mRNA构建cDNA文库的基本方法：从特定的组织或细胞中提取并纯化全部mRNA，然后在逆转录酶等酶的催化下，以mRNA为模板合成互补的DNA，即cDNA。最后，借助载体，利用与构建基因组文库相同的方法构建cDNA文库。(3)聚合酶链式反应(简称PCR技术)①概念：在DNA聚合酶作用下，在体外进行DNA大量扩增的一种分子生物学技术。②特点：简便、快速、灵敏。③应用：医学诊断、法医鉴定、古生物学研究等。④条件模板：待扩增的DNA分子。原料：4种脱氧核苷三磷酸，即dNTP。酶：耐高温的Taq_DNA聚合酶。引物：很短的DNA单链，与模板互补配对形成一小段DNA双链。⑤过程：变性→退火→延伸。⑥结果：每一次循环后DNA的量可以增加一倍，DNA呈指数形式扩增。(4)电泳技术①用途：该技术是分离、鉴定、纯化核酸和蛋白质的常用方法。②电泳是指带电粒子在电场作用下，向与其携带电荷相反的电极迁移的过程。③分离物质原理：不同带电粒子因分子大小、形状、所带电荷等因素不同，迁移速率也会有所差异。④电泳技术分离核酸原理核酸是带有负电的生物大分子，其迁移速率主要受核酸片段长度影响。在电场强度一定时，核酸分子越大，向正极迁移速率越慢。3．利用表达载体构建重组DNA分子是基因工程操作的第二步(1)克隆载体：用于大量扩增外源DNA的载体，称为克隆载体。(2)表达载体：使目的基因既能扩增又能表达出相应蛋白质的载体，称为表达载体。(3)构建重组DNA分子：用同种限制性内切核酸酶剪切含有目的基因的DNA片段以及表达载体，然后用DNA连接酶将它们连接起来，可完成体外重组，形成重组的DNA分子。4．将目的基因导入受体细胞是基因工程操作的第三步(1)将目的基因导入细菌细胞①感受态细胞：自然条件下，细菌的转化效率很低，通过化学和物理方法的处理可以增强细菌捕获外源DNA的能力，成为感受态细胞。②方法(以大肠杆菌为例)：将大肠杆菌放于低温、低浓度的CaCl2溶液中，造成细胞膨胀，细胞膜通透性改变，成为感受态细胞。再在低温条件下将大肠杆菌与重组DNA分子混合，使外源DNA黏附于受体细胞表面，最后进行短暂的热刺激处理，使外源DNA转入细胞。(2)将目的基因导入动物细胞①常用方法：显微注射法。②常用受体细胞：受精卵。(3)将目的基因导入植物细胞①常用方法：农杆菌转化法。②农杆菌特点：自然条件下，根癌农杆菌的Ti质粒上的T­DNA片段能整合到植物染色体DNA中。③转化方法：将目的基因插入质粒的T­DNA中，用重组Ti质粒转化农杆菌，再让农杆菌感染植物细胞，目的基因就会随T­DNA整合到植物染色体DNA中，最后通过植物组织培养技术可培育出完整的转基因植株。5．检测目的基因及其表达产物是基因工程操作的第四步(1)通过检测DNA可确定目的基因在受体细胞内是否稳定存在。①借助载体上的标记基因可以检测目的基因是否在受体细胞中稳定地存在并遗传。②PCR和核酸分子杂交技术可更加精准地鉴定受体细胞中是否转入了目的基因。a．运用PCR技术检测的简要步骤是：根据目的基因的序列设计PCR引物，利用待检DNA为模板进行PCR，再通过电泳或DNA测序技术鉴定PCR产物。b．核酸分子杂交技术利用探针检测目的基因的简要方法是：用化学方法使待检的DNA变性成单链并固定在硝酸纤维素膜上，然后加入探针，在适当的条件下探针与互补的目的基因片段形成双链。漂洗硝酸纤维素膜去除未互补结合的探针后，若硝酸纤维素膜仍具有放射性或荧光，则可判断待检DNA中含有目的基因。(2)检测RNA、蛋白质以及个体水平上是否出现相应性状，可得知目的基因是否正确表达。①运用核酸分子杂交技术还可检测受体细胞中是否含有目的基因转录出的mRNA。如果能检测到目的基因转录出的mRNA，则说明目的基因在受体细胞内成功转录。②运用抗原－抗体杂交技术可以检测目的基因是否表达出相应的蛋白质。如果能探测到目的蛋白，则说明目的基因在受体细胞内成功表达。③观察测定个体是否表现出目的基因控制的特定性状并稳定遗传，是判断转基因成功的直接证据。三、基因工程及其延伸技术应用广泛1．基因工程改善了人类的生活品质(1)应用基因工程技术诊断、治疗、研究疾病领域发展迅速，主要在以下四个方面取得了引人瞩目的成果。