安全输血新进展及新技术介绍1

平安输血新进展及新技术介绍

李志广

第一页，共一百二十八页。输血风险1.血液中的白细胞输注可引起受血者产生免疫应答，发生非溶血性发热反响(NFHTR)、HLA同种免疫、血小板输注无效、移植物抗宿主病(TA-GVHD)。2.主要由白细胞携带的，经输血传播的有乙肝病毒、丙肝病毒、爱滋病毒、以及HTLV、CMV、细小病毒B19、HDV等。第二页，共一百二十八页。解决输血平安性采用去白细胞滤器滤除血液及血液成分中的白细胞，防止因白细胞输注引起的输血不良反响，对提高输血疗效、减少输血不良反响、节约血液资源起到了积极作用。由于滤除了白细胞，由白细胞携带的病毒也同时被滤除，是目前实现平安输血一条有效途径。对血液制品进行病毒灭活，防止因病毒检测“窗口期〞等技术原因导致输血传播的病毒性疾病。血浆病毒灭活技术的临床应用为实现“输血零风险〞跨出了具有历史意义的一步。TA-GVHD的预防,血液辐照。第三页，共一百二十八页。第一局部

去白细胞血液成分

与

去白细胞滤器的临床应用

第四页，共一百二十八页。与白细胞相关的输血副反响去除白细胞的方法白细胞血液成分的临床应用去白细胞血液成分的经济学意义第五页，共一百二十八页。血液成分中的白细胞数第六页，共一百二十八页。血液成分中的白细胞数第七页，共一百二十八页。与白细胞相关的输血副反响

输血不良反响非溶血性发热反响〔NHFTR〕HLA同种免疫〔血小板输注无效〕输血后移植物抗宿主病〔GVHD〕输血传染疾病CMV、HTLV、HBV，HCV，HIV，EBV病毒细菌性反响免疫抑制〔免疫介导〕癌症复发、术后感染激活潜伏病毒其它输血反响再灌注损伤成人呼吸窘迫综合症〔ARDS〕白细胞第八页，共一百二十八页。输血不良反响非溶血性发热反响〔NHFTR〕发病率：红细胞悬液1.6～6%浓缩血小板27～63%屡次输血患者30～70%反响病症：病人体温上升1℃，伴寒战、肌疼；呼吸困难、肺、肾损伤、大出血、骨髓增生不良等不良后果：病人不适感；延缓输血疗效、治疗效果和增加输血费用发病原因：产生抗献血者白细胞HLA抗体，高效价白细胞凝聚素(IL-1、IL-6、TNF)第九页，共一百二十八页。HLA同种免疫〔血小板输注无效〕发病率：红细胞输注0～44％血小板输注8～50％屡次输血的病人30～70％反响病症：病人体温上升，血小板输注无效不良后果：HLA相配合的血小板输注，增加血小板输注的费用，病床周转率降低发生病因：受血者妊娠或屡次输血，引起异体免疫和致敏，产生血小板所具有抗原的相应抗体，当再输入具有相应抗原的血小板HLA不配合白细胞携带的抗HLA一类抗原可引起HLA同种免疫尽管血小板不会引起HLA同种免疫，但会被HLA抗体破坏输注含白细胞的红细胞悬液引起HLA同种免疫，导致血小板输注无效第十页，共一百二十八页。移植物抗宿主病〔输血后GVHD〕临床病症：发热、皮疹、腹泻、脏器衰竭发病率：0.1%~1%不良后果：几乎100％的死亡率产生机理：受血者先天性继发性细胞免疫功能低下、受损时

输入含免疫活性淋巴细胞的血液成分或没有能力排斥献血者的淋巴细胞导致输入的T淋巴细胞植入成功并在体内增殖GVHD第十一页，共一百二十八页。输血相关的传染病输血传播的病毒：CMV、HTLV、EBV、HBV、HCV、HIV80％的输血传染性疾病与白细胞相关白细胞是亲病毒细胞细菌性输血反响：供血者可能存在的某种局部细菌感染采血时带菌皮肤碎片进入血液中第十二页，共一百二十八页。与白细胞相关的其它输血反响再灌注损伤中性粒细胞作用成人呼吸窘迫综合症白细胞、纤维蛋白及血小板凝聚形成第十三页，共一百二十八页。血液成分中剩余白细胞数

