应激与肠道粘膜免疫耐受课件

应激对肠道粘膜(zhānmó)

免疫耐受影响滨州市人民(rénmín)医院消化科刘宝珍第一页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受

细胞核CD4T细胞APCB7CD285

MHC-II类分子抗原呈递途径MHC-II分子的合成a,b链和不变链的运输运输至膜表432溶酶体吞噬体CD4TCR抗原肽1第二页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受应激应激是指机体受到各种内、外环境刺激时所出现的非特异性全身性反应。是整个机体适应保护机理的一个重要组成部分。随着脑-肠轴及神经生物学研究的深入，表明应激源无论来自体内或体外、肉体上或心理上，都将刺激机体产生(chǎnshēng)相应的应激反应以维持机体内环境的稳定性和机体的存活。其中对免疫系统的影响也是应急反应的一个重要方面。第三页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受肠道免疫学

肠道不仅是机体(jītǐ)消化、吸收营养物质的功能器官，同时还具有黏膜屏障功能。肠黏膜屏障主要由一下方面组成：机械屏障：肠黏膜上皮细胞的完整性和上皮细胞间的紧密连接。化学屏障：胃肠道分泌的胃酸、胆汁、蛋白分解酶等。生物屏障：肠道菌群平衡。免疫屏障：上皮内淋巴细胞和SIgA等组成。肠道粘膜免疫系统是一个复杂的网络体系，由多种细胞组成。肠上皮是由极化的高度分化的肠上皮细胞通过紧密连接而成，成为黏膜防御的第一道防线。第四页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受肠道相关(xiāngguān)淋巴组织(gut-associated

lymphoidtissue，GALT包括间断分布于小肠肠壁上的Peyer’S结(Peyer’Spatch，PP)，Peyer’S结是肠道重要的免疫器官，其内含有DCs、B细胞滤泡和生发中心及少量滤泡内T淋巴细胞。Peyer’S结内的DCs可以摄取细菌(xìjūn)抗原并将其呈递给成熟的淋巴细胞，故Peyer’S结可作为针对肠道抗原产生免疫应答的主要部位。第五页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受肠道相关(xiāngguān)淋巴组织(gut-associated

lymphoidtissue，GALTPeyer’S结顶部亚上皮区域由特殊的上皮细胞覆盖，能摄取特殊类抗原如细菌，称为M细胞(Microfoldcell),适于将肠腔内抗原转运给APCs，通过其抗原提呈作用，可诱导GALT中的B淋巴细胞分化为浆细胞从而产生IgA，活化T淋巴细胞分散到肠道黏膜各处，产生相应(xiāngyīng)的免疫应答反应。第六页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受肠道相关淋巴(línbā)组织(gut-associated

lymphoidtissue，GALTDCs主要分布于Peyer’S结和肠系膜淋巴结(Mesentericlymphnodes，MLN)，少量分布于肠道黏膜固有层(Laminapropria，LP)，可以直接摄取抗原或通过伸出树突进入肠腔内摄取抗原以呈递给T、B淋巴细胞而引起免疫(miǎnyì)应答反应。第七页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受肠道相关淋巴(línbā)组织(gut-associated

