创新课题实践报告汇总

1对科研课题的认识微生物发酵法生产-鸟氨酸，实际上就是借助微生物具有合成谢谢阅读谢谢阅读感谢阅读而达到过量积累-鸟氨酸的目的。再通过优化发酵工艺，使-鸟氨谢谢阅读酸产量达到最大值。1。1对鸟氨酸的理化性质及生物功能的认识易溶于水、乙醇，微溶于乙谢谢阅读醚.能够电离成为两性兼性离子，能够和酸和碱发生特性反应，能和精品文档放心下载甲醛、茚三酮等发生反应。通常作为试剂使用的是其单盐酸盐，—感谢阅读鸟氨酸单盐酸盐易溶于水，不溶于甲醇、乙醇、乙醚。L—鸟氨酸谢谢阅读精品文档放心下载谢谢阅读成的中间产物，精氨酸、瓜氨酸等多种氨基酸代谢的前提物质，主要精品文档放心下载参与产尿素的鸟氨酸循环中,对体内集聚的氨具有解毒作用，因而鸟感谢阅读氨酸对人体肝脏细胞具有重大意义。在近代医药行业，L-鸟氨酸除精品文档放心下载用于制备保肝、护肝、治疗肝病、抗疲劳、抗虚弱等各种复方氨基感谢阅读酸输液外,还常和精氨酸一起用于配制恢复疲劳的发泡饮料.L—鸟氨精品文档放心下载酸因其多功能的保健作用而引起世人的特别关注。1.2对鸟氨酸生产的认识生产鸟氨酸的方法有提取法,化学法,微生物法和酶法4种方法。精品文档放心下载其中提取法制备成本高，提取工艺繁琐；化学法中合成收率低，有机感谢阅读物合成过程中会产生致癌物，还会合成手性分子，拆分工艺难度大；谢谢阅读酶法是精氨酸在精氨酸酶的作用下，生成—鸟氨酸，此法产品纯度感谢阅读高但价格昂贵精氨酸及精氨酸酶均不易获得，限于实验室制备发酵精品文档放心下载法生产的鸟氨酸，全是L型产品以鸟氨酸的盐酸盐形式存在。此法感谢阅读简便易行，只要选择合适的菌种，可以达到较高的产量,适用于工业谢谢阅读化规模生产。1.3对—鸟氨酸的生产菌株的认识目前利用发酵法生产L-鸟氨酸的出发菌株主要有谷氨酸棒杆菌精品文档放心下载的精氨酸缺陷型突变株；乳酸发酵短杆菌、川崎短杆菌、柠檬酸节杆谢谢阅读菌等的精氨酸缺陷型突变株；枯草杆菌、大肠杆菌、帕特介里编型杆感谢阅读菌的瓜氨酸缺陷性突变株;解烃棒杆菌和一种石蜡节杆菌的精氨酸缺精品文档放心下载陷性突变株;洁白链霉菌的瓜氨酸和硫胺素双重缺陷型突变株.但是,谢谢阅读用的最多的还是谷氨酸棒杆菌营养缺陷型菌株。L-鸟氨酸的生产菌谢谢阅读种多是通过菌种选育得到，选择合适的出发菌株,利用紫外线和亚硝精品文档放心下载基胍等诱变方法，筛选出L-鸟氨酸的高产菌种。生产菌大都是精氨谢谢阅读酸或瓜氨酸的营养缺陷型的棒杆菌及短杆菌(因为鸟氨酸属于胞内氨谢谢阅读基酸，菌体内鸟氨酸进一步合成精氨酸，要使其积累鸟氨酸,可以阻谢谢阅读感谢阅读就能实现）.1.4关于—鸟氨酸生产的研究1957年,Udaka利用谷氨酸棒杆菌的瓜氨酸缺陷型突变株来生产谢谢阅读鸟氨酸,在含限量要求物质精氨酸的培养基中培养,成功地蓄积了大精品文档放心下载量的鸟氨酸，,谢谢阅读Okumura和Shibuya等人在这方面也做了大量的工作，总结出了具谢谢阅读有精氨酸缺陷型及精氨酸氧肟酸盐抗性的谷氨酸棒杆菌以及具有精谢谢阅读氨酸缺陷、瓜氨酸缺陷和霉酚酸抗性等标记的柠檬酸节杆菌突变株精品文档放心下载感谢阅读献的形式发表,而在国内尚未有人做过这方面的研究。鸟氨酸的生产谢谢阅读3家。谢谢阅读目前鸟氨酸仅在日本的市场规模就达15亿日元且其需求量正在不感谢阅读断上升。但鸟氨酸的生产却极为不易，日本在80年代末也还在采用谢谢阅读以精氨酸为原料,经碱法水解或利用精氨酸酶水解得到鸟氨酸。1988谢谢阅读年,Katsumata，YokoiHaruhiko等将编码N-乙酰谷氨酸激感谢阅读酶、N-乙酰谷氨酸-半醛脱氢酶等酶基因片段从质粒PEArg1中切感谢阅读割下来,再将其连接到PEArg2质粒中导入这种重组质粒的谷氨酸精品文档放心下载棒杆菌产鸟氨酸可以达到21g/。2课题研究目的与意义2。1目的鸟氨酸生产菌株对L—鸟氨酸产量的大量积累主要包括以下两精品文档放心下载个方面:一方面，从微生物代谢机理角度考虑，解除代谢机制中的反谢谢阅读馈抑制与反馈阻遏,可使制备过程向着鸟氨酸高产的方向进行；另一谢谢阅读感谢阅读件，如培养基组分及浓度，碳氮源，无机盐及生长因子等;发酵条件精品文档放心下载如温度、pH和溶氧水平及摇床发酵优化，可提高—鸟氨酸产量。精品文档放心下载精品文档放心下载是这次科研的目的。2。