与输血不良反响的关系第十四页，共一百二十八页。>90%的输血不良反响与白细胞相关20%的受血者会产生输血不良反响第十五页，共一百二十八页。去除白细胞的方法离心法：60-80%去除率冷冻去甘油法：90%去除率洗涤法：80-90%去除率细胞单采法：--99%去除率(不稳定〕过滤法：醋酸纤维〔Empur):95-99%去除率聚酯〔AsahiSepacell)：～99.9%去除率外表处理的聚酯(Pall)：99.99～99.999%去除率第十六页，共一百二十八页。白细胞滤除原理筛滤、拦截作用粘附作用

滤除方式：吸附与深层过滤第十七页，共一百二十八页。去白细胞滤器的筛滤、拦截作用

机械拦截颗粒，白细胞变形能力是红细胞变形能力的1/1000，滤材孔径分布不均匀细胞通过孔道受静态压力、切变率、孔形状、流速等影响；另外流体枝孔效应和边界效应对白细胞起到筛滤、拦截作用第十八页，共一百二十八页。去白细胞滤器的粘附作用白细胞膜上有特异性粘附接受器细胞对材料的许多性质有关系材料，外表化学基团等滤材外表电荷与细胞外表电荷的相互作用细胞形态与纤维形态的相互作用材料外表化学基团的亲水性对细胞膜的作用细胞补体活化造成的一些作用蛋白吸附

第十九页，共一百二十八页。聚酯材料经外表处理电镜图象第二十页，共一百二十八页。聚酯材料经外表处理电镜图象第二十一页，共一百二十八页。外表改性的聚酯材料电镜图象第二十二页，共一百二十八页。外表改性的聚酯材料电镜图象第二十三页，共一百二十八页。外表改性的聚酯材料电镜图象第二十四页，共一百二十八页。去白细胞滤器与临床应用国内外去白细胞血液的使用现状国内去白细胞滤器产品几种形式血站制备去白细胞血液成分的方法去白细胞血液成分的质控方法去白细胞血液成分的临床意义第二十五页，共一百二十八页。国外去白细胞血液成分使用现状第二十六页，共一百二十八页。国外去白细胞血液成分使用现状

80年代欧美血液病、器官移植90年代年递增5%98年英、加率先全面使用99年后欧盟等国开始全面使用

国际上已经开始由血液保存后过滤转向血液保存前过滤第二十七页，共一百二十八页。国外去白细胞血液成分使用现状临床用血已经100％去白细胞的国家或地区加拿大、法国、瑞士、葡萄牙、威尔士、苏格兰正在实施100％去白细胞的国家或地区澳大利亚、英格兰、爱尔兰、马耳他已经制定100％去白细胞实施目标的国家或地区美国、德国、荷兰、澳地利、西班牙、瑞典、丹麦、比利时、希腊、芬兰、南非、日本、韩国、新西兰第二十八页，共一百二十八页。国内去白细胞血液成分使用现状国内临床使用去白细胞血液成分情况1996年上海试用国产产品制备600余单位90年代末北京、上海等城市批量使用目前已有数省将该血液成分成分列入医保工程同期使用去白细胞血液成分数量1999年约10万单位〔床边型〕2000年约20万单位〔血库制备60％〕2001年约40～50万单位〔血库制备80％以上〕2002年约100万单位〔血库制备到达90％以上〕2003年约150万单位〔血站型产品应用，到达30％〕第二十九页，共一百二十八页。国产去白细胞滤器的几种形式床边型〔80～90年代初〕