lymphoidtissue，GALT有研究证明，肠道上皮细胞(epithelialcel1，EC)分泌的胸腺间质淋巴蛋白(thymicstromal|ymphoprotein，TSLP)可帮助DC维持不成熟的状态。肠道DCs的不同亚群、DCs的不同成熟阶段，均可影响其对免疫功能的调节作用。此外肠道粘膜还有吞噬细胞，在清除(qīngchú)肠道异物，消灭病原菌发挥了很大的作用。 第八页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受低度炎症(yánzhèng)反应与IBS研究发现，40％的IBS患者肠粘膜活检组织在显微镜下可见非特异性炎症改变，如中性粒细胞、肥大细胞和T细胞浸润；50％的IBS患者常规病理检查正常，但免疫组化染色可发现上皮内淋巴细胞和固有层CD25+⁄CD3+T细胞数量增加。近年来大量国外研究发现，与健康志愿者相比(xiānɡbǐ)，IBS回肠和结肠粘膜中免疫细胞的数量明显增加，如肠嗜铬细胞、肥大细胞、T细胞、巨噬细胞等。第九页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受低度炎症(yánzhèng)反应与IBS研究发现：与正常组比较，无论腹泻型还是便秘型IBS患者结肠和小肠黏膜上皮均可见到杯状细胞内黏液泡和融合的黏液分泌泡明显增多,呈分泌旺盛(wàngshèng)状态，这种现象提示肠黏膜腺细胞功能处于活跃状态。第十页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受低度炎症(yánzhèng)反应与IBS肠道杯状细胞分泌的黏液对细胞具有保护作用，可明显减轻多种损伤因子介导的肠黏膜损害，肠道杯状细胞在受到炎性介质的刺激下，分泌明显增加。因此肠道粘膜超微结构提示IBS患者肠黏膜可能(kěnéng)存在某些不明原因的炎性损伤。第十一页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受

IL-1β与IBS

IL-1β主要是由单核细胞及受损组织释放的炎性介质，也是一种免疫反应的标志物,它对胃肠分泌和运动(yùndòng)有影响。王利华等应用RT-PCR法测定了有或无痢疾/肠炎史的IBS患者及对照组肠黏膜中IL-1α、IL-1β及IL-1ra的mRNA表达：在有痢疾/肠炎史的IBS患者中，其末端回肠和直乙结肠交界处肠黏膜内IL-1βmRNA的表达明显增高。第十二页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受IL-1β与IBS国外的研究将痢疾(lìji)感染后进展或不进展为IBS的急性胃肠炎患者进行比较，其中进展为IBS患者的IL-1βmRNA表达较没有进展为IBS的患者明显增高。有研究发现神经病理性疼痛大鼠脊髓背角IL-1βmRNA及蛋白表达均明显升高。现已知IL-1βmRNA的可抑制肠道水、钠的吸收而产生腹泻，还与迟发性疼痛和过敏有关。第十三页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受IL-1β与IBSIL-1β可以通过诱导初级传入神经产生(chǎnshēng)COX-2、iNOS及SP等疼痛介质,引起中枢敏化，从而产生(chǎnshēng)持续性疼痛。因此IL-1β的表达情况是了解肠道是否存在炎症的可靠指标，也是了解肠道内脏高敏感性的指标。第十四页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受

VIP与IBS

肠道运动的调节主要包括神经系统和内分泌系统,这两个系统相互作用,相互影响,任何影响这两个系统的因素都可以使肠道运动紊乱。有研究发现IBS患者肠黏膜中杯状细胞、MC、浆细胞、神经内分泌细胞超微结构的变化.，提示它们均处于高度功能活跃和分泌旺盛状态，因此提示神经-免疫-内分泌系统可能在IBS发病中发挥着重要(zhòngyào)的作用。第十五页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受

VIP与IBS

VIP广泛(guǎngfàn)分布于肠道和神经系统，是一种含28个氨基酸残基的碱基多肽,在结肠的含量最高。VIP作用十分广泛(guǎngfàn),主要通过神经分泌和旁分泌的方式发挥作用。在消化道表现为抑制下段食管括约肌张力，抑制胃、肠肌张力，抑制小肠水电解质吸收和胆囊收缩。第十六页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受

VIP与IBS

便秘型IBS患者血浆和肠黏膜中VIP含量明显升高，推测可能(kěnéng)由于VIP一般都对胃肠道运动的抑制作用,患者体内VIP表达升高，造成了肠道动力抑制性环境，以致肠蠕动性收缩不易发生，导致便秘发生。第十七页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受

