课题3血红蛋白的提取和分离

课时训练(2015临沂高二检测)凝胶色谱法分离蛋白质时，凝胶的种类很多，但其用的共通点是( )改变蛋白质分子经过凝胶时的路径吸附一部分蛋白质，从而影响蛋白质分子的移动速度将酶或细胞固定在凝胶中与蛋白质分子进行化学反映，从而影响其移动速度【解析】选。凝胶既不会吸附蛋白质，也不会与蛋白质发生反映。凝胶色谱法分离白质的实验利用凝胶颗粒中的多孔通道，改变了蛋白质分子经过凝胶时的路径，使相关于分子质量不同的蛋白质得以分离。故、项不正确，A项正确将酶或细胞固定的凝胶用于固定化酶或固定化细胞， C项不正确。(2015吉林高二检测下列各项中，哪项不是电泳使样本中各分子分离的原因( )B.分子的大小C.分子的形状 分子的变性温度【解析】选B子的大小和形状不同都会影响带电粒子在电场中的迁移速度，与分子变性温度无关。下列各项中，一般不影响凝胶色谱法分离蛋白质的分离度的是( )B.层析柱的直径C.缓冲溶液 样本的分布【解析】选B。分离度取决于柱高，为分离不同组分，凝胶柱必需有适宜的高度;pH分离度。只有层析柱的直径一般不会影响分离度(2015分析正确的是洗涤红细胞的目的是去除血浆中的葡萄糖、无机盐为了增加透析效果，透析进程中可更换磷酸缓冲液为了保证血红蛋白的结构正常，洗涤红细胞要用磷酸缓冲液洗涤时离心速渡过小，时间过短，白细胞等会沉淀，达不到分离的效果A效果，B不会影响血红蛋白，因此用C项不正确。洗涤时的离心要低速短时间，速渡过快，时间过长，会导致白细胞等一起沉淀，达不到分离效果， 项不正确。【填补训练】下列关于血红蛋白提取和分离实验中操作步骤的描述，正确的是()红细胞的洗涤：加入蒸馏水，缓慢搅拌，低速短时间离心血红蛋白的释放：加入生理盐水和甲苯，置于磁力搅拌器上充分搅拌分离血红蛋白：将搅拌好的混合液离心、过滤后，用分液漏斗分离透析：将血红蛋白溶液装入透析袋，然后置于pH的磷酸缓冲液中透析5h【解析】选G关于红细胞进行洗涤时，应该加入生理盐水，防止细胞破裂；进行血红蛋白的释放时，需要加入蒸馏水和甲苯，以使红细胞吸水涨破，释放血红pH。是利用凝胶把分子大小不同的物质分离开的一种方法在洗脱进程中，大分子不能进入凝胶内部而最先流出，而小分子可以进入凝流速缓慢，以致最后流出凝胶内部有很微细的多孔网状结构，其孔隙大小与被分离的物质分子的大小无相应关系脱出来【解题关键】解答本题时应理解两点：凝胶色谱法分离蛋白质的原理：根据相关于分子质量大小关于蛋白质进行分离。操作进程：凝胶颗粒只会暂时滞留待分离物质，最终都会被洗脱。洗脱时，先流出，小分子最后流出。【解析】选G凝胶色谱法是根据相关于分子质量大小分离蛋白质的有效方法。凝胶是由多糖类化合物构成的，其内部有很微细的多孔网状结构，小分子蛋白质可以进入凝胶内部，路程较长，移动速度慢，而相关于分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部，路程较短，移动速度快，因此在洗脱进程中最先分离。一般来说，凝胶关于待分离的物质没有吸附作用，不会使待分离物质停滞运动，最终一切要分离的物质都应该被洗脱出来。选用不同种凝胶，其网状结构不同，孔隙大小不同，可分离的分子大小不同，二者是相关的，故C项不正确。下列关于凝胶色谱法分离血红蛋白实验中样本的加入和洗脱的叙述中，不正确的是（ ）胶面的下面1透析后的样本加到色谱柱的顶端，不要损坏凝胶面加样后，打开下端出口，使样本渗入凝胶床内等样本完全进入凝胶层后，关闭下端出口。加样前，应打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到与凝胶面平齐，关闭出口，而不应使缓冲液下降到凝胶面的下面， 项不正确。加样时不要损坏凝胶面，B项正确。加样后，打开下端出口，使样本渗入凝胶床内，C项正确。等样本完全进入凝胶层后，关闭下端出口，再加缓冲液，项正确。5种蛋白质分子，分子大小、电荷的性质和数量情况如图所示，下列有关蛋白质分离的叙述不正确的是（多选）（）J丙J丙••乙甲•相关于分子质量丁戊L 1111■210若用凝胶色谱法分离样本中的蛋白质，则分子甲移动速度最快12haab洗脱体积形成的电泳带相距最远【解题关键】掌握不同蛋白质分子在离心进程、凝胶色谱法分离进程、透析过程、SS聚丙烯酰胺凝胶电泳进程中相互分离的原理都是蛋白质的相关于分子质量不同，与蛋白质本身携带的电荷无关。【解析】选BC。分子丙的相关于分子质量大于戊，所以，在离心时戊存在于沉淀中丙也一定在沉淀中，A项正确。用凝胶色谱法分离蛋白质时，甲相关于分子质量最小，容易进入凝胶内部，则移动速度最慢， B项错误。分子丙的相关于分子质量大于乙，则丙保留在袋内，乙可能在袋外也可能在袋内，C项错误。带相距最远，项错误。【大题提升练】(2015济宁高二检测于工业生产。下图甲为凝胶色谱柱分离蛋白质的示意图，图乙为几种被分离蛋白质相关于分子质量大小与洗脱液的洗脱体积的关系，请据图分析回答：V 0 相关于分子质量甲 乙 甲a、b均为蛋白质分子，其中先从层析柱中洗脱出来的是 原因是 。位置相当于多孔板的结构可由替代。装填凝胶色谱柱时，色谱柱内不能有气泡存在，原因是 若图乙被分离的蛋白质混合液中含有肌红蛋白16、血清蛋白(相关于分子质量为68500)、牛乳球蛋白(相关于分子质量为35000)、牛胰岛素相关于分子质量为5，则图乙中AB、C代表的物质依次是 【解析】1)入凝胶内部通道，只能在凝胶外部移动，路程短，速度快，易洗脱；相关于分子质量较小的蛋白质则进入凝胶内部通道，路程长，速度慢。⑵凝胶色谱柱的制作：底部橡皮塞的凹穴上覆盖尼龙网和 目的尼龙纱，当于多孔板。(3) 凝胶色谱柱的装填：装填时尽快紧密，不能有气泡存在，因为气泡会搅乱洗蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。⑷据图可知，四种蛋白质的相关于分子质量逐渐增大，因此图乙中 AB、C、代表的物质依次是牛胰岛素、肌红蛋白、牛乳球蛋白、血清蛋白。答案：(1)aa相关于分子质量较大，无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快⑵尼龙网和100目的尼龙纱气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果牛胰岛素、肌红蛋白、牛乳球蛋白、血清蛋白【互动探究】色谱柱？提示：凝胶色谱操作进程中，不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的情况，这种情况下色谱柱也需要重新装填。洗脱液能不能用清水代替？并且说明原因。提示：不能。洗脱液是磷酸缓冲液，可以防止溶液 pH剧烈变化关于蛋白质活性影响，清水则没有此作用，因此不能换成清水。凝胶色谱技术由于设备简单，操作方便，不需要有机溶剂，关于高分子物质有很高的分离效果，目前已被广泛应用于多个领域，请回答问题：若选用贝S“G‘表示 。经过凝胶色谱法可将从红细胞中分离出的血红蛋白样本进一步 。关于血红蛋白提取和分离的相关操作，回答下列问题：①实验时要关于采集到的血液中的红细胞进行洗涤，洗涤的目的②在