由滤器和输血器组成白细胞去除率及临床效果与初始总数、血液保存时间和过滤温度流速、气泡排除等因素有关优点：临床使用方便、不受制备保存期限制缺点：使用效果不佳，临床使用范围较窄第三十页，共一百二十八页。1插袋针2止流夹3进血管4进液管5Y形三通6过滤部件7滴斗8管路9调节器10圆锥接头11药液注射器12保护套1插袋针2止流夹3滴斗4Y型三通5过滤部件6管路7贮血袋第三十一页，共一百二十八页。第三十二页，共一百二十八页。去白细胞滤器的几种形式血库型〔90年代末〕由滤器和血液转移袋组成难于滤除许多具有强烈致热作用细胞因子血库保存的血液成分中含有的白细胞易崩解、其碎片和释放的各种细胞因子〔白介素、肿瘤坏死因子、干扰素、转移因子〕优点：血液制备过程一致性、控制血液质量，临床应用面广缺点：制备时开放操作，血液成分保存时间制备后24小时第三十三页，共一百二十八页。去白细胞滤器的几种形式血站型〔含采血袋、导管熔接〕

由滤器和采血系统合成加工时灭菌组成含采血袋的去白细胞滤器，用于制备去白细胞红细胞悬液和血浆。由滤器和血袋组成的产品与需要制备的血液成分无菌连接制备去白细胞红细胞悬液。优点：采集后6～12小时制备，血液保存时间与保养液的参数一致第三十四页，共一百二十八页。1血袋对接导管2过滤部件3Y形三通4止流夹5去白红细胞贮存袋6去白血浆贮存袋1采血针2折通式导管3采血袋4Y形三通5去白细胞全血6过滤部件7血浆袋8转移袋第三十五页，共一百二十八页。第三十六页，共一百二十八页。日本泰尔茂TSCD无菌接管机德国费森尤斯COMPODOCK第三十七页，共一百二十八页。去白细胞血液成分的质量指标国家或地区剩余白细胞数合格率判别标准美国FDA标准5×106100％检测合格欧共体标准1×10690％检测合格〔满足95％置信限〕法国标准1×10697％检测合格〔满足95％置信限〕中国国家标准2.5×106〔相当于美国标准〕第三十八页，共一百二十八页。YY0329-2002去白细胞滤器

国家行业标准参数简介生物指标

无毒、无菌、无热原剩余白细胞数≤2.5106红细胞回收率≥85.0%溶血率≤5.0%化学性能每套产品环氧乙烷残留量≤1.0mg第三十九页，共一百二十八页。去白细胞血液成分质量控制国家制定的质量指标剩余白细胞数〔<2.5×106/单位〕红细胞回收率〔>85.0%〕血站或医院血库应控制的质量指标溶血率〔5.0%〕保存期〔血库型：<24小时〕细胞体外功能〔ATP、pH、2-3DPG〕第四十页，共一百二十八页。中国输血技术规程〔修改版〕3.5少白细胞的红细胞制备〔滤器过滤法〕3.5.1白细胞过滤方法按滤器生产厂家说明书操作。3.5.2检查待滤过血液的外观质量并充分混匀血液。3.5.3根据血液的规格选择合格的白细胞过滤器。3.5.4关闭过滤器袋上所有导管夹，用无菌导管连接设备将过滤器与血袋连接。3.5.5翻开滤器两端夹子使主血袋内血液通过滤器流入贮存袋内，关闭滤器两端夹子。3.5.6用热合机热合切断少白细胞制品与滤器装置的连接,并留取血样以供临床血型鉴定及配血交叉使用。第四十一页，共一百二十八页。影响去白细胞血液成分质量的因素血液成分的保存时间血浆数量过滤前白细胞数量过滤时温度血液成分中的血红蛋白性能流速第四十二页，共一百二十八页。去白细胞血液成分的临床应用去白细胞血液成分输注降低术后感染感染率〔％〕第四十三页，共一百二十八页。去白细胞血液成分的临床应用输注去白细胞血液成分降低感染率感染率〔％〕BCD-去白膜层血液成分〔n=142〕LD-去白细胞血液成分〔n=118〕第四十四页，共一百二十八页。含采血袋产品过滤的优点全封闭系统完全不改变血液保存期改善滤后血液/血液成分的质量保存期内红细胞膜脆性改善保存期内炎性细胞因子无明显升高防止二次污染可能性便于血液成分的全程质量管理〔cGMP/SOP〕第四十五页，共一百二十八页。成分分离受血者保存前全血过滤保存前分别过滤采血别离后过滤储存床边过滤