①运用核酸分子杂交、PCR等技术进行基因诊断。②向患者体内导入正常基因进行基因治疗。③利用转基因生物生产基因工程药物。④转基因动物可为研究疾病机理提供模型。(2)应用基因工程技术进行法医鉴定，能保护受害者权益。(3)应用基因工程可培育具有优良性状的农牧业品种。(4)基因工程技术可用于保护生态环境。2．蛋白质工程是基因工程的延伸蛋白质工程首先要建立蛋白质功能与结构的联系，然后依据所需蛋白质的功能，设计改造天然蛋白质的空间结构，推测出其氨基酸的序列，并根据“中心法则”逆推出基因的核苷酸序列，进而利用基因工程技术改变DNA上特定位点的核苷酸序列，最终将改造了的基因导入受体细胞后进行表达。考点1基因工程的三大操作工具1．基因工程工具酶(1)限制性内切核酸酶：能够识别和剪切DNA分子内一小段特殊核苷酸序列的酶。主要从原核生物中分离纯化得到。①识别和剪切的对象：双链DNA分子中的磷酸二酯键(即一条链上相邻脱氧核苷酸间的键)。②识别和剪切的序列：限制性内切核酸酶具有专一性，不同的酶剪切的位点不同。限制酶识别的序列大多数为回文对称结构，剪切位点在DNA两条链相对称的位置。回文对称结构：识别序列中都可以找到一条中心轴线，如图所示，中轴线两侧的双链DNA分子上的碱基是反向对称重复排列的。甲乙③剪切的结果：产生黏性末端或者平末端。甲乙(2)DNA连接酶：这种酶的作用是将2个DNA片段连接在一起，形成的DNA分子称为重组DNA分子。①连接黏性末端：一般可以连接同一种限制酶剪切后，具有相同黏性末端的两个DNA片段；也可以连接不同种限制酶剪切后具有相同黏性末端的两个DNA片段。一般选用E·coliDNA连接酶。②连接平末端：可以连接任意两个平末端，但是连接的成功率要比黏性末端低得多。一般选用T4DNA连接酶。2．易混淆酶的比较名称作用部位作用底物作用结果应用限制性内切核酸酶磷酸二酯键DNA将DNA切断，形成黏性末端或平末端基因工程和基因诊断DNA连接酶磷酸二酯键DNA片段将两个DNA片段连接成一个重组DNA分子基因工程DNA聚合酶磷酸二酯键脱氧核苷酸将单个脱氧核苷酸连接到DNA子链末端，形成子代DNADNA复制和PCRDNA酶(水解酶)磷酸二酯键DNA将DNA水解成游离的脱氧核苷酸水解DNADNA解旋酶氢键DNA打开DNA双链，形成DNA单链DNA复制RNA聚合酶磷酸二酯键和氢键核糖核苷酸打开DNA双链的同时将单个核糖核苷酸连接到新合成的RNA单链末端转录和RNA复制逆转录酶磷酸二酯键脱氧核苷酸将单个脱氧核苷酸连接到以RNA为模板逆转录形成的DNA单链末端逆转录1．(2021·宁波市余姚选考模拟)下列关于基因工程的叙述正确的是()A．同种限制性内切核酸酶切出的黏性末端一定相同，不同种限制性内切核酸酶切出的黏性末端一定不同B．DNA连接酶能催化任意2个DNA片段之间形成磷酸二酯键C．通常根据标记基因的产物特征进行筛选含目的基因的受体细胞，根据目的基因的产物特征判断基因工程是否取得成功D．质粒、限制性内切核酸酶、DNA连接酶的化学本质都是DNAC[同种限制性内切核酸酶切出的黏性末端相同，不同种限制性内切核酸酶切出的黏性末端也可能相同，A错误；DNA连接酶是将具有黏性末端碱基互补的2个DNA片段连接在一起或连接两个平末端，B错误；质粒的化学本质是DNA，限制性内切核酸酶、DNA连接酶的化学本质为蛋白质，D错误。]2．根据基因工程的有关知识，回答下列问题。(1)限制性内切核酸酶剪切DNA分子后产生的片段，其末端类型有________和________。(2)质粒运载体用EcoRⅠ剪切后产生的片段如图：eq\x(AATTC……G,G……CTTAA)，为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ剪切外，还可用另一种限制性内切核酸酶剪切，该酶必须具有的特点是____________________________________________________________________________________________________。