基因扩增实验室建设

2018-5-14•

临床基因扩增检验实验室发展及现状临床基因扩增实验室建设和验收山东省立医院检验部

张炳昌临床分子诊断发展历程：几个里程碑临床基因扩增检验实验室发展及现状•

1953年:DNA双股螺旋的发现•

1963年:放射免疫测定技术、核酸测序方法•

1972~1973年:重组DNA技术•

1990年：PCR技术在国内开始用于临床检测•

1990年代中期：假阳性？（假阴性？）•

1996年：卫生部科研课题•

1983年:PCR测定技术•

1991-1993年:实时荧光PCR技术和芯片技术•

1998年3月20日：

《临床PCR实验室管理专家咨询会》（北京医院第一会议室）•

2003年：人类基因组计划基本完成。纳米和量子标记技术？•

1998年4月16日卫生部下发《关于暂停临床基因扩增（PCR）检验的通知》（卫医发[1998]第9号）•

2011年-新一代测序技术临床基因扩增检验实验室发展及现状临床基因扩增检验实验室发展及现状•

1999年4月29-30日：《基因扩增技术临床应用专家研讨会》，针对临床开展PCR检验的问题，达成8点意见：（1）PCR技术本身没有问题，技术先进。（2）卫生部暂停临床应用有助于规范管理，应在严格管理的基础上适度开放。（3）限定临床开展PCR检验项目上。（4）加强对PCR实验室管理。（5）人员上岗培训。（6）应有室内质控和参加部中心室间质评。（7）SFDA尽管批准试剂文号。（8）成立专家咨询委员会。•••••••2002年以前《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》(卫医发〔2002〕10号）培训临床基因检验人员开始临床基因检验实验室的验收工作2010年《临床基因扩增实验室管理办法》2014年高通量基因测序试点工作《个体化医学检测实验室管理办法》（征求意见稿）12018-5-14有关的法律文件••《医疗机构临床实验室管理办法》卫医发

<2006>73号《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》卫办医政发<2010>194号••••《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》《山东省临床基因扩增检验实验室技术审核办法》《肿瘤个体化治疗检测技术指南》试行《药物代谢酶和药物作用靶点基因检测技术指南》试行《个体化医学检测实验室管理办法》（征求意见稿）••《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法

》

（卫办医政发〔2010〕194号）•《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则

》

（卫办医政发〔2010〕194号）四代测序技术重点参数比较Thetimelineofsequencingtechnologydevelopment测序技术不断发展……22018-5-14CTCs是最早的液体活检标记物，也被认为是真正

“完整”的液体活检标记物，但是因为检测技术难度较大，所以争议很多，进展也比较慢。•

基因扩增实验室建设规范及标准化要求医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则临床基因扩增检验实验室的设置•

一、临床基因扩增检验实验室的设计•

（一）临床基因扩增检验实验室区域设计原则。

原则上临床基因扩增检验实验室应当设置以下区域：试剂储存和准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区。这4个区域在物理空间上必须是完全相互独立的，各区域无论是在空间上还是在使用中，应当始终处于完全的分隔状态，不能有空气的直接相通。根据使用仪器的功能，区域可适当合并。例如使用实时荧光PCR仪，扩增区、扩增产物分析区可合并；采用样本处理、核酸提取及扩增检测为一体的自动化分析仪，则标本制备区、扩增区、扩增产物分析区可合并。各区的功能是：•

设置依据：卫生部《医疗机构临床基因扩增实验室管理办法》,卫办医政发〔2010〕194号。附件：医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则。•

对临床基因扩增检验实验室的分区及设备配置作了明确规定32018-5-14医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则（二）临床基因扩增检验实验室的空气流向••1.试剂储存和准备区：贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备，以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。•

临床基因扩增检验实验室的空气流向可按照试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区进行，防止扩增产物顺空气气流进入扩增前的区域。可按照从试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区方向空气压力递减的方式进行。可通过安装负压排风装置或其他可行的方式实现。2.标本制备区：核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其加入至扩增反应管。对于涉及临床样本的操作，应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。••3.扩增区：cDNA合成、DNA扩增及检测。4.扩增产物分析区：扩增片段的进一步分析测定，如杂交、酶切电泳、变性高效液相分析、测序等。（三）工作区域仪器设备配置标准•••••••••2.标本制备区。（1）2-8℃冰箱、-20℃或-80℃冰箱。（2）高速离心机。•

