MMFSCNG食品添加剂叶酸

MM_FS_CNG_0516食品添加剂叶酸MM_FS_CNG_0516食品添加剂叶酸适用范围本标准适用于化学合成法制得的叶酸，在食品工业中作为维生素类营养强化剂。化学名称、分子式、结构式、分子量化学名称:N-［4-［（2-氨基-1，4-二氢-4-氧代-6-蝶啶）甲氨基］苯甲酰基］-L-谷氨酸N-[4-[ (2-Amino-1，4-dihydro-4-oxo-6-pteridinyl)methylamino]benzoyl]-L-glutamicAcidC1"°6ONHCH.NHC1"°6ONHCH.NHCOON结构式:分子量：（按1987年国际原子量计）技术要求.性状本品为黄色或橙黄色结晶性粉末；无臭、无味。在水、乙醇、丙酮、三氯甲烷或乙醚中不溶；在氢氧化钠和碳酸钠的稀溶液中溶解。.项目和指标项 目指 标含量（以C19H19N7O6计），％〜（第一法）〜（第二法）水 分，％ W炽灼残渣，％ W重金属（以Pb计），％ W砷（以As计），％ W4.试验方法.鉴别

试剂氢氧化钠：/L溶液。仪器设备紫外分光光度计，附1cm比色池。鉴别方法取样品，加氢氧化钠溶液制成每1mL中含10^g样品的溶液，用紫外分光光度计测定，在256±2nm,283±2nm,365±4nm的波长处有最大吸收，吸收度256nm与吸收度365nm的比值应为〜。.叶酸含量测定第一法.比色分光法.试剂氢氧化钠：/L溶液；盐酸：2mol/L溶液；锌粉（无砷锌）；亚硝酸钠：％溶液；氨基磺酸铵：％溶液；二盐酸萘基乙二胺：％溶液;对照品溶液的制备：称取叶酸对照品（同时测定水分）（准确至），置100mL量瓶中，加氢氧化钠溶液使溶解，并稀释至刻度，摇匀（溶液A）。精密吸取溶液A2mL，置另一100mL量瓶中，加盐酸溶液20mL，用水稀释至刻度，摇匀，即得。每1mL中约含叶酸对照品16ug（溶液B）；样品溶液的制备：称取叶酸样品，按对照品溶液的制备法制备，即得。.仪器设备分光光度计，附1cm比色池。.测定方法精密量取对照品溶液B与样品溶液B各60mL，分别置250mL具塞锥形瓶中，各加锌粉（可稍过量），连续振摇20min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，各精密吸取续滤液2mL，分别置10mL量瓶中，各依次加水3mL，盐酸溶液1mL与亚硝酸钠1mL，混匀，放置2min，各加氨基磺酸铵溶液1mL，混匀，放置10min，各加二盐酸萘基乙二胺溶液1mL，混匀，放置10min，用水稀释至刻度，摇匀。另精密吸取对照品溶液A与样品溶液A各20mL，分别置100mL量瓶中，各加盐酸溶液20mL，用水稀释至刻度，摇匀。各精密吸取2mL，分别置于10mL量瓶中，自“依次加水3mL”起，依法操作；另取水2mL置10mL量瓶中，自“依次加水3mL”起，依法操作，作为空白，用分光光度计测定，以1cm的比色池在550±1nm的波长处测定上述二组溶液的吸收度。.计算结果的表示.4 1 2——X100（A-A/10）・m（100-X） 100A1一用锌粉还原的对照品溶液吸收度；A 用锌粉还原的样品溶液吸收度；.4 1 2——X100（A-A/10）・m（100-X） 100A1一用锌粉还原的对照品溶液吸收度；A 用锌粉还原的样品溶液吸收度；A：——未用锌粉还原的对照品溶液吸收度;A4 未用锌粉还原的样品溶液吸收度；(1)1式中：m1 对照品质量，g；m样品质量，g；x2——对照品水分含量，％；X：——样品水分含量，％。