(3)根据来源的不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即________DNA连接酶和________DNA连接酶。(4)基因工程中除质粒外，________和________________也可作为载体。(5)若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是________________________。[解析](1)限制性内切核酸酶(简称限制酶)剪切DNA分子后产生的片段，末端类型有黏性末端和平末端。(2)目的基因与运载体具有相同的黏性末端才能连接，若用包括EcoRⅠ在内的两种限制酶剪切目的基因，则另一种限制酶必须具有的特点是剪切产生的DNA片段末端与EcoRⅠ剪切产生的相同。(3)按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即E·coliDNA连接酶(来源于大肠杆菌)和T4DNA连接酶(来源于T4噬菌体)。(4)基因工程中常用的载体是质粒，此外还有噬菌体和动植物病毒。(5)由于未处理的大肠杆菌吸收质粒(外源DNA)的能力极弱，因此若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，而通常用Ca2＋处理大肠杆菌细胞，使其成为感受态细胞，此时细胞壁和细胞膜的通透性增大，容易吸收重组质粒。[答案](1)平末端黏性末端(2)剪切产生的DNA片段末端与EcoRⅠ剪切产生的相同(3)T4E·coli(4)动植物病毒噬菌体(5)未处理的大肠杆菌吸收质粒(外源DNA)的能力极弱考点2基因工程的操作程序及应用1．限制酶的选择原则(1)根据目的基因两端的限制酶剪切位点确定限制酶的种类①应选择剪切位点位于目的基因两端的限制酶，以便将目的基因“切出”，如图可选择PstⅠ。②不能选择剪切位点位于目的基因内部的限制酶，以防破坏目的基因，如图不能选择SmaⅠ。③为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，也可使用不同的限制酶剪切目的基因和质粒，如图也可选择用PstⅠ和EcoRⅠ两种限制酶(但要确保质粒上也有这两种酶的剪切位点，而且这两种酶的剪切位点不至于破坏标记基因)。(2)根据质粒的特点确定限制酶的种类(3)根据Ti质粒的T­DNA片段选择限制酶，图中甲、乙、丁Ti质粒均不宜选取，而丙Ti质粒宜选取(设剪切目的基因的限制酶为XbaⅠ和SacⅠ)。2．目的基因的检测与鉴定(1)载体上标记基因的标记原理载体上的标记基因一般是一些抗生素的抗性基因。目的基因要转入的受体细胞没有抵抗相应抗生素的能力。当含有抗生素抗性基因的载体进入受体细胞后，抗性基因在受体细胞内表达，使受体细胞能够抵抗相应抗生素，所以在受体细胞的培养体系中加入该种抗生素就可以只保留转入载体的受体细胞(倘若在选择培养基中不能存活，则表明无载体转入，当然不会有“目的基因”转入，能存活时必含该载体)，原理如图所示：(2)使用目的基因作探针，利用核酸分子杂交技术，检测受体细胞的载体上是否含目的基因。(3)使用目的基因作探针，运用分子杂交技术检测目的基因是否转录出特定mRNA。(4)采用抗原－抗体杂交技术，从转基因生物中提取蛋白质(作抗原)，与相应抗体杂交，依据是否出现杂交带确认目的基因是否“指导”特定蛋白质的合成。(5)采用抗虫、抗病毒等接种实验，进行目的基因成功表达的“个体生物学”水平的检测。1．图甲、乙中的箭头表示三种限制性内切核酸酶的酶切位点，ampr表示氨苄青霉素抗性基因，neo表示新霉素抗性基因。下列叙述正确的是()甲乙A．图甲中的质粒用BamHⅠ剪切后，含有4个游离的磷酸基团B．在构建重组质粒时，可用PstⅠ和BamHⅠ剪切质粒和外源DNAC．用PstⅠ和HindⅢ酶切，可以保证重组DNA序列的唯一性D．