1.试剂储存和准备区。•

（1）2～8℃和-20℃以下冰箱。•

（2）混匀器。•

（3）微量加样器（覆盖0.2-1000µl）。•

（4）可移动紫外灯（近工作台面）。•

（5）消耗品：一次性手套、耐高压处理的离心管和加样器吸头。•

（6）专用工作服和工作鞋(套)。•

（7）专用办公用品。备注：增设超净台（3）混匀器。（4）水浴箱或加热模块。（5）微量加样器（覆盖0.2-1000µl）。（6）可移动紫外灯（近工作台面）

。（7）生物安全柜。（A2、B2）（8）消耗品：一次性手套、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤芯）。•••（9）专用工作服和工作鞋(套)。（10）专用办公用品。（11）如需处理大分子DNA，应当具有超声波水浴仪。•

3.扩增区。•

4.扩增产物分析区。•

（1）核酸扩增仪。•

视检验方法不同而定，基本配置如下：•

（1）微量加样器（覆盖0.2-1000µl）。•

（2）可移动紫外灯（近工作台面）。•

（2）微量加样器（覆盖0.2-1000µl），（视情况定）。•

（3）消耗品：一次性手套、加样器吸头（带滤芯）。•

（3）可移动紫外灯（近工作台面）。•

（4）消耗品：一次性手套、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤芯）。•

（4）专用工作服和工作鞋。•

（5）专用办公用品。•

上述各区域仪器设备配备为基本配备，实验室应当根据自己使用的扩增检测技术或试剂的特点，对仪器设备进行必要的增减。•

（5）专用工作服和工作鞋。•

（6）专用办公用品。42018-5-14二、临床基因扩增检验实验室工作基本原则•(一)进入各工作区域应当严格按照单一方向进行

，即试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→

扩增产物分析区。•

2002年1月14日卫生部下发《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》（卫医发[2002]10号)终止使用•••(二)各工作区域必须有明确的标记，不同工作区域内的设备、物品不得混用。(三)不同的工作区域使用不同的工作服（例如不同的颜色）。工作人员离开各工作区域时，不得将工作服带出。(四)实验室的清洁应当按试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区的方向进行。不同的实验区域应当有其各自的清洁用具以防止交叉污染。二、临床基因扩增检验实验室工作基本原则三、临床基因扩增检验实验室各区域工作注意事项•(五)工作结束后，必须立即对工作区进行清洁。工作区的实验台表面应当可耐受诸如次氯酸钠的化学物质的消毒清洁作用。实验台表面的紫外照射应当方便有效。由于紫外照射的距离和能量对去污染的效果非常关键，因此可使用可移动紫外灯（

254nm波长），在工作完成后调至实验台上60～90cm内照射。由于扩增产物仅几百或几十碱基对（bp），对紫外线损伤不敏感，因此紫外照射扩增片段必须延长照射时间，最好是照射过夜。••(一)试剂储存和准备区。贮存试剂和用于标本制备的消耗品等材料应当直接运送至试剂贮存和准备区，不能经过扩增检测区，试剂盒中的阳性对照品及质控品不应当保存在该区，应当保存在标本处理区。(二)标本制备区。由于在样本混合、核酸纯化过程中可能会发生气溶胶所致的污染，可通过在本区内设立正压条件，避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。为避免样本间的交叉污染，加入待测核酸后，必须盖好含反应混合液的反应管

。对具有潜在传染危险性的材料，必须在生物安全柜内开盖，并有明确的样本处理和灭活程序。•(六)实验室的安全工作制度或安全标准操作程序，所有操作符合《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2008）。••(三)扩增区。为避免气溶胶所致的污染，应当尽量减少在本区内的走标本采集、运送和保存中的关键点动。必须注意的是，所有经过检测的反应管不得在此区域打开