制备去白细胞血液成分的方法

第四十六页，共一百二十八页。血液保存前过滤的优点保存期内白细胞和血小板代谢物释放比较(中间值)(5-羟色胺μg/mL)MarkE.Brecheretc.SeminarinHematology,Vol28,No3,Suppl5(July),1991:pp3-9第四十七页，共一百二十八页。血液保存前过滤的优点保存期内白细胞和血小板代谢物释放比较(中间值)(组胺μg/mL)MarkE.Brecheretc.SeminarinHematology,Vol28,No3,Suppl5(July),1991:pp3-9第四十八页，共一百二十八页。血液保存前过滤的优点保存期内白细胞和血小板代谢物释放比较(中间值)(酸性磷酸酶μg/ml)MarkE.Brecheretc.SeminarinHematology,Vol28,No3,Suppl5(July),1991:pp3-9第四十九页，共一百二十八页。血液保存前过滤的优点保存期内白细胞和血小板代谢物释放比较(中间值)(弹性蛋白酶unit/mL)MarkE.Brecheretc.

SeminarinHematology,Vol28,No3,Suppl5(July),1991:pp3-9第五十页，共一百二十八页。去白细胞血液成分的经济性问题如果只从受血者每次购血的价格看，好似费用在增加；但如果从整个治疗过程来看，受血者的总治疗费用是降低的。更重要的是，不单单是费用降低这个外表现象。减少病源体感染时机，乃至降低死亡率才是最大、最重要的问题。第五十一页，共一百二十八页。去白细胞血液成分的经济性问题术后留院天数比较

Dr.JensenTransfusion1995;35:719-722974.40537.60967.20总留院天数17(10-92)11(8-24)10(8-26)平均值(区间)输未滤血组N=56输过滤血组N=48非输血组

N=93天数第五十二页，共一百二十八页。去白细胞血液成分的经济性问题

总医疗费用比较Dr.JensenTransfusion1995;35:719-72212,3477,8677,030每例病人费用691,437377,626653,827总费用（USD）3,168滤器费用（USD）12,88011,040输血费用（USD）678,559363,418653,827其它费用（USD）974.40537.60967.20总留院天数输未滤血组n=56输过滤血组n=48

非输血组

n=93第五十三页，共一百二十八页。去白细胞血液成分的经济性问题结肠手术后感染比较--随机双盲试验结果输普通血液成分：12%术后感染输去白细胞血液成分：0%术后感染JensenLSetc.Lancet1996;348:841-845第五十四页，共一百二十八页。去白细胞血液成分的经济性问题住院天数患者数住院天数患者数8.57238.330非输血患者11.01416.0812输血患者输去白成分（4/1/98-8/31/98）输普通血液成分（9/1/97-2/28/98）结肠手术〔DRG148-154〕后留院天数比较

每年医院节约费用USD234,651.06JameL.Newsome,M.D.,CarrawayMethodistHospital,Birmingham,AL第五十五页，共一百二十八页。去白细胞血液成分的经济性问题大量的临床统计和临床试验报告证实：临床输注去白细胞血液成分不仅降低了输血副反响的发生率，而且还会降低治疗费用。第五十六页，共一百二十八页。去白细胞血液成分临床应用展望90年代初去白细胞输血滤器进口产品开始在中国使用90年代末国产产品开始替代进口产品2005年前能否实现临床输注全部滤除白细胞的血液成分？！第五十七页，共一百二十八页。实现临床全部输去白细胞

血液成分的一些根本条件临床医生对去白细胞血液成分的认识全体公民的平安输血意识保存前过滤产品的国产化医保的支持、进口产品、国内企业的推动第五十八页，共一百二十八页。第二局部