注：许X3按测定。两次平行试验的相对偏差应小于2%。第二法.高效液相色谱法.试剂磷酸二氢钾；氢氧化钾：/L溶液；甲醇（HPLC色谱级）；烟酰胺（药用级）；氨水：％溶液；叶酸对照品（中国卫生部生物制品鉴定所）。.仪器设备高效液相色谱仪，附十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱。.系统适用性试验以磷酸二氢钾与氢氧化钾液（/L）70mL，加水稀释成约850mL并调节pH至土，加甲醇80mL，用水稀释成1000mL的溶液为流动相；检测波长为254nm，叶酸峰和内标物质峰的分离度应大于。分离度（R）按式（2）计算：2(t—t)(2)R= R2 R1(2)w】+W2式中：％一叶酸峰的保留时间;%一烟酰胺峰的保留时间;W 叶酸峰的宽度；W1——烟酰胺峰的宽度。.校正因子测定取烟酰胺适量，加水溶解并稀释成为1mL中含的溶液作为内标溶液；另称取叶酸对照品5mg（精确至）置25mL量瓶中，加％氨溶液约15mL溶解，精密加入内标溶液5mL，用同一溶剂稀释至刻度，摇匀，取10^1注入液相色谱仪，计算校正因子。校正因子（F）按式（3）计算：1F_%/m3 1A/m式中：A——烟酰胺的峰面积；A：——叶酸对照品的峰面积；m3 烟酰胺的质量，g；m叶酸对照品的质量，g。.供试品溶液的制备与测定取本品约5mg（精确至），按校正因子测定项下的叶酸对照品溶液的制备和测定。.计算结果的表示叶酸含量％（以质量百分数表示）按式（4）计算：X=FXA/m5X100 （4）4iA/m式中：Fi——校正因子；A 叶酸峰面积；A7——烟酰胺峰面积；m；——样品的质量，g；m 烟酰胺质量，go.允许差&两次平行试验的相对偏差应小于2%。.水分的测定试剂费休氏试液：配制称取碘（置硫酸干燥器内48小时以上）110g，置干燥的具塞烧瓶中，加无水毗啶160ml，注意冷却，振摇至碘全部溶解后，加无水甲醇300ml，称定重量，将烧瓶置冰浴中冷却，通入干燥的二氧化硫至重量增加72g，再加无水甲醇使成1000ml，密塞，摇匀，在暗处放置24小时。本液应遮光，密封，置阴凉干燥处保存。临用前应标定浓度。标定用水分测定仪直接标定。或取干燥的具塞玻瓶，精密称入重蒸馏水约30mg，除另有规定外加无水甲醇2〜5ml，用本液滴定至溶液由浅黄色变为红棕色，或用永停滴定法（附录WA）指示终点；另作空白试验，按下式计算。F'工A-B式中：F——为每1ml费休氏试液相当于水的重量，mg；W——为称取重蒸馏水的重量，mg；A——为滴定所消耗费休氏试液的容积，ml；B——为空白所消耗费休氏试液的容积，mlo无水甲醇；三氯甲烷。仪器设备费休氏水分测定仪。测定方法称取样品（准确至），置干燥的具塞玻瓶中，加三氯甲烷无水甲醇（4：1）5mL，在不断振摇（或搅拌）下，用费休氏试液滴定至溶液由浅黄色变为红棕色。同法作空白试验。计算结果的表示样品中水分含量X（以质量百分数表示）按式（5）计算：（i2）・F2X10。式中：F——每1mL费休氏试液相当于水的质量，mg；T2——样品消耗费休氏试液的体积，mL；T1——空白所消耗费休氏试液的体积，mL；m2——样品的质量，mg。允许差两次平行试验的相对偏差应小于％。.炽灼残渣的测定试剂硫酸。