。(四)扩增产物分析区。核酸扩增后产物的分析方法多种多样，如膜上或微孔板或芯片上探针杂交方法（放射性核素标记或非放射性核素标记）、直接或酶切后琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、Southern转移、核酸测序方法、质谱分析等。本区是最主要的扩增产物污染来源，因此必须注意避免通过本区的物品及工作服将扩增产物带出。在使用PCR-ELISA方法检测扩增产物时，必须使用洗板机洗板，废液必须收集至1mol/L

HCl中，并且不能在实验室内倾倒，而应当至远离PCR实验室的地方弃掉。用过的吸头也必须放至

1mol/L

HCl中浸泡后再放到垃圾袋中按程序处理，如焚烧。•

容器：密闭的、一次性、无菌、无核酸酶及其他扩增抑制物•

采集方法：人（训练有素）、防污染•

运送保存时间和温度：尽可能快？低温？•

合格标本:容器完整、量够、时间符合要求、外观符合要求、要采到病原体•由于本区有可能会用到某些可致基因突变和有毒物质如溴化乙锭、丙烯酰胺、甲醛或放射性核素等，故应当注意实验人员的安全防护。52018-5-14临床标本中PCR反应抑制物临床标本的接收•

内源性的

:免疫球蛋白、蛋白酶、血红素及其代谢产物、白细胞内的乳铁蛋白、肌红蛋白、脂类、粘蛋白、尿素、离子、胆盐、多糖等。•

通常的工作流程：标本采集血清分离编号保存或检测••应在四个测定区域之外的地方或区域内接收•

外源性的

:如肝素抗凝剂、纤维素和硝酸纤维素、过度UV照射后的矿物油、手套滑石粉、标本容器或采样器材上含有的抑制物。接收的标本应收集在原始容器中•

在核酸提取时带入至标本制备区临床PCR实验室的验收学习、落实有关的法律文件••《医疗机构临床实验室管理办法》卫医发

<2006>73号••••人员的培训、资质《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》卫办医政发实验室的建设<2010>194号（共五章21条）仪器设备配置和基本要求实验室质量管理体系的建立SOP文件的建立••••《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》《山东省临床基因扩增检验实验室技术审核办法》《肿瘤个体化治疗检测技术指南》试行相应试验表格的建立《药物代谢酶和药物作用靶点基因检测技术指南》试行《个体化医学检测实验室管理办法》（征求意见稿）参加相应的EQA或实验室间的比对试验体系的验证、性能评价••《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法

》

（卫办医政发〔2010〕194号）•《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则

》

（卫办医政发〔2010〕194号）人员培训实验室内部培训存在的问题•

方法原理•

人员少，实际上没有内部培训•

核酸扩增检测的关键环节•

仪器设备使用、维护和校准•

结果的分析、报告及进一步处理•

质控的分析•

形式•

没有年度培训计划•

没有培训记录•

知其然又知其所以然。62018-5-14试剂、方法原理实验室人员内部培训的重要性内部培训所涉及的范围质量控制方法专业其他相关领域的新技术理论•

外部培训提供的是“理念”，是被动的，更多的是“学习”相关法律法规质量管理体系新理念和新进展•

内部培训是主动的，源于实践，高于实践，更多的是“思考”仪器设备使用、维护和校准操作实验操作技能如何培训书面考试讲座实验考核讨论心得培训评估讨论自学论文综述问题的解决报告咨询练习临床基因扩增检验实验室房屋设置标准实验室的设置分区•

较理想模式•

常见模式•

最低标准•

通风问题•

实验物品的传递72018-5-14临床PCR实验室设计的原则•

各区独立•

单一流向（气流、人流、物流）•

空间适宜•

经济方便目的：“无基因”或“无核酸”污染理想的PCR实验室设计B理想的PCR实验室设计A产物分析区扩增区空气流向标本制备区试剂准备区产物分析区扩增区空气流向标本制备区试剂准备区空气流向缓冲间空气流向缓冲间空气流向缓冲间空气流向缓冲间空气流向专用走廊空气流向专用走廊缓冲间缓冲间工作流向工作流向82018-5-14二、临床PCR实验室设计临床PCR实验室设计的一般原则•