VIP与IBS

腹泻型IBS患者空腹血浆VIP水平较正常人也明显升高。腹泻型IBS与便秘型IBS之间没有差异。但是国内也有报道(bàodào),IBS患者血浆中VIP含量不高。目前,IBS患者是否存在VIP或神经支配的异常尚无定论，但VIP以其显著的肠道抑制性效应而受到研究者的关注。第十八页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受肠道炎症与免疫(miǎnyì)功能的变化有关肠道炎症和免疫功能的改变可能通过以下几种机制影响肠道功能：(1)促肾上腺皮质激素释放因子的释放：肠道内的炎症刺激可能引起促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)增加,而持续(chíxù)的CRF分泌增加可引起结肠运动加快和内脏感觉异常。第十九页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受肠道炎症与免疫功能(gōngnéng)的变化(2)破坏肠黏膜屏障：某些感染肠道的病原体直接破坏肠黏膜屏障，也可通过内毒素和细胞因子破坏肠黏膜，使其通透性增加。免疫细胞可以被食物、细菌抗原或通过肠神经系统(shénjīngxìtǒng)和免疫细胞上的神经肽类受体激活，分泌细胞因子、炎症递质以影响肠道的功能。肠道的炎症反应可能会削弱肠道黏膜的屏障作用,使得黏膜通透性增加。第二十页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受肠道炎症(yánzhèng)与免疫功能的变化(3)炎症刺激导致肥大细胞（MC）活化脱颗粒，MC是一种重要的肠道炎症细胞,表面具有胃肠激素(jīsù)的受体,一些胃肠激素(jīsù)可以刺激MC释放多种生物活性物质影响肠道运动和感觉功能,这也许是炎症所致IBS症状的关键环节,是神经-免疫和脑-肠轴之间的桥梁。第二十一页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受肠道炎症与免疫(miǎnyì)功能的变化研究发现，IBS患者(包括PI-IBS和非PI-IBS)肠黏膜内肥大细胞的数量较正常人和非IBS患者明显增多，且活化比例增高。肥大细胞和淋巴细胞均为免疫细胞，其活化还提示(tíshì)免疫机制的启动。IBS患者肠道粘膜存在炎症反应，但并不是所有IBS患者都存在炎症,且这种肠道低度炎症改变的发生率尚不明确,其相关的研究还不能充分解释这种炎症存在的原因,且这种低度炎症反应具体是如何影响肠道动力及内脏感觉而产生IBS症状,这诸多的问题还有待于进一步研究。第二十二页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受

树突状细胞、协同(xiétóng)刺激分子与肠道免疫调节

树突状细胞(Dendriticcells，DCs)是机体主要的抗原递呈细胞（professionalantigenpresentingcells，APC)，是肠道免疫系统中的重要组成成员。在这个高度抗原性的肠腔环境中，肠道黏膜免疫系统必须维持对共生菌、食物和自身抗原的免疫耐受，维持肠道自稳，并启动对病原菌的免疫应答反应，以预防控制宿主体内的感染(gǎnrǎn),在这一过程中，肠道DCs发挥着重要作用。第二十三页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受

树突状细胞、协同刺激(cìjī)分子与肠道免疫调节

人体肠道DC有许多不同的特异性亚型，其形成与肠道不同部位微环境，并且也受到各种细胞因子的影响。目前认为(rènwéi)，CD1lc+DC按是否表达表面标志CD1lb和CD8α分为四种亚型：CDl1b+CD8α-、CDl1b-CD8α+、CDl1b-CD8α-等。CD80和CD86属B7分子超家族成员，是巨噬细胞、树突状细胞等抗原递呈细胞(APC)上的重要共刺激分子,可向T细胞传递十分重要的共刺激信号。第二十四页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受