血液成分的病毒灭活

及其临床应用第五十九页，共一百二十八页。血液成分病毒灭活的临床意义临床输注用血浆的病毒灭活方法亚甲蓝光化学病毒灭活方法血浆光化学病毒灭活方法简介血浆病毒灭活的输血器材介绍国内病毒灭活血浆应用情况血浆病毒灭活剂吸附过滤器产品性能指标第六十页，共一百二十八页。血液中的病毒以及使用血液及其制品的风险目前能看出经输血及血制品传染的病毒主要有如下几种：输血后病毒性肝炎〔HBV、HCV、HDV、HEV、HGV、TTV)HBV〔乙型肝炎病毒〕这是目前我国感染人数及危害最严重的病毒之一。因此我国非常重视对该病毒的筛查。HCV〔丙型肝炎病毒〕虽然该病毒发现较晚，但是它与输血传染的相关性非常密切，感染后容易开展成慢性肝炎，肝硬化，甚至肝癌。由于开展了较好的检测方法并且成为一个血液筛查的常规指标，因此输血传播的危害正在缩小。第六十一页，共一百二十八页。3.HIV-1，HIV-2〔艾滋病病毒1型和2型〕目前世界上危害最严重的病毒之一。现在中国艾滋病传染进入快速增长期，2022年预计可达千万，最大的危险是98％的感染者自己不知道，处于地下。因此输血感染该病毒的风险不容无视。另外采血〔浆〕过程中的平安问题也必须考虑。艾滋病村的悲剧不能再重演。第六十二页，共一百二十八页。4.HTLV〔人类T淋巴细胞白血病病毒〕已被证实与成人Ｔ淋巴细胞白血病和多种神经系统疾病密切相关。在日本南部、加勒比海地区和我国福建省局部地区等均存在地方性流行区。约有２％－１０％的ＨＴＬＶ感染者经一段潜伏期后会发生致死性白血病或瘫痪。输血是ＨＴＬＶ的主要传播途径之一。5.CMV〔巨细胞病毒〕，CMV在人类的血清抗体阳性率约为40％～100％。CMV感染对免疫缺陷者、孕妇、体重缺乏1200克的新生儿和器官移植者有很大威胁。孕妇因输血而致巨细胞病毒感染最易使胎儿发生宫内感染，导致胎儿畸形甚至死亡。大约50％的异基因骨髓移植患者可因输血而发生巨细胞病毒感染，死亡率很高，肺炎是最常见的并发症。故给这些特殊病人输血时要筛选巨细胞病毒阴性的血液。第六十三页，共一百二十八页。6.SENV深圳2001年从献血者血样中别离出SENV。SENV是1999年底从一位艾滋病毒感染者的血液中别离获得的一种新病毒。输血的次数越多，感染的几率也越大。同时，SENV与HIV、HBV、HCV发生重叠感染的比率极高。7.CJD〔克雅氏病，疯牛病〕目前英国已经发现经输血传染CJD，这有可能成为输血爆发传染的一个新疾病，因此要密切关注克雅氏病，特别是致病朊病毒的开展动向。由于朊病毒为纯粹的蛋白质病毒，因此病毒的灭活将会非常的困难。输血传播的梅毒、原虫、寄生虫疾病疟原虫感染者可产生无病症疟原虫携带状态，当输用这种血液时可发生输血性疟疾。在流行区，一些寄生虫如弓形体、丝虫病等都有经输血使受血者发生感染的病例。第六十四页，共一百二十八页。

中国无偿献血者人群血液平安指标血清指标地区ALT%HBsAg%抗-HCV%抗-HIV%梅毒%合计%内蒙巴盟3.917.962.2300.00814.1河南濮阳0.500.920.9000.156.37上海0.541.610.420.020.402.99银川0.350.700.790.060.432.35山东青岛0.152.390.3800.453.36北京6.021.080.400.040.337.58第六十五页，共一百二十八页。血浆病毒灭活湿热法〔巴士德法〕有机溶剂/洗涤剂(Solvents/Detergents〕亚甲兰光化学法〔MB-P〕S-59光化学法核黄素光化学法红细胞病毒灭活血卟啉、酞菁化合物、部化菁酚噻嗪类化合物〔MB、DMMB〕+可见光照射FRALES303+PH调节PEN110血小板病毒灭活硫堇+可见光照射〔Thionine-I〕8-甲氧补骨脂+UVA〔8-MOP-UVA〕S-59+UVA核黄素常用的去除/灭活病毒方法第六十六页，共一百二十八页。亚甲兰光化学法〔MB-P〕亚甲蓝-荧光照射处理单个单位处理(在采供血机构进行)操作简便：亚甲蓝加红光或白光可使病毒核酸变性，对HBV、HCV、HIV比较有效需要某一步骤去除亚甲蓝第六十七页，共一百二十八页。血液制品的病毒灭活血浆蛋白制品的病毒灭活凝血因子制品高危制品白蛋白制品免疫球蛋白制品血液成分制品的病毒灭活血浆红细胞血小板第六十八页，共一百二十八页。血液制品病毒灭活的根本要求有效灭活输血相关病毒数量灭活可能存在的全部病毒种类灭活各种可能污染血液的病毒平安性血液有效成分活性保证输血的疗效活性损失程度可以接受第六十九页，共一百二十八页。亚甲兰+可见光照射〔MB-I〕用于血浆