导入目的基因的大肠杆菌可在含氨苄青霉素的培养基中生长C[图甲中的质粒只有一个BamHⅠ剪切位点，剪切后形成一个直链DNA，含2个游离的磷酸基团，A错误；BamHⅠ剪切位点在目的基因上，不能用该酶剪切外源DNA，B错误；用PstⅠ和HindⅢ酶切，能将质粒切成两个片段，并能将外源DNA切成四段，只有含目的基因的片段通过DNA连接酶与质粒连接形成的重组质粒符合要求，而另一个重组质粒无目的基因，不符合要求，从而保证重组DNA序列的唯一性，C正确；导入目的基因的大肠杆菌，其重组质粒是用PstⅠ和HindⅢ剪切形成的，其中的ampr(氨苄青霉素抗性基因)已被破坏，D错误。]2．CAR­T细胞疗法是通过设计CAR基因，并导入癌症患者的T淋巴细胞中，使其转化为CAR­T细胞，CAR­T细胞膜上的CAR蛋白与癌细胞表面抗原特异结合后，激活CAR­T细胞使其增殖、分化，从而实现对癌细胞的特异性杀伤和记忆。主要过程如图。请回答下列问题。(1)要获取CAR基因，可采取PCR技术进行大量扩增，前提是__________。(2)将CAR基因导入患者T淋巴细胞前，需完成过程[①]_________，该过程中先要用__________剪切含有CAR基因的DNA片段和________，形成相同的末端，再用DNA连接酶连接形成pCDH­CAR，pCDH­CAR上除目的基因外，还有一些必需的部分，比如________，它是RNA聚合酶识别和结合的部位。(3)完成过程②常用方法是________法。此外，还可以先将CAR基因整合到逆转录病毒载体中，再利用病毒的________性导入并将CAR基因整合到T淋巴细胞的____________上。(4)检测CAR­T细胞中的CAR基因是否转录出了mRNA所采用的方法是________________。(5)在将CAR­T细胞输给病人进行治疗之前，还需在实验室内进行细胞扩增培养。体外培养CAR­T细胞的培养液中除合成培养基的成分外，一般还需添加________等天然成分。[解析](1)利用PCR技术对CAR基因进行大量扩增的前提是一段已知CAR基因序列。(2)CAR基因为目的基因，在将该基因导入患者T淋巴细胞前，需完成基因表达载体的构建，即过程①；该过程需要用同种限制酶(限制性内切核酸酶)剪切目的基因和载体(pCDH质粒)，以形成相同的末端；基因表达载体上RNA聚合酶识别和结合的部位是启动子。(3)过程②表示将重组DNA分子导入受体细胞，动物细胞常用方法为显微注射法。病毒为寄生生物，故可以利用病毒的侵染特性导入并将CAR基因整合到T细胞的染色体DNA上。(4)目的基因的检测与鉴定的第二步是检测目的基因(CAR基因)是否转录出了mRNA，方法是核酸分子杂交技术。(5)动物细胞培养时常加入血清、血浆等天然成分。[答案](1)一段已知CAR基因序列(2)构建基因表达载体限制性内切核酸酶pCDH质粒启动子(3)显微注射侵染染色体DNA(4)核酸分子杂交技术(5)血清、血浆考点3蛋白质工程1．蛋白质工程崛起的缘由(1)基因工程的实质：将一种生物的基因转移到另一种生物体内，后者可以产生它本不能产生的蛋白质，进而表现出新的性状。(2)基因工程的不足：在原则上只能产生自然界已存在的蛋白质。2．蛋白质工程的基本原理3．蛋白质工程的基本途径1．如图表示是利用蛋白质工程生产保存时间更久的干扰素(一种糖蛋白)的核心流程，下列叙述正确的是()A．该过程得到的干扰素与自然界中的干扰素相同B．图中③过程得到的脱氧核苷酸序列往往是唯一的C．蛋白质工程的基础是蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系D．蛋白质工程是通过对蛋白质的结构进行修饰或合成来操作的C[图示是利用蛋白质工程生产保存时间更久的干扰素，该过程得到的干扰素是经过改造的，与自然界中的干扰素不相同，A错误；由于密码子的简并性，图中③过程得到的脱氧核苷酸序列往往不是唯一的，B错误；结构决定功能，蛋白质工程的基础是蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系，C正确；蛋白质工程是通过对基因的结构进行修饰或合成来操作的，D错误。]2．