树突状细胞(xìbāo)、协同刺激分子与肠道免疫调节

T细胞活化除需要特异性抗原肽呈递的第一信号(识别信号)外,还需要协同刺激分子呈递的第二信号(协同刺激信号)。在协同刺激分子中,较重要的是B7家族的B7-1（CD80）和B7-2(CD86),它们在T细胞的生长、分化、死亡及细胞因子分泌(fēnmì)的调节过程中发挥重要作用。第二十五页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受

DCs在诱导(yòudǎo)免疫耐受中的作用

免疫耐受和免疫激活对维持肠道稳态是必要的，通常认为口服食物、可溶性抗原和肠道益生菌可产生免疫耐受。免疫耐受的可能机制是诱导T细胞无能或缺失(quēshī)。或诱导调节性T细胞产生转化生长因子TGF-β或IL-10。树突细胞在黏膜中的作用主要体现为在肠道黏膜免疫系统中的作用。研究证明，静息状态下黏膜DC主要诱导Th2的免疫应答，发挥免疫耐受的作用，其诱导免疫耐受的机制最新研究发现如下：第二十六页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受DCs在诱导(yòudǎo)免疫耐受中的作用诱导T细胞的无能或诱导激活T细胞凋亡未成熟DC表面(biǎomiàn)表达低水平的MHC分子，几乎不表达CD40、CD80、CD86、LFA-3、ICAM一1等激活T细胞所必须的辅助分子，所以，虽然它们具有很强的抗原摄取加工能力，但由于缺乏多种共刺激分子而不能活化T细胞，导致T细胞的无能或低能反应，从而诱导抗原特异性耐受。第二十七页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受DCs在诱导(yòudǎo)免疫耐受中的作用实验表明，DC通过受体介导内吞作用摄取抗原而被刺激，导致自身反应性T细胞被大部分清除。如CD205(DEC-205)是淋巴结DC表达的一种内吞受体，它允许在没有炎症刺激的情况下摄取抗原而引起T细胞耐受。这种DC只表达MHC-Ⅱ和MHG-I抗原递呈分子，而缺少或表达相当低的T细胞伴随因子CD80和CD86。DC能表达抑制T细胞生长或诱导T细胞凋亡(diāowánɡ)的分子(如NO、FasL等)，使得DC具有破坏T细胞应答的能力。第二十八页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受DCs在诱导(yòudǎo)免疫耐受中的作用诱导调节性T细胞现在发现具有调节功能的T细胞有很多亚群，可根据它们的表面标记、细胞因子分泌和发挥作用的方式来分类。目前研究最多的也甚为重要的是D4+CD25+Tr细胞。并且CD4+CD25+Tr细胞被公认(gōngrèn)为经典的具有调节作用的T细胞。DCs不仅可以通过摄取、加工和提呈作用诱发T细胞免疫，而且可通过对T细胞的删失作用和/或对Tr细胞的诱生作用来介导免疫耐受的发生。第二十九页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受DCs在诱导(yòudǎo)免疫耐受中的作用当CD4+CD25+Tr与不成熟DC接触时，能形成负反馈来影响DC的分化(fēnhuà)与成熟。而降低DC与Tr的作用后，这些DC不能有效的刺激T细胞免疫反应，甚至可以诱导出更多的D4+CD25+Tr。如果在DC和D4+CD25+Tr细胞间不存在相互作用，那么很难想象机体还具备维持免疫与耐受间堪称精妙平衡的能力。第三十页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受DCs在诱导(yòudǎo)免疫耐受中的作用选择性激活Th2型T细胞亚群DC的耐受性可能与选择性激活Th2型T细胞亚群有关(yǒuguān)。早期的研究证明，抗原刺激后的D8α+DC可诱导Th1反应，而CD8α-DC则诱导Th2反应,最近有人将DC根据其功能不同分为DC1/DC2，其中DC1可产生大量IL-12、TNF-α和少量IL-6，诱导Th向Th1分化；而DC2可分泌大量IL-6和少量IL-12，诱导Th向Th2分化，体外试验证明，DC与肠道EC共培养时，可分泌IL-10和IL-6(而不是分泌IL-12)，进而介导Th2反应。