-优点适用于单袋血浆的病毒灭活病毒灭活机理明确、效果可靠对人体平安根本维持血浆有效成分的活性第七十页，共一百二十八页。MB-I病毒灭活机理LIGHTMBMB第七十一页，共一百二十八页。

MB-I血浆病毒灭活的效果照射时间051030600.001.002.003.004.005.006.007.008.009.00logTCID5051060logTCID50变化SINDBISVSV第七十二页，共一百二十八页。亚甲兰的平安性亚甲兰是国家药典收录的静脉输注药物1000ml血浆含380mg亚甲兰，仅是临床常用成人输注量的1/600

适应症MB常用剂量给药途径高铁血红蛋白症50~250mg/50kg静脉

甲状腺染色50~250mg/50kg静脉血浆病毒灭活0.38mg/1000ml静脉第七十三页，共一百二十八页。MB-I的基因平安性

MB-I人红细胞及血浆小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验阴性--无致突变作用MB-I人红细胞及血浆孕鼠致畸敏感期毒性试验阴性--对胚胎无影响，无生殖毒性反响MB-I人红细胞及血浆CHL细胞染色体畸变试验阴性—无致细胞染色体畸变作用第七十四页，共一百二十八页。MB-I对血浆凝血因子的影响05101530Fg回收率Ⅷ:C回收率Ⅸ:C回收率707580859095100(%)照射时间第七十五页，共一百二十八页。MB-I血浆临床输注〔200,000单位〕无不良输注反响治疗效果良好第七十六页，共一百二十八页。

MB-I血浆病毒灭活摘要MB-I适用于单一人份血浆的病毒灭活建立了MB-I血浆病毒灭活的方法验证了MB-I方法的有效性和平安性研制了MB-I血浆病毒灭活的配套器材和设备临床输注效果良好、无不良反响第七十七页，共一百二十八页。亚甲蓝光化学病毒灭活方法

血浆病毒灭活中亚甲蓝使用方法亚甲蓝添加浓度：0.9～1.3μmol/L亚甲蓝添加方式：注射液添加、固体缓释第七十八页，共一百二十八页。血浆病毒灭活输血器材介绍血浆病毒灭活剂吸附过滤器血浆病毒灭活剂吸附过滤器是为光化学法灭活血液病毒、并可同时防止输血不良反响引起的疾病而设计的一种新的输血器材。主要功能：吸附光化学方法灭活血液或血液成分中各种病毒的光敏剂－亚甲蓝。滤除引起输血不良反响、携带各种病毒的白细胞。第七十九页，共一百二十八页。血浆病毒灭活剂吸附过滤器

