已陆续发现了许多新的红细胞血型抗原国际输血协会课件

红细胞血型理论与实验(shíyàn)技术长春博德生物技术(jìshù)有限责任公司童军

第一页，共六十四页。主要(zhǔyào)内容红细胞血型(xuèxíng)相容性检测红细胞血型(xuèxíng)血清学检测方法红细胞血型系统介绍第二页，共六十四页。红细胞血型抗原为同种异型抗原，是人类遗传多态性标志之一。自二十世纪初Landsteiner发现ABO血型以来，已陆续发现了许多新的红细胞血型抗原。国际(guójì)输血协会（ISBT）2008年报告中已确认了308个红细胞血型抗原。并将其分为血型系统、血型集合和血型系列。输血关系最大的是ABO及Rh血型系统。人类(rénlèi)红细胞血型第三页，共六十四页。研究背景血型(xuèxíng)系统第四页，共六十四页。血型(xuèxíng)系统第五页，共六十四页。ABO血型发现(fāxiàn)历史1901年，Landsteiner把几份血液标本中的红细胞分别与他人的血清(xuèqīng)交叉混合后，发现有的血液之间发生凝集反应，有的则不发生。将人的红细胞血型分为A、B、C(后称为O)三种类型。1902年他的学生Decastello及Sturli发现了第4种血型，即AB型。ABO血型的发现，开启了血液免疫学及免疫遗传学的新纪元。第六页，共六十四页。

ABH抗原的生化(shēnɡhuà)结构编码岩藻糖转移酶添加岩藻糖到血型多聚糖前体的终端半乳糖上特异性H抗原形成编码A或B转移酶构建完成A或B抗原H基因ABO基因第七页，共六十四页。第八页，共六十四页。第九页，共六十四页。