的作用下，红细胞会破裂释放出血红蛋白。③将释放出的血红蛋白收集到透析袋中透析，这是样本的 ，而透析的目的是 。④实验最后经过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行 。 凝胶色谱操作最后观察到的红色区带歪曲、散乱、变宽，这与 有关。【解析】本题考查血红蛋白的提取和分离。(1)凝胶中“ G'表示凝胶的交联程度、膨胀程度和分离范围，10010g。2)血红蛋白的提取和分离实验，原理是依据蛋白质的各种特性分离蛋白质。实验步骤分为样本处理、粗分离、纯化和纯度鉴定四步。（3）若最终红色区带歪曲、散乱、变宽，分离效果差，这与色谱柱装填有关。答案：（1）凝胶的交联程度、膨胀程度和分离范围纯化①去除杂蛋白②蒸馏水和甲苯③粗分离去除相关于分子质量较小的杂质④度鉴定色谱柱装填赤峰高二检测）电泳技术是在外电场作用下，利用分子携带的净电荷不同，把待测分子的混合物放在一定的介质（如琼脂糖凝胶）中进行分离和分析的实验技术，利用它可分离氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等物质。如图是电泳装置和电泳结果，请据图分析回答:待测混合物（〔｝负极、（：）正极缓和液 琼脂糖凝胶E1,电泳前图工某氨基酸混合物电泳结果

）负极（+）正扱2.中 分子会向着与其所带电荷

在电泳进程中，带电的电极移动。--8t-|图3是把含有21个氨基酸的多肽进行水解，得到的氨基酸混合物进行电的结果，由图可推知该多肽由 种氨基酸构成。电泳进程中分子的迁移速率除与本身所带净电荷的多少有关外，你认为影响电泳进程中分子迁移速率的因素还囊