几种产品型式含光敏剂型第八十页，共一百二十八页。血浆病毒灭活剂吸附过滤器

几种产品型式成分别离型第八十一页，共一百二十八页。亚甲蓝光化学病毒灭活方法血浆病毒灭活工艺过程

按卫生部标准两次检验合格的献血员全血〔200mL或400mL〕献血后6～24小时内别离出血浆添加符合临床输注要求的光敏剂-亚甲蓝针剂(或固体缓释的亚甲蓝)荧光照射〔照射箱〕去除白细胞、吸附光敏剂血浆储存于-20℃供临床输注第八十二页，共一百二十八页。输血技术操作规程〔修改版〕3.8.2病毒灭活血浆操作规程根据设备操作说明书设置医用血浆病毒灭活柜的参数。根据血浆的规格选择适宜、质量合格的耗材。用无菌导管连接设备将血浆袋与耗材连接。将血袋悬挂于支架上，翻开导管夹，使血浆经“亚甲蓝添加元件〞，流入光照袋。在医用血浆病毒灭活柜中进行光照。光照处理后的血浆经病毒灭活装置配套用输血过滤器过滤，滤除亚甲蓝和绝大局部白细胞,即得病毒灭活血浆。第八十三页，共一百二十八页。血液中心采集加工的血浆第八十四页，共一百二十八页。添加亚甲蓝后的血浆第八十五页，共一百二十八页。血浆经病毒灭活器材添加亚甲蓝第八十六页，共一百二十八页。第八十七页，共一百二十八页。添加亚甲蓝后的血浆荧光照射第八十八页，共一百二十八页。添加亚甲蓝后的血浆荧光照射第八十九页，共一百二十八页。光照射后的血浆吸附亚甲蓝、滤除白细胞第九十页，共一百二十八页。光化学方法灭活病毒后的血浆第九十一页，共一百二十八页。添加亚甲蓝的血浆与原浆、灭活病毒后血浆的比较第九十二页，共一百二十八页。国内病毒灭活血浆应用情况1998年研制成功血浆病毒灭活剂吸附过滤器1999年在临床试用20000单位病毒灭活血浆2000年在上海5家三甲医院推广使用10万单位2001年在上海11家三甲医院使用20万单位2002年起每年平均在临床使用25～30万单位第九十三页，共一百二十八页。血浆病毒灭活剂吸附过滤器

临床意义

使单袋血液成分病毒灭活的产品可用于临床。吸附光敏剂-亚甲蓝，解除了人们对光敏剂有可能导致的副作用而产生的顾虑。该输血器材是血液病毒灭活方法由实验室研究转化成临床使用上的一种创新。第九十四页，共一百二十八页。血液病毒灭活方法评价原那么能有效灭活病毒指示病毒：HIV、DHBV、Sindbis、VSV、脊髓灰质炎病毒……方法：细胞病变法、动物感染、PCR对血液成分活性及功能无明显不良影响血浆：凝血因子、血浆蛋白回收率、蛋白质免疫原性…….红细胞：溶血、K+逸出、ATP、2,3-DPG、形态积分、体内回收率……血小板：HSR、形态积分、聚集率、CCI…….对人体平安急性毒性、慢性毒性、基因毒性适用于单袋血液成分处理第九十五页，共一百二十八页。血浆病毒灭活剂吸附过滤器

产品性能指标一单位新鲜冰冻血浆白细胞去除率≥99.99%剩余白细胞数≤1.0×104总蛋白回收率≥85.0%光敏剂吸附率≥85.0%第九十六页，共一百二十八页。验证方法健康人血浆，参加不同数量级的模型病毒，同时添加不同浓度的MB，利用医用血浆病毒灭活柜处理不同的时间，通过前后病毒滴度的变化来检验该方法对病毒的灭活效果，并评价最佳答案的病毒灭活组合。指示病毒水疱性口膜炎病毒VSV小鼠的运动神经元病毒Sindbis病毒滴度测定采用有限稀释法，按Ｒeed-Muench方法计算。│病毒│基因组│脂包膜│大小〔nrn〕│指示病毒举例││HIV│RNA│有│80-100│HIVVSV│HBV│RNA│有│45│鸭乙型肝炎病毒、伪狂犬病毒││HCV│RNA│有│40-60│牛腹泻病毒、Sindbis病毒│HAV│RNA│无│27│HAV、脊髓灰质炎病毒、脑心肌炎病毒│B19│DNA│无│20│犬细小病毒、猪细小病毒│第九十七页，共一百二十八页。试验用仪器及试剂1、医用血浆病毒灭活柜2、亚甲基蓝MethylthioniniumChloride；3、CO2孵育箱〔FORMA公司〕；4、健康人血浆〔武汉市血液中心提供〕；5、细胞及试剂：VeroE6，293，BHK细胞〔中科院武汉病毒所保存〕RPMI1640培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、DMEM〔GIBCO公司〕。第九十八页，共一百二十八页。MB光化学灭活工艺对血浆有效成分的影响验证验证指标