充分、合理的空间••各区独立(1)在物理空间上，必须是完全相互独立的，各区域无论是在空间还是在使用中，应始终处于完全的分隔状态(2)不能有空气的直接相通。nnnn工作有序注意风向互不干扰、防止污染、报告及时•

良好的照明•

空调设备••因地制宜方便工作由清洁区域向污染区域流动实验室应根据自己的检验项目、所采用的检测技术平台和工作量来决定分区的多少及各区域的空间大小。扩增和产物分析区产物分析区扩增区空气流向标本制备区传递窗试剂准备区传递窗试剂准备区其他实验室其他实验室其他实验室传递窗空气流向空气流向空气流向空气流向走廊走廊空气流向缓冲间缓冲间缓冲间其他实验室空气流向其他实验室其他实验室其他实验室专用走廊工作流向标本制备区“无基因”或“无核酸”污染概念的重要性！！！92018-5-14临床PCR实验室设计的一般原则案例一、实验室设计总体要求(1)在物理空间上，必须是完全相互独立的，各区域无论是在空间还是在使用中，应始终处于完全的分隔状态;

(2)不能有空气的直接相通。•

各区独立l

《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法

》l

《分子病理诊断实验室建设指南（试行）

》l

《测序技术的个体化医学检测应用技术指南（试行）

》l

《个体化医学检测质量保证指南》•

注意风向

由清洁区域向污染区域流动•

因地制宜•

方便工作“十六字口诀”l

《肿瘤个体化治疗检测技术指南》l

《个体化医学检测实验室管理办法》二、实验室平面示意图案例四、实验室技术参数分区压力0Pa温度湿度照明洁净走廊缓冲区+5Pa+15Pa试剂准备区标本与文库准备区+10Pa主实验室≥300LX，其余房间200-300LX分区压力0Pa温度湿度照明DNA打断区杂交捕获区文库扩增区文库检测区测序区+7Pa-7Pa20-25℃30%-70%洁净走廊缓冲区+5Pa+15Pa-10Pa-10Pa-15Pa-20Pa试剂准备区标本与文库准备区+10Pa主实验室≥300LX，其余房间200-300LX电泳区DNA打断区+7Pa-7Pa20-25℃30%-70%杂交捕获区102018-5-14三、技术流程图打断区标本与文库制备区加“A”与纯化给排水强弱电暖通消防装饰DNA提取及检测纯化与测OD值末端修复与纯化稳压装置布局设置空调系统专用走廊分区独立缓冲设置排污系统功率：28KV电流：130A烟感系统灭火系统独立设置新风处理Adapter连接与纯化Pre-Captured-PCR与纯化OD检测与Pooling杂交杂交捕获区PH:6-9，COD<60BOD<20,S<20用电防护环境要求水喷淋工艺设置纯水系统零地电压<3V底线抗阻<4Ω气体:二氧化碳干粉:七氟丙烷墙体:密闭防腐天花:密闭圆弧地面:防滑防腐门窗:闭门带窗温度:20-25湿度:30-70气压:梯度递减电阻率：18.2MΩ洗脱与纯化Sanger验证照明装置供水系统逃生装置测序区照度>300LX洗手装置冲淋装置洗眼装置联动控制应急灯紫外：254nm文库扩增及检测区指示装置逃生路线图实验家具监控系统压差稳定耐酸碱/耐腐蚀承重>200KG数据分析结果解读视频/温度/湿度报告发放五、分区功能3

DNA打断区主要功能：DNA打断（片段化）。1

试剂准备区4

杂交捕获区（扩增一区）主要功能：在PCR、NGS、CTC捕获过程中使用到的试剂的配制、分装和保存。主要功能：目的DNA片段的杂交捕获与纯化，测序片段扩增与纯化、PCR前准备。2

标本与文库制备区5

文库扩增区（扩增二区）主要功能：样本接收、样本前处理、CTC捕获、全基因组DNA提取以及各种样本DNA或者RNA的提取、DNA片段化、DNA纯化、DNA浓度测定、DNA片段的末端修复与纯化、接头连接与纯化。主要功能：杂交捕获后扩增与纯化、文库浓度质检