测定方法称取样品1g（准确至），置于已在700〜800°C炽灼至恒重的瓷坩锅中，用小火缓缓加热至完全炭化，放冷后，加硫酸〜1mL使湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽后，在700〜800C下灼烧到恒重。计算结果的表示炽灼残渣％（以质量百分数表示）按式（6）计算：X=m8~m0X100 （6）6m式中：m8 坩蜗加残渣质量，g；m9 坩蜗质量，g；m0样品质量，g。.重金属的测定第一法仲裁法.原理概要在弱酸性（pH3〜4）条件下，试样中的重金属离子与硫化氢作用，生成棕黑色，与同法处理的铅标准溶液比较，做限量试验。.主要试剂和仪器.1主要试剂硝酸、硫酸、盐酸\氨水；6mol/L盐酸：量取50mL盐酸，用水稀释至100mL；1mol/L盐酸：量取盐酸，用水稀释至100mL；6mol/L氨水：量取40mL氨水，用水稀释至100mL；1mol/L氨水：量取氨水，用水稀释至100mL；的乙酸盐缓冲液：称取乙酸铵溶于25mL水中，加45mL6mol/L盐酸，用稀盐酸或稀氨水调节pH值至，用水稀释至100mL；酚酞指示液：1%乙醇溶液；饱和硫化氢水：将硫化氢气体通入不含二氧化碳的水中，至饱和为止（此溶液临用前制备）；铅标准溶液：称取高纯硝酸铅，溶于10mL1%硝酸中，定量移入100mL容量瓶中，用水稀释至刻度。此溶液1mL相当于铅。临用前用水稀释100倍，使成相当于10吓铅；1%硝酸：取1mL硝酸加水稀释至100mL。.2.仪器50mL纳氏比色管；所用玻璃仪器需用（10〜20）%硝酸浸泡24h以上，用自来水反复冲洗，最后用水冲洗干净。.过程简述.1.样品处理一般样品可直接按“测定”进行测定，如A管的色度深于C管的色度，应先经样品处理。..干法消解：本法适用于不适合用湿法消解的样品。称取样品，置于坩蜗中，加入适量硫酸浸润样品，小火炭化后，^口2mL硝酸和5滴硫酸，小心加热，直到白色烟雾挥尽，移入高温炉中，于550°C灰化完全，冷却后取出，加2mL6mol/L盐酸湿润残渣，于水浴上慢慢蒸发至干。用1滴浓盐酸湿润残渣，并加10mL水，于水浴上再次加热2min，将溶液移入50mL容量瓶中，如有必要须过滤，用少量水洗涤坩蜗和滤器，洗滤液一并移入容量瓶中，混匀，每10mL该溶液相当于样品。在样品灰化同时，另取一坩蜗，按上述方法做试剂空白试验。.2测定A管：吸取含铅量相当于指定的重金属限量的铅标准溶液（不低于10吓铅）于50mL纳氏比色管中（如样品经处理，须同时吸取与样品液等量的试剂空白液），加水至25mL，混匀，加1滴酚酞指示液，用稀盐酸或稀氨水6mol/L或1mol/L调节pH至中性（酚酞红色刚褪去），加入的乙酸盐缓冲液5mL，混匀，备用。B管：取一支与A管所配套的纳氏比色管，加入（10〜20）mL（或适量）样品液，加水至25mL，混匀，加1滴1%酚酞指示液，用稀盐酸或稀氨水6mol/L或1mol/L调节pH至中性（酚酞红色刚褪去），加入的乙酸盐缓冲液5mL，混匀，备用。c管：取一支与A、B管所配套的纳氏比色管，加入与B管等量的相同的样品液，再加入与入管等量的铅标准溶液，加水至25mL，混匀，加1滴1%酚酞指示液，用稀盐酸或稀氨水（6mol/L或1mol/L）调节pH至中性（酚酞红色刚褪去），加入的乙酸盐缓冲液5mL，混匀，备用。向各管中加入10mL新鲜制备的硫化氢饱和液，并加水至50mL刻度，混匀，于暗处放置5min后，在白色背景下观察，B管的色度不得深于A管的色度，C管的色度应与A管的色度相当或深于A管的色度。