凝血因子保有总蛋白回收验证方法

凝血因子效价测定采用自动凝血仪，蛋白含量测定采用双缩脲法测定。

器材及试剂

凝血因子测定采用美国太平洋生物技术公司生产的凝血试剂盒和日本产凝血分析仪

第九十九页，共一百二十八页。验证结果凝血因子保有率＞80%总蛋白回收率＞90%利用最佳答案灭活参数组合对血浆进行处理，通过测定处理前后血浆样本的凝血因子效价和蛋白含量的变化以观察MB灭活工艺处理对血浆内凝血因子及蛋白质的影响程度第一百页，共一百二十八页。参数选择温度：根据现今血液学研究及成分输血应用，血液中各因子的保存温度为4℃(24h)或-35℃度冷藏，因为工艺灭活在液态条件下进行，结合温度的变化对整个灭活效果的影响，以及灭活柜的机械参数〔2—8℃〕，所以选择4℃作为血浆处理温度。MB参加量：MB作为光敏剂，其参加量不仅对灭活效果有较大影响，而且对血浆蛋白结构也有很大影响，因此将处理时血浆内MB浓度分为0.2μg/ml、0.5μg/ml、0.8μg/ml进行验证。针对MB参加量，光照射强度选定为23000、33000lux进行验证。灭活时间，为了了解病毒灭活速率及保证较明显看到病毒滴度变化，特先取5min，15min，30min和45min为时间参数验证。第一百零一页，共一百二十八页。指示病毒灭活效果结果VSV灭活曲线第一百零二页，共一百二十八页。图二：Sindbis灭活曲线第一百零三页，共一百二十八页。结论MB光化学法对指示病毒VSV，Sindbis具有良好的灭活作用。在4℃，23000lux光照，0.2μg/mlMB，30分钟的处理后VSV，Sindbis的滴度均下降了6个log值以上，灭活效果非常明显。MB光化学法对Sindbis的灭活效果比对VSV的要强。临床建议使用4℃，28000lux光照，0.5μg/mlMB，30分钟的处理。第一百零四页，共一百二十八页。近年关注的血液病毒灭活方法亚甲兰光化学法〔MB-P〕S-59光化学法核黄素光化学法FRALES303+PH调节PEN110第一百零五页，共一百二十八页。血液病原体灭活研究的开展取向病毒灭活病原体灭活

以病毒灭活为焦点、兼顾细菌、寄生虫、T细胞等病原体的灭活血液成分病原体灭活全血病原体灭活能有效灭活病原体；对红细胞、血小板、血浆均无明显损伤第一百零六页，共一百二十八页。展望血浆病原体灭活建立了成熟的方法，经亚甲蓝光化学病毒灭活处理的血浆已临床应用逾十年，效果良好血细胞病原体灭活两项血小板病原体灭活技术已在欧洲获准进入临床,红细胞病原体灭活的研究尚有待突破，全血病原体灭活已开始初期研究有望最终克服输血感染性疾病病第一百零七页，共一百二十八页。小结将供血者的白细胞输注给患者是产生输血不良反响的主要原因，临床使用去白细胞血液成分是提高输血疗效的有效途径血液成分的病毒灭活是实现平安输血的y有效途径实现平安输血对提高人民群众的健康水平具有巨大的社会效益，是每一位输血工作者追求的崇高目标第一百零八页，共一百二十八页。第三局部血液辐照第一百零九页，共一百二十八页。输血相关性移植物抗宿主病〔TA-GVHD〕

是指受血者输入含免疫活性淋巴细胞的血液成分，从而引起相关性移植物抗宿主病。

其临床病症早在60年代中期已被描述，但直至1987年国外才首次确诊，自此国外文献报道甚多，而国内报道极其罕见。TA-GVHD第一百一十页，共一百二十八页。TA-GVHD发病机理供血者淋巴细胞在受血者体内增植，导致异体淋巴细胞对宿主机体的排异反响第一百一十一页，共一百二十八页。TA－GVHD易患对象免疫功能低下先天性免疫缺乏早产儿、新生儿接受大剂量化疗、放疗的肿瘤患者近亲间输血输注大量“热血〞和新鲜血的患者第一百一十二页，共一百二十八页。TA-GVHD发生机理A2A2

B8B8——————————供者〔HLA-A2、B8〕