ABO抗原(kàngyuán)的发育

在胚胎早期A和B抗原就开始产生。但到出生时，还没有完全发育，与抗A和抗B试剂血清反应比成人(chéngrén)弱，2～4岁时才能充分表现出抗原性。

第十页，共六十四页。ABO抗体(kàngtǐ)的发育出生(chūshēng)时，正常的抗A和抗B还没产生或较弱，到三个月时，反应基本上与成年人的一样。5～10岁时，抗体的产生达到高峰，具有较高效价。第十一页，共六十四页。第十二页，共六十四页。孟买(mènɡmǎi)型与类孟买(mènɡmǎi)型孟买型Bombayphenotype红细胞上没有(méiyǒu)A、B、H抗原，血清中存在抗-A、抗-B和抗-H抗体。表型标记为：OhO、OhA、OhB、OhAB类孟买型Bombay-likephenotype表型标记为:Ah、Bh、ABh第十三页，共六十四页。ABO血型(xuèxíng)的亚型ABO亚型（subgroups)，也称变异型，红细胞同属于一种血型抗原，但在结构上有一定的差异，性能也不完全相同。由于抗原弱，在用已知抗体检测抗原和用已知抗原检测被检血清时不符合血清学反应特征(tèzhēng)。A亚型：A1和A2是血型血清学方法确定的最重要的A型红细胞亚型，一般认为有两种抗原A和A1，A1型人红细胞上有这两种抗原，A2型人红细胞只有A抗原。亚洲人中A1型约占27%；A2型人稀少。其它A亚型：A3、Ax、Aend、Am、Ay和Ael。B亚型一般比A亚型更少：B3、Bx、Bm和Bel第十四页，共六十四页。几种(jǐzhǒnɡ)A亚型红细胞上的A抗原第十五页，共六十四页。A1与A2的区分(qūfēn)A1型红细胞：A抗原和A1抗原A2型红细胞：A抗原双花扁豆(biǎndòu)（Dolichosbiflous)种子提取液第十六页，共六十四页。Rh血型(xuèxíng)系统1939年Levine及Stetson在一個新生儿溶血(rónɡxuè)疾病的母亲的血清中，发现可凝集85%白种人的红血球抗体。1940年Landsteiner及Wiener以恒河猴(Rhesusmonkey)的红血球免疫兔子产生抗体，也可凝集85%白种人的红血球。因此命名为Rh抗原。（恒河猴LW抗原）第十七页，共六十四页。Rh血型系统(xìtǒng)抗原RH血型系统抗原46个，其中D、C、E、c、e为主要的血型抗原。D抗原：只存在与人红细胞膜，不存在与其它组织细胞中，体液分泌中也无D抗原。D抗原分类：根据(gēnjù)D抗原的数量和质量不同以及抗原性不同，将D抗原分类为5种：常见D抗原、弱D、不完全型D、不完全型弱D及增强D。第十八页，共六十四页。Rh血型系统抗原(kàngyuán)频率Dantigen–85%Cantigen–70%cantigen–80%Eantigen–30%eantigen–98%第十九页，共六十四页。Rh血型系统(xìtǒng)抗体Rh抗体主要通过输血和妊娠免疫(miǎnyì)产生。一般在初次免疫(miǎnyì)后2-6个月内出现。对Rh(D)初次免疫的人，经再次免疫后，在三周内抗体浓度可达最高峰。同种异型抗体：RhD阴性人输用D阳性血而产生的抗-D抗体。绝大部分人血清同种异体抗体都是IgG类抗体，多数在盐水介质中不发生直接凝集。单克隆抗-D：人鼠或人人淋巴细胞杂交瘤制备而成。第二十页，共六十四页。红细胞血型(xuèxíng)相容性检测交叉(jiāochā)配血血型(xuèxíng)检测抗体筛检及鉴定第二十一页，共六十四页。红细胞血型(xuèxíng)血清学反应已知红细胞：反定型(dìngxíng)红细胞不规则抗体检测红细胞谱红细胞已知抗体(kàngtǐ)：抗A抗B抗D抗M、抗N……AHG用已知的检测未知的第二十二页，共六十四页。血型(xuèxíng)检测血型检测：确定待检者的ABO、RhD血型。ABO血型定型：正定型：是用已知特异性抗体来测定(cèdìng)红细胞上有无相应的抗原。反定型：是用已知抗原的红细胞来测定血清中有无相应的抗体。第二十三页，共六十四页。ABO血型(xuèxíng)定型抗A抗BA细胞B细胞结果(试剂)(待检者)AB第二十四页，共六十四页。ABO血型(xuèxíng)定型正定型反定型血型比例%（亚洲）抗-A抗-BA细胞B细胞--++O43++--AB5+--+A27-++-B25第二十五页，共六十四页。RhD抗原(kàngyuán)检测抗D结果(试剂)(待检者)D阳性第二十六页，共六十四页。我国临床常规RhD血型的检测(jiǎncè)，应用不识别DVI型D抗原的单克隆抗体。对不出现凝集的标本判断为RhD阴性；对出现弱反应（凝集反应强度≤2+）的病人（受血者），将其视为RhD阴性，只能输用RhD阴性的红细胞；对弱反应的献血者视为RhD阳性。初筛RhD阴性和弱反应的标本，应该进一步研究确定其RhD表型，应用能够识别DVI型的单克隆抗体；同时进行吸收放散实验，以排除Del型。第二十七页，共六十四页。亚型鉴定(jiàndìng)方法凝集抑制试验：可溶性抗原与相应(xiāngyīng)已知抗体结合能够全部或部分抑制抗体活性，通过此试验可确定抗原的特异性。又称唾液分泌试验。吸收放散试验：抗体与相应抗原在适合条件下发生凝集或致敏，但这种结合是可逆的，如改变某些物理条件时，抗体又可以从结合的红细胞上解脱下来，这种试验方法叫做吸收放散试验。第二十八页，共六十四页。放散(fàngsàn)技术第二十九页，共六十四页。放散(fàngsàn)试验种类酸放散(fàngsàn)热放散ZZAP放散二磷酸氯喹放散第三十页，共六十四页。ABO亚型的血清学特征(tèzhēng)AABBTECHNICALMANUAL16theditionP366第三十一页，共六十四页。各种(ɡèzhǒnɡ)A亚型的鉴别红细胞弱凝集A3AxAend混合视野凝集(Mf），唾液中含有A物质A3与抗A10％红细胞呈十分弱的mf凝集Aend及/或抗只与抗AB呈弱凝集AxA1B反应不凝集能吸附及放散抗AAmAyAel容易吸附放散抗AAm分泌型唾液中有一定量的A物质不容易吸附放散抗AAy分泌型唾液含少量的A物质吸附放散抗AAel分泌型唾液只含H物质无A物质第三十二页，共六十四页。抗D单克隆抗体(kàngtǐ)第三十三页，共六十四页。抗体(kàngtǐ)筛检及鉴定用已知抗原的O型红细胞（筛检细胞及谱细胞），检测(jiǎncè)病人血清中是否含有抗体及对所检测(jiǎncè)到的抗体特异性进行鉴定。第三十四页，共六十四页。抗体(kàngtǐ)定义不规则抗体的含义：通常把抗A、抗B以外的所有红细胞血型抗体称为不规则抗体。如抗D、抗N、抗M抗体。完全抗体或不完体抗体：与相应抗原红细胞在盐水介质中或在中性微柱凝胶中出现(chūxiàn)凝集反应的抗体称为完全抗体。完全抗体大部分是IgM类抗体，但非所有IgM类抗体都是完全抗体。大部分IgG抗体为不完全抗体，但一些IgG抗体也是完全抗体。第三十五页，共六十四页。临床有意义和临床无意义抗体：能引起新生儿溶血病（HDN）和血型不相容输血免疫(miǎnyì)溶血的抗体为临床有意义抗体。如母体免疫(miǎnyì)IgG抗体抗-D能够穿过胎盘进入胎儿体内，引起胎儿溶血。反之为临床无意义抗体，如Lewis血型同种异型抗体常是IgM抗体，但极少见溶血性输血反应和引起HDN，故该血型抗体为临床无意义抗体。第三十六页，共六十四页。检测(jiǎncè)方法方法原理局限性酶检测技术破坏红细胞表面的唾液酸，降低其表面电荷，减少红细胞间斥力，使得红细胞靠拢，在不完全抗体的作用下，红细胞便出现凝集。改变其他系统(尤其是M，N，Fya，Fyb)抗原的构型破坏其抗原性。酶还可能改变细胞悬液的物理性质，可导致红细胞的非免疫性聚集。凝聚胺法凝聚胺是一种多价阳离子氨基聚合物，它可以引起正常红细胞的可逆性凝集，如果被抗体致敏的红细胞与凝聚胺连在一起，就会发生不可逆凝集。在使用凝聚胺检测抗体活性时，抗原抗体在低离子介质中孵育，可促进红细胞与相应抗体的反应，使得抗原抗体更有效的结合。经再悬液中和后，抗体介导的特异性凝集仍然存在，而非特异凝集的细胞散开。破坏Kell系统抗原抗人球蛋白法一些IgG类抗体(主要是免疫抗体，如Rh血型抗体)是一种7s球蛋白，分子量小，分子长度只250°A，与红细胞相应抗原结合后，在盐水介质中不出现肉眼可见的凝集反应，但在加入抗-IgG的抗体后，以其搭桥则可出现凝集反应操作繁琐，耗时长第三十七页，共六十四页。–––––––––––––––––––––––––––––––––––第三十八页，共六十四页。酶作用(zuòyòng)缩短红细胞间距离–––––––––––––第三十九页，共六十四页。酶对红细胞抗原(kàngyuán)的作用抗原增强抗原性破坏KiddRhLewisIPFyaFybMNSs第四十页，共六十四页。抗人球蛋白检测(jiǎncè)技术分类：直接抗人球蛋白实验(shíyàn)（DAT）间接抗人球蛋白试验(IAT)试剂：多特异性抗人球(抗-IgG+抗-C3)单特异性抗人球(抗-IgG或抗-C3)第四十一页，共六十四页。SensitizationAgglutinationbyAnti-humanGlobulin第四十二页，共六十四页。DATPt.RBCs+AHG观察凝集并判读(pàndú)结果IATRBCs+血清+AHG观察(guānchá)凝集并判读结果抗人球蛋白检测(jiǎncè)技术第四十三页，共六十四页。抗人球蛋白试验(shìyàn)应用直接抗人球蛋白试验在临床上主要应用于：胎母血型不合新生儿溶血病（HDN）免疫溶血性输血反应（LHTR）自身免疫溶血性贫血（AIHA）药物导致的免疫溶血性贫血间接抗人球蛋白试验应用于：红细胞血型定型；相容性配血实验(shíyàn)；产前检查；弱D抗原检测第四十四页，共六十四页。洗涤(xǐdí)加入(jiārù)AHG离心阳性(yángxìng)直接抗人球蛋白第四十五页，共六十四页。间接(jiànjiē)抗人球蛋白+离心孵育后洗涤阳性阴性阳性阴性加入AHG第四十六页，共六十四页。加入对照细胞(xìbāo)后离心观察结果Coombs’