第二法按方法操作（但在500〜600C灼烧），加硝酸，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后（或取供试品一定量，缓缓炽灼至完全炭化，放冷，加硫酸〜，使恰湿润，用低温加热至硫酸除尽后，加硝酸。蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，在500〜600C炽灼使完全灰化），放冷，加盐酸2ml，置水浴上蒸干后加水15m1，滴加氨试液至对酚酞指示液显中性，再加醋酸盐缓冲液2ml，微热溶解后，移置纳氏比色管中，加水稀释成25ml；另取配制供试品溶液的试剂，置瓷皿中蒸干后，加醋酸盐缓冲液2ml与水l5m1，微热溶解后，移置纳氏比色管中，加标准铅溶液一定量，再用水稀释成25ml；照上述第一法检查，即得。再在两管中分别加硫代乙酰胺试液各2m1，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深。.砷的测定方法一二乙氨基二硫代甲酸银比色法原理概要在碘化钾和氯化亚锡存在下，将样液中的高价砷还原为三价砷，三价砷与锌粒和酸产生的新生态氢作用，生成砷化氢气体，经乙酸铅棉花除去硫化氢干扰后，将溶于三乙醇胺一三氯甲烷中或毗啶中的二乙氨基二硫代甲酸银溶液吸收并作用，生成紫红色络合物，与标准比较定量。主要试剂与仪器.主要试剂硝酸、硫酸、盐酸；硫酸（1mol/l）溶液：量取28mL浓硫酸，慢慢加入水中，用水稀释到500mL；氧化镁、三氯甲烷、毗啶、无砷金属锌；20%氢氧化钠溶液；15%硝酸镁溶液；15%碘化钾溶液（临用前配制，贮于棕色瓶内）；40%氯化亚锡溶液：称取20g氯化亚锡（SnCl-2HO），溶于50mL盐酸中；乙酸铅棉花：将脱脂棉浸于10%乙酸铅溶液审，2h2后取出晾干；吸收液A：称取二乙氨基二硫代甲酸银，研碎后用适量三氯甲烷溶解，加入三乙醇胺，再用三氯甲烷稀释至100mL。静置后过滤于棕色瓶中，贮存于冰箱内备用；吸收液B：称取二乙氨基二硫代甲酸银，研碎后用毗啶溶解，并用毗啶稀释至100mL。静置后过滤于棕色瓶中，贮存于冰箱内备用。1%酚酞乙醇溶液；砷标准溶液：称取于硫酸干燥器中干燥至恒重的三氧化二砷（AsQ）），溶于5mL20%氢氧化钠溶液中。溶解后，加入25ml1mol/1硫酸，移入1L2容量瓶中，加新煮沸冷却的水稀释至刻度。此溶液相当于砷。临用前取，加1mL1mol/L硫酸于100mL容量瓶中，加新煮沸冷却的水稀释至刻度。此溶液相当于Ug砷。.仪器分光光度计；测砷装置（见图1）；图1（100〜150）ml锥形瓶（A）（19号标准口）；导气管（B）：管口为19号标准口，与锥形瓶A密合时不应漏气，管尖直径（〜）mm，与吸收管C接合部为14号标准口，插入后，管尖距管C底为（1〜2）mm；吸收管（C）：管口为14号标准口，5ml刻度，高度不低于8cm。吸收管的质料应一致。过程简述.样品处理.1.干灰化法：本法用于不适合于湿法消解的样品。取样品于瓷坩蜗中，加10mL15%硝酸镁溶液，再于上面覆盖1g氧化镁粉末，混匀，浸泡4h，于低温或置水浴上蒸干，用小火加热至炭化完全，将坩蜗移至高温炉中，在550°C以下灼烧至灰化完全，冷却后取出，加适量水湿润灰分，再缓缓加入盐酸（1+1）溶液至酚酞红色褪去，然后将溶液移入50mL容量瓶中（必要时过滤），用少量水洗涤坩蜗3次，洗液并入容量瓶中，加水至刻度，混匀。每10mL样品液相当于样品。取相同量的氧化镁，硝酸镁，按上述方法做试剂空白试验。.