分析及测序的PCR扩增反应与纯化。六、仪器配置6

文库检测区主要功能：检测文库质量。1

试剂准备区主要仪器设备：加样器、冰箱、万分之一分析天平、微量台式离心机、涡旋振荡器、移液器(eppendorf)、可移动紫外灯、生物安全柜等。7

测序区主要功能：测序模板制备（乳液PCR与磁珠富集回收）、上机测序及Sanger测序。2

标本与文库制备区8

电泳区主要仪器设备：NextCTC循环肿瘤细胞捕获仪(无锡纳奥)、微量台式离心机、掌上三管离心机、恒温金属浴、移液器

(eppendorf)、可移动紫外灯、生物安全柜、冰箱、万分之一天平、Qubit4.0核酸定量仪、PCR仪、电脑、条形码打印机、打印机、扫描枪等。主要功能：

片段化DNA电泳检测及结果反馈。112018-5-143

DNA打断区6

文库检测区主要仪器设备：超声波打断仪、冰箱、掌式离心机、涡旋振荡器、移液器(eppendorf)、可移动紫外灯等。主要仪器设备：Qubit

4.0核酸定量仪、可移动紫外灯、生物安全柜、冰箱、微量台式离心机、涡旋振荡器、冰箱、移液器(eppendorf)等。4

杂交捕获区（扩增一区）7

测序区主要仪器设备：PCR仪(ABI)、杂交仪、可移动紫外灯、生物安全柜、冰箱、微量台式离心机、涡旋振荡器、遮光窗帘（

FISH杂交暗室条件）等。主要仪器设备：高通量测序仪(illumine)、Sanger测序仪(ABI)、PCR仪、PC电脑、打印机、UPS、恒温金属浴、纯水仪、冰箱、微量台式离心机、涡旋振荡器、移液器(eppendorf)、生物安全柜、可移动紫外灯、磁力架等。5

文库扩增区（扩增二区）主要仪器设备：芯片式数字PCR仪(南京科维思)、荧光定量PCR仪(ABI)、微量台式离心机、掌上三管离心机、涡旋震荡器、移液器(eppendorf)、可移动紫外灯、生物安全柜、冰箱、磁力架等。8

电泳区主要仪器设备：电泳仪、微波炉、凝胶成像仪、荧光显微镜、冰箱、掌式离心机、涡旋振荡器、移液器(eppendorf)、可移动紫外灯等。临床PCR实验室的验收临床标本接收注意什么••••••••••人员的培训、资质、授权及规范操作实验室的建设及规范使用•

应在三(四)个测定区域之外的地方或区域内接收•

接收的标本应收集在原始容器中，不能接收从其它检测如生化、免疫检验等分出来的标本设备的配置及规范使用试验体系的建立溯源性试验体系的验证、性能评价文件的建立规范、科学性、实用性、唯一性相应试验表格的建立、记录真实性及有效性防污染意识、措施•

在核酸提取时，由基因扩增检验实验室人员将标本带入至标本制备区。•

备:标本接受程序、标本拒收程序、唯一编号规则等参加相应的EQA或实验室间的比对临床试验有效运转及评价规范标本制备区产物分析区规范•

标本制备区：核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其加入至扩增反应管。对于涉及临床样本的操作，应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。•

本区是唯一能打开扩增后反应管的地方

。由于本工作区应设置为负压状态，空气流向为由外向内，以防止扩增产物气溶胶流出，故本区可无缓冲间。•

本区所使用的仪器设备可能有核酸测序仪、酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等。•

加样提取的核酸模板样本，每加完一个即盖好盖子122018-5-14报告发放区规范•

四区之外•

实验室质量管理体系的建立规范•

保护患者隐私•

报告解读•

结果保存基因扩增仪器设备的质控规范实验室质量管理体系的建立规范仪器设备质控方法频度失控标准•

质量手册扩增仪仪器校验实验当仪器移动时每月一次实验失败热电偶监测温度扩增功能检测如靶温度或温度差异超出允许范围•

质量体系程序文件•

标准操作程序•

操作卡每4

个月一次待测孔未出现扩增，检测温度程序打印校准每次测定时每年2

次每次实验每年2

次打印程序不对不符合要求不符合要求不符合要求加样器水浴箱酶标仪•

记录表格温度检测预防性维护及校准扩增仪的扩增功能检测离心管、吸头等的质检•

带滤芯吸头的密封性••目的：通过扩增功能来间接获知孔间的均一性。方法：即将加有一已知的含一定浓度的阳性质控样本的扩增反应管置于扩增仪各孔中按常规进行扩增检测，观察结果的一致性程度，如果有某一个或几个孔结果有问题，则应确定这一个或几个孔是否会重复性地得到假阴性结果，如果是，则表明相应孔的热传导有损坏。•