第三十一页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受DCs在诱导(yòudǎo)免疫耐受中的作用DCs与肠道免疫激活肠道DCs在肠道抗原刺激、趋化因子和细胞因子的作用下，在迁移的过程中逐渐形成成熟的DCs(mDCs)，上调一些协同刺激分子包括CD80、CD86和CD40在内的表达，开始表达趋化因子DC-CK1，优先吸引naive(CD45RA)T细胞。表达一些黏附分子如CD2、CD11α、和整合素βl与β2。以上这些性质能使mDC吸引并聚集(jùjí)naiveT淋巴细胞，从而诱导naiveT细胞分化为Thl细胞，而产生炎症相关的免疫反应。第三十二页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受DCs在诱导(yòudǎo)免疫耐受中的作用研究发现(fāxiàn)对IBD患者固有层CD11c+DC进分离和培．发现(fāxiàn)DC表面活性标志CD40升高，TLR2和TLR4表达增加，且分泌IL-6和IL-12，而IL-10水平无明显变化．提示固有层CD1lc+DC的激活参与IBD发病。最近的研究发现，在用急性葡聚糖硫酸钠（dextransulfatesodium,DSS)基因CD11c-DTR/GFP小鼠结肠炎的研究表明，骨髓来源的树突状细胞（BM-DCs）在受到DSS刺激时，能产生炎性趋化因子MIP-2，MIP-1，KC。并且还能产生Th1型细胞因子IL-12、TNF-alpha等，总之，这个实验提供一个直接的证据说明DCs在DSS致急性结肠炎中发挥了重要的免疫调节作用。第三十三页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受DCs在诱导(yòudǎo)免疫耐受中的作用肠易激综合症(IBS)是最常见的胃肠功能紊乱性疾病，而近年的研究发现，IBS与炎症性肠病在发病机制(jīzhì)和临床表现方面具有一定的相似性。有学者提出：IBS可能是IBD的一个轻症亚型。有研究显示小鼠结肠炎模型的结肠DCs中发现共刺激分子表达增加，结肠炎小鼠分离的DC细胞显示高水平的CD80和MHC-II的表达，与成熟和活化的DCs表型一致，高效提呈抗原更易引起T细胞活化。第三十四页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受DCs在诱导(yòudǎo)免疫耐受中的作用通过比较IBD患者及其正常人血浆DCs和骨髓DCs表达，结果显示活动性IBD患者的血浆非成熟DCs数量明显下降，与肠道炎症程度相关，且对肠道微生物的刺激(cìjī)反应异常，干扰了微生物的相互作用，缓解期IBD患者血浆DCs和骨髓DCs数量与正常对照组基本接近，因此，DC在IBD的发病机制中发挥着重要作用。第三十五页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受DCs在诱导(yòudǎo)免疫耐受中的作用国外研究了IBS患者外周血B细胞CD80和CD86的表达情况，结果发现，与对照组相比，IBS病人高表达CD80和CD86。不同的是，在有脂多糖和多种细菌混合物共刺激培养时，IBS病人中外周血B细胞CD80的表达受损，而CD86的表达没有影响。提示(tíshì)CD80在肠功能紊乱动物模型中的调节作用更大。第三十六页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受DCs在诱导(yòudǎo)免疫耐受中的作用总之，DCs是肠道黏膜免疫系统内的重要成员，它可以同时(tóngshí)诱导GALT内的免疫应答和免疫耐受反应，在肠道免疫系统的构成中起到决定性作用。DCs亚群在肠道免疫系统中的功能多样，因此，对黏膜DCs的功能及其作用的研究对肠道黏膜免疫防御功能的阐明具有重要的意义。第三十七页，共四十二页。应激与肠道粘膜免疫耐受DCs在诱导(yòudǎo)免疫耐受中的作用大量的研究表明，协同刺激信号D8