测定.1.限量试验.•吸取一定量的样品液和砷的限量标准液（含砷量不低于5ug），分别置于砷发生瓶A中，补加硫酸至总量为5mL，加水至50mL。..于上述各瓶中加入3ml15%碘化钾溶液，混匀，放置5min。分别加入1ml40%氯化亚锡溶液，混匀，再放置15min。各加入5g无砷金属锌，立即塞上装有乙酸铅棉花的导气管B，并使管B的尖端插入盛有吸收液A或吸收液B的吸收管C中，室温反应1h，取下吸收管C,用三氯甲烷（吸收液A）或毗啶（吸收液B）将吸收液体积补充到。..经目视比色或用1cm比色杯，于515nm波长（吸收液A）或540nm波长（吸收液B）处，测吸收液的吸光度，样品液的色度或吸光度不得超过砷的限量标准吸收液的色度或吸光度。若样品经处理，则砷的限量标准也须同法处理。.2.定量测定..吸取25mL（或适量）样品液及同量的试剂空白液，分别置于砷发生瓶A中，补加硫酸至总量为5mL，加水至50mL，混匀。..吸取，，，，，砷标准溶液（相当于Ug砷），分别置于砷发生瓶A中，加水至40mL，再加10mL硫酸（1+1）溶液，混匀。..向样品液、试剂空白液及砷标准液中各加入3mL15%碘化钾溶液，混匀，放置5min，再分别加入1mL40%氯化亚锡溶液，混匀，放置15min后，各加入5g无砷金属锌，立即塞上装有乙酸铅棉花的导气管B，并使管B的尖端插入盛有吸收液A或吸收液B的吸收管C中，室温反应1h，取下吸收管C，用三氯甲烷（吸收液A）或毗啶（吸收液B）将吸收液体积补充到。用1cm比色杯，于515nm波长（吸收液A）或540nm波长（吸收液B）处，用零管调节仪器零点，测吸光度，绘制标准曲线比较。若样品经处理，砷的标准系列也须同法处理，以对标准曲线进行校正。结果计算C= （「0）X1000mXX1000式中：C一样品中砷的含量，mgkg或mgl；A一样品液中砷的含量，ug；A1一试剂空白液中砷的含量，ug；…2M—样品质量（体积），g（mL）；V一样品处理后定容体积，mL；V：一测定时所取样品液体积，mL。方法二砷斑法2原理概要在碘化钾和氯化亚锡存在下，将样品液中的高价砷还原为三价砷，三价砷与锌粒和酸产生的新生态氢生成砷化氢气体，通过乙酸铅棉花除去硫化氢干扰，再与漠化汞试纸生成黄色至橙色的色斑，与标准砷斑比较作限量试验。主要试剂与仪器.主要试剂同二乙氨基二硫代甲酸银比色法漠化汞试纸：将剪成直径2cm的圆形滤纸片，在5%漠化汞乙醇溶液中浸渍1h以上，保存于冰箱中，临用前取出置暗处阴干备用。.仪器测砷装置：见图2100ml锥形瓶。橡皮塞：中间有一孔。玻璃测砷管：全长18cm，上粗下细，自管口向下至14cm一段的内径约为，自此以下逐渐狭细，末端内径约为（1〜3）mm,近末端1cm处有一孔，直径2mm,狭细部分紧密插入橡皮塞中，使下部伸出至小孔恰在橡皮塞下面。上部较粗部分装入乙酸铅棉花，长（5〜6）cm,上端至管口处至少3cm，测砷管顶端为圆形扁平的管口，上面磨平，下面两侧各有一钩，为固定玻璃帽用。图21—锥形瓶；2—橡皮塞；3—测砷管；4—管口；5—玻璃帽玻璃帽：下面磨平，上面有弯月形凹槽，中央有圆孔，直径。使用时将玻璃帽盖在测砷管的管口，使圆孔互相吻合，中间夹一漠化汞试纸，用橡皮圈或其他适宜的方法将玻璃帽与测砷管固定。过程简述吸取一定量的样品液和砷的限量标准液（含砷或ug），分别置于锥形瓶中，加5mL盐酸（样品液中如含硫酸或盐酸，则要减去样品液中所含酸的毫升数），加水至30mL，再加5mL1