离心管PCR抑制物质检132018-5-14理想的试剂和操作方法理想的试剂和操作方法•

试剂盒的质检•

定量测定的精密度是测定组成步骤的变异和的平方根(SD)=上式中SD

、SD

、SD

是步骤a、b、c等（例如试剂准备、标本采集、核酸提取、扩增和产物检测等）的标准差•

改善测定精密度的措施必须首先着重在最不精密的步骤上，应对试剂准备、标本收集、核酸提取、测定方法和仪器操作写出

“标准操作程序”(SOP)SDa

SD

SD

......22b2cabc实验室质量管理的内涵实验室质量管理体系的建立•

质量手册•写你所应做的•做你所写的•

质量体系程序文件•记录你已做的•分析你已做的•

标准操作程序(相关记录表格)质量体系文件的三大特性编号：XXX单位XXX实验室XXX标准操作程序启用日期：版本：第

页

共

页•

法规性、唯一性和适用性。怎样编写SOP？•

法规性:是指文件一旦制定完成并批准实施，就必须认真执行，按照相应的文件去完成日常检验工作，也就是前面所说的做你所写的。并且文件的修改不能随意，只能按规定的程序进行。一目的：二适用范围：三职责或责任人：四（方法原理）五（检测设备和试剂）六（所需的环境条件）七操作步骤：1．•

唯一性:则是指（1）一个实验室只能有一个质量体系文件系统；（2）一项检验活动只能有唯一的操作程序；（

3）一项规定只能有唯一的理解，不产生歧义；（4）只能使用文件的有效版本，无效版本在实验室的任何地方都不能使用。2．3．•

适用性:是指质量体系文件无统一格式；无标准文本；怎么做怎么写，切合实际，具有可操作性，不拘一格。所有文件的规定均应保证在临床实际检测工作中能完全做到。当发现文件有不适合情况时，则应立即按规定程序对文件进行修改。五、本操作程序变动程序：六、相关的文件七、相关的记录表格和报告编写人审核人批准人142018-5-14SOP