2意义近年来，由于氨基酸在医药、保健品、日用化工等方面有极其广感谢阅读泛的用途尤其随着抗癌药物制剂、氨基酸营养制剂的飞速发展对原谢谢阅读料氨基酸的需求量日益增长，市场需求量不断增加。鉴于L-鸟氨酸感谢阅读谢谢阅读酵法生产鸟氨酸的研究，具有重大的经济意义和理论意义。感谢阅读3本课题研究情况3.1生产菌株的选育感谢阅读手段。选取合适的诱变条件对菌液进行诱变并吸取。1mL的菌液谢谢阅读涂布到抗性筛选培养基中。32℃下培养数天后将平板上的单菌落转入谢谢阅读抗性筛选斜面培养基中继续培养，然后再分别摇瓶培养,测定鸟氨酸精品文档放心下载产量，选取鸟氨酸产量较高的突变株。3.2摇瓶发酵工艺的优化发酵条件包括发酵培养基的优化、培养温度、pH、通风量等。感谢阅读谢谢阅读物的生成。3.21发酵培养基主要组成成分单因素实验选择不同碳源和氮源,选出最佳碳源和最佳氮源后进行正交优化精品文档放心下载实验，确定最优组合。3.22发酵培养基pH的选择通过设定不同的发酵初始pH梯度和CaCO3中谷氨酸棒杆菌含量的影响，从而探讨对鸟氨酸含量提高的影响，感谢阅读得出最佳CaCO3浓度和pH值的最佳组合。3.23发酵培养温度的选择精品文档放心下载越高，反应速度越快，生长速度快，产物生成提前，但是，酶受热容感谢阅读易失活，温度越高，失活越快，菌体也越容易衰老。32。4发酵通风量的选择精品文档放心下载.谢谢阅读一定温度下溶氧是装液量和摇瓶转速的函数,若摇瓶转速固定，则装谢谢阅读液量会直接影响培养液的情况；同样，如果装液量固定,则摇瓶转速谢谢阅读就会成为影响培养液情况的主要因素。32.5发酵培养基中生物素的影响感谢阅读精品文档放心下载行生物素添加实验，考察生物素对鸟氨酸分泌的影响。4我的任务⑴参与菌株的筛选纯化，对菌株进行活化检测⑵活化培养基、种子培养基、发酵培养基的配制⑶生物素含量的测定生物素鉴定培养基的配制：生物素鉴定用培养基葡萄糖145g/L,感谢阅读硫酸镁。65g/L，磷酸氢二钾，氯化钾03g/L，硫酸亚铁、感谢阅读硫酸锰各0.002g/L，pH7。，121℃灭菌15min。感谢阅读精品文档放心下载量乙醇于50℃下溶解，加水稀释、定容得到0.04g/mL的生物素标谢谢阅读准溶液，在121℃灭菌15min4℃保藏，备用。精品文档放心下载生物素标准曲线的绘制：取500mL无菌三角瓶，分装18mL鉴精品文档放心下载0.4mL菌液。32℃、200r/min精品文档放心下载摇床培养12h,下摇床后摇匀，用可见分光光度计650nm处测定吸光精品文档放心下载）。以生物素含量为横坐标，样品吸光率与空白吸光率之差为感谢阅读纵坐标，绘制生物素标准曲线.将样品吸光率减去空白的吸光率即得感谢阅读实测的吸光率，根据回归函数计算X值。×20×稀释倍数=生物素谢谢阅读含量(g/L）。⑷L-鸟氨酸标准曲线的绘制：①配制6MH3PO4；②冰乙酸与6MH34以1:3L精品文档放心下载的茚三酮溶液的配制：1.25g茚三酮加50ml混酸，在℃溶解后转谢谢阅读L—鸟氨酸单盐标准溶液的配制(2µmol/L);⑤1ml-鸟精品文档放心下载氨酸标准液与1ml茚三酮在100谢谢阅读入3ml冰乙酸，在512nm处测吸光值配制不同浓度梯度的—鸟氨谢谢阅读酸单盐标准溶液。以不同浓度—鸟氨酸单盐标准溶液为横坐标，一谢谢阅读吸光值为纵坐标，绘制—鸟氨酸标准曲线.⑸样品中鸟氨酸的测定将发酵后离心得到的菌液测OD512。⑹发酵液中生物素含量的测定将配置好的发酵液经离心后测。⑺生物素对鸟氨酸发酵的影响取250ml无菌三角瓶15个，以发酵液总体积为28ml，按种子液谢谢阅读为,生物素32µg/ml)加入量分别为00.20.30.40。精品文档放心下载50.607009101.11.21.31.41.5，无菌水谢谢阅读与生物素总体积为，按总体积为28ml添加发酵液的量发酵前期感谢阅读32℃、200r/min；发酵中期为34℃、220r/min；发酵后期34℃、谢谢阅读250r/min。每4h取一次样，离心后去上清液测OD512值.感谢阅读5任务完成情况以完成菌株的筛选纯化、活化鉴定;鸟氨酸标准曲线的制备；实精品文档放心下载验大体完成了整个流程，但数据还不理想，还需要继续重复和改进。感谢阅读6收获与感悟①增强自己查找资料、方案的能力；拓宽视野，了解到一些学科感谢阅读以外的知识。②精品文档放心下载精品文档放心下载能力、观察能力，对仪器和药品的使用上更加规范、安全性。感