新冠病毒通过刺突蛋白(S蛋白)的活性域(RBD)与人体细胞表面的ACE2受体相互作用感染细胞。科学家设计了一种自然界中不存在的蛋白质LCB1，可与S蛋白的RBD紧密结合，以干扰新冠病毒的感染。下列说法不合理的是()A．LCB1的结构可能与S蛋白的抗体有相似之处B．S蛋白的RBD结构可以为设计LCB1提供信息C．生产LCB1用到了基因工程的操作技术D．可直接从细胞中获取基因用于LCB1的生产D[S蛋白的抗体能与S蛋白的RBD特异性结合，而根据题干可知，LCB1可与S蛋白的RBD紧密结合，说明LCB1的结构可能与S蛋白的抗体类似，A正确；由于LCB1可与S蛋白的RBD紧密结合，故LCB1可依据S蛋白的RBD结构进行设计，B正确；生产LCB1用到了蛋白质工程，其中一些步骤用到了基因工程的操作技术，例如人工合成DNA，C正确；由题意可知蛋白质LCB1是一种自然界中不存在的蛋白质，故不能从细胞中获取相应的基因，D错误。]1．(2020·浙江7月选考)下列关于基因工程的叙述，正确的是()A．若受体大肠杆菌含有构建重组质粒时用到的限制性内切核酸酶，则一定有利于该重组质粒进入受体并保持结构稳定B．抗除草剂基因转入某抗盐植物获得2个稳定遗传转基因品系，抗性鉴定为抗除草剂抗盐和抗除草剂不抗盐，结果表明一定是抗盐性的改变，与抗除草剂基因的转入无关C．抗除草剂基因转入某植物获得转基因植株，其DNA检测均含目的基因，抗性鉴定为抗除草剂和不抗除草剂，结果表明一定是前者表达了抗性蛋白而后者只表达抗性基因RNAD．已知不同分子量DNA可分开成不同条带，相同分子量的为一条带。用某种限制性内切核酸酶完全酶切环状质粒后，出现3条带，结果表明该质粒上一定至少有3个被该酶切开的位置D[若受体大肠杆菌含有构建重组质粒时用到的限制性内切核酸酶，则该酶可能会剪切重组质粒，破坏进入受体细胞的重组质粒的结构，A错误；抗除草剂基因转入某抗盐植物获得2个稳定遗传转基因品系，抗性鉴定为抗除草剂抗盐和抗除草剂不抗盐，则最大可能是部分抗除草剂基因整合到抗盐基因的内部，从而导致该抗盐基因被破坏，无法表达抗盐性状，B错误；抗除草剂基因转入某植物获得转基因植株，其DNA检测均含目的基因，抗性鉴定为抗除草剂和不抗除草剂，则表明前者表达了抗性蛋白，而后者的抗除草剂基因可能不能转录出mRNA，或只能转录出mRNA，但不能翻译出相应的蛋白质，C错误；已知不同分子量DNA可分开成不同条带，相同分子量的为一条带，用某种限制性内切核酸酶完全酶切环状质粒后，出现3条带，则表明该质粒上一定至少有3个被该酶切开的位置，D正确。]2．(2020·北京等级考)为了对重金属污染的土壤进行生物修复，研究者将从杨树中克隆的重金属转运蛋白(HMA3)基因与外源高效启动子连接，导入杨树基因组中(如图)。(注：①、②、③、④表示引物。)为检测获得的转基因杨树苗中是否含有导入的HMA3基因，同时避免内源HMA3基因的干扰，在进行PCR时，应选择的引物组合是()A．①＋③B．①＋②C．③＋② D．③＋④B[图示中克隆的重金属转运蛋白(HMA3)基因与外源高效启动子连接，导入杨树基因组中，若要检测获得的转基因杨树苗中是否含有导入的HMA3基因和高效启动子，需要检测是否含有高效启动子序列和HMA3基因序列，应选择的引物组合是①＋②，B正确。]3．(2018·北京高考)用XhoⅠ和SalⅠ两种限制性内切核酸酶分别处理同一DNA片段，酶切位点及酶切产物分离结果如图。以下叙述不正确的是()图1酶切位点图图2电泳结果示意图A．如图中两种酶识别的核苷酸序列不同B．如图中酶切产物可用于构建重组DNAC．泳道①中是用SalⅠ处理得到的酶切产物D．图中被酶切的DNA片段是单链DNAD[限制酶识别特定的脱氧核苷酸序列，不同的限制酶能识别不同的核苷酸序列，由电泳图可知，XhoⅠ和SalⅠ两种酶分别剪切时，识别的序列不同，A正确；同种限制酶剪切出的DNA片段，具有相同的黏性末端，再用DNA连接酶进行连接，可以构成重组DNA，B正确；SalⅠ将DNA片段切成4段，XhoⅠ将DNA片段切成3段，根据电泳结果可知泳道①为SalⅠ，泳道