（5W和1H）仪器设备的维护和校准SOP•

谁来做(Who)：责任人•

责任人•

维护和校准的基本方面：光路、滤光片、波长、加热模块的清洁、具体的校准点选择（如加样器的校准体积点选择、温度计的校准温度点选择等）、维护和校准的具体方法包括用具•

做什么(What)：适用范围•

何时（When）：适用范围•

何地（Where）：适用范围•

为什么做（Why）：目的•

如何做（How）：操作步骤•

校准合格的判断标准•

维护和校准的间隔时间存在问题•

表格种类繁多•

重复记录实验记录表格的设计规范•

表格无实用性，用于检查的痕迹很重152018-5-14记录表格设计的基本原则•

信息充分•

简单明了•

临床标本的检测信息能有机联系起来•

融入LIS系统？试剂准备区（1区）临床PCR检验流程记录表实验前冰箱温度：冷藏室（2~8℃）实验室温度：

℃（允许范围：10~30℃）；相对湿度：

（允许范围：30%~70%）PCR试剂来源：

（可直接列出有关厂家名称）

批号：检验项目：

本次实验用量：

人份，剩余量：其他有关试剂配制：：打开通风设备实验台面清洁（水或70%酒精擦拭）检验日期检验项目：扩增仪中保存文件名：℃；

冷冻室（18℃2℃）℃使用说明：1．本记录表须严格遵循试剂准备区标本制备区扩增区（产物分析区）单一流向移动，严禁逆向移动。2．各项工作执行后，在相应叙述前的“

”内打“”。3．本记录表最后与相应的标本接收记录等归档保存于扩增区的专用文件柜内，以备查找。人份。按XXX（将有关SOP编号列出）SOP配制1%含氯消毒液按XXX（将有关SOP编号列出）SOP配制4％NaOH溶液毫升；毫升；毫升；实验前准备试剂在有效期内扩增仪、加样器和温度计在校准的有效期XXXSOPSOP配制0.1%按（将有关编号列出）焦磷酸二乙酯毫升；内按XXX（将有关SOP编号列出）SOP配制生物安全柜的滤膜在使用有效期内冲眼器内无菌生理盐水在有效期内消毒溶液在有效期内离心管、带滤芯吸头已经过质检合其他：仪器设备使用：操作者：离心机：

正常不正常振荡器：

正常不正常实验后：

按XXX（将有关SOP编号列出）SOP清洁实验室台面、地面、加样器和离心机，并进行紫外照射30分钟以上。按XXX（将有关SOP编号列出）SOP处理实验废弃物。操作者：标本制备区（2区）实验台面清洁（水或70%酒精擦拭）冰箱（柜）温度：冷藏室（2~8℃）

℃；冷冻室（18℃2℃）实验室温度：

℃（允许范围：10~30℃）；相对湿度：

（允许范围：30%~70%）扩增及产物分析区（3区）实验前：打开通风设备实验前打开通风设备实验台面清洁（水或70%酒精擦拭）（允许范围：℃实验室温度：℃（允许范围：10~30℃）；相对湿度：30%~70%）阳性室内质控物来源：阴性室内质控物来源：浓度及批号：批号：扩增位置：扩增位置：扩增仪操作：设定标准曲线计算值：Slope值：开机自检及运行正常按XXX（列出编号）SOP进行编程、参数（）Intercept值：（）r值：（）所取理的标本（对应标本接收的唯一编号）及拟扩增位置：1917181920212223242526272829303132室内质控结果：结果：□填写室内质控记录、描质控图

是否失控：□否□是234567810111213141516失控原因及分析：（失控判断标准及原因分析按

XXXSOP进行）核酸提取及加样过程：按XXX（列出编号）SOP进行。仪器设备使用：

生物安全柜：正常不正常正常恒温仪温度校准：不正常℃实验结果：见所附扩增仪打印结果实验后：

按XXX（将有关SOP编号列出）SOP清洁实验室台面、地面及仪器设备。按XXX（将有关SOP编号列出）SOP处理实验废弃物。离心机：实验后：正常不正常振荡器：按XXX（将有关SOP编号列出）SOP清洁实验室台面、地面及仪器设备。操作者：按XXX（将有关SOP编号列出）SOP处理实验废弃物。操作者：162018-5-14质控物浓度的选择理想的室内质控样本的条件•

基质与待测样本一致；•

所含待测物浓度接近试验的决定性水平；•

稳定；•

定量测定：测定线性范围内的高、中、低三种浓度•

靶值或预期结果已定；•

无已知的生物传染危险性；•

单批可大量获得；•

定性测定：接近方法测定下限的浓度•

阴性质控物•

价廉临床基因扩增检验IQC统计每次（批）测定质控物的数量及放置计算问题•

可使用质控样本扩增后的IU/ml来进行统计计算，也可用其对数值进行。•

标本数量如小于30，弱阳性和阴性质控各1份，标本数量增加，质控物数量相应按比例增加•均匀分散于临床标本中，与临床标本一同处理（核酸提取）•

由于基因扩增结果的原始数据通常很大，可能不呈正态分布，故使用其对数值来进行质控统计分析。•

扩增时的排列顺序，可排于标准品或校准品之后，临床样本之前。但在扩增仪中的位置，不应永久性的固定的在一个孔，而应在每次扩增检测时，进行相应的顺延，以使在一定的时间内，可以尽可能的监测每一个孔的扩增有效性。阴性质控样本的种类阴性原血清样本的功能•

监测实验室的以前扩增产物的

“污染”•

阴性原血清样本•

由实验操作所致的标本间的交叉污染。具体地说，如强阳性标本气溶胶经加样器所