对照(duìzhào)细胞(CCC,CC)假阴性(yīnxìng)结果阴性结果阳性阴性第四十七页，共六十四页。洗涤加入抗人球蛋白试剂后离心阳性未洗涤假阴性FalseNegativeTests第四十八页，共六十四页。抗体(kàngtǐ)筛检筛检红细胞IS37℃30’AHGCCOI1+--2+OII3+--2+1、表明抗体(kàngtǐ)为IgM抗体

2、存在剂量效应第四十九页，共六十四页。剂量效应Kidd、Duffy、Rh及MN（MNSs）系统中抗原(kàngyuán)存在剂量效应。第五十页，共六十四页。抗体(kàngtǐ)筛检筛检红细胞IS37℃30’AHGCCOI--3+NTOII---2+表明(biǎomíng)筛检的抗体为IgG类抗体第五十一页，共六十四页。抗体(kàngtǐ)鉴定DCcEeKkAHG1++--+++3+2+-++--+-3+-+-++-3+4-++-+-+-5--+++-+-6--+-+++3+Anti-K第五十二页，共六十四页。抗体(kàngtǐ)鉴定DCcEeJkaJkbAHG1++--+++W+2+-++--+-3+-+-++-2+4-++-+++W+5--+++-+-6--+-++-2+Anti-Jka第五十三页，共六十四页。交叉(jiāochā)配血试验相容性配血试验，检测受血者血清中抗体和献血者红细胞抗原(kàngyuán)是否相合试验为主侧交叉配血试验，检测受血者红细胞和献血者血清中抗体是否相合试验为次侧交叉配血试验，对其中是不完全抗体的，应用间接抗人球蛋白试验确定其相容性。第五十四页，共六十四页。目的防止发生输血反应增加体内红细胞的存活率进一步确定ABO血型定型正确检测(jiǎncè)抗体的另一方法第五十五页，共六十四页。血型检测常规(chángguī)方法玻片法试管(shìguǎn)法微板法固相凝集法微柱凝胶法第五十六页，共六十四页。孵育洗