抗体筛选和鉴定操作规程

1、抗体筛选和鉴定操作规程(一) 抗体筛选1. 抗体筛选的目的血型抗体是体内免疫系统所产生的针对血型抗原发生特异性反应的一类免疫球蛋白类物质。人体血清内存在的抗体有5种类型：IgG.、 IgM、IgA.、IgD和IgE，其中IgG和IgM是最重要的2种抗体。红细胞血型抗体可以分为：完全抗体：这些抗体能够在盐水介质中凝集相应的红细胞，所以又称为盐水抗体，它们主要是分子量较大的IgM；不完全抗体：这类抗体主要是分子量较小的IgG，虽然能够结合红细胞上的抗原，但在盐水介质中不能使红细胞凝集。有临床意义的血型抗体会导致溶血性输血反应，破坏输入的不配合的红细胞或缩短其寿命，产生溶血性输血反应，轻则影响治疗效

2、果，重则危及患者生命；此外，对孕妇而言，抗体会引起新生儿溶血病，影响新生儿脏器的发育，并使其智力发育受到伤害，严重者则会危及新生儿的生命安全。因此，抗体筛检是很必要而且必需的。抗体筛检试验(antibody screening tests)主要筛查与红细胞反应的血型同种抗体。对受血者的血清和血浆应进行常规的抗体筛选试验，以发现有临床意义的不规则的血型同种抗体。所谓不规则抗体是指抗A和抗B以外的血型抗体。抗体筛选试验的原则是让受检者的血清与筛选红细胞反应，以发现在37有活性的抗体。患者接受输血、妇女妊娠都会刺激机体产生抗体。抗体筛检试验能有效保证临床输血安全，避免新生儿溶血症的发生。2. 抗体筛

3、选的方法抗体筛选试验可在交叉配血试验之前进行或一起进行，这样有利于对患者抗体的早期确认及鉴定临床上有意义的抗体，避免一些可能的异常情况而造成病情的延误。抗体筛选和鉴定使用的方法有盐水法、白蛋白介质法、低离子强度介质法(Liss)、聚凝胺法(polybrene)、凝胶法、酶技术、抗球蛋白试验等，可按抗体的血清学行为和试验的具体条件选择，但必须进行抗球蛋白试验。抗体筛选试验不一定能检出所有有临床意义的抗体，一些抗低频率抗原的抗体或有剂量效应的抗体可能被漏检，这时需安排抗原更完全和特异性更强的筛选细胞进行试验，或用敏感度更高的技术进行检查。一旦抗体被检出，应进行抗体鉴定试验，以确定其特异性。(二)

4、抗体鉴定1. 抗体鉴定的目的抗体鉴定（antibody identification）是免疫血液学的基础。抗体鉴定可以作为抗体临床重要性判定的指南，并为选择合适的血液输注提供信息。在某些情况下，抗体鉴定可能是一个困难和费时的过程，因而可能延误患者的治疗。当遇到抗体筛选阳性时，有多种途径可以进一步鉴定抗体，每个实验室都应该有自己的操怍纲要。重要的是要用系统的方法来确定抗 体特异性和排除存在其他抗体的可能。2. 抗体鉴定试验的类型抗体鉴定试验包含鉴定致敏在红细胞膜上的抗体和游离在血清或血浆中的抗体：自 身细胞检查：观察患者（受者）的血清与患者（受者）自身细胞的反应情况，确定血清内是否有自身抗体或自

5、身抗体和同种抗体两者同时存在。使用试剂细胞中的谱细胞：应用各种抗体检查技术检测患者的血清，确定其抗体的特异性。试剂谱细胞一般是由816个人的已知血型的O型红细胞配套组成，具有各种不同的抗原成分，根据谱细胞的反应格局一般可以鉴定常见的抗体。选择不同的谱细胞，可以鉴定不同特异性的抗体。吸收放散试验的应 用：当患者体内的同种抗体有两种或两种以上时，可采用吸收放散试验。为了保证抗体鉴定 的正确性，要求每个抗原有足够的阳性和阴性细胞，从而使血清学检查的结果表现出客观的 规律而不是偶然的结果。一般用Fisher的正确估计概率的方法来计算各种阴性和阳性结合的可能性，P（可能性）值为0.05被认为是统计学上有

6、效的可以接受的值。3. 抗体鉴定的方法（1）红细胞表面的不完全抗体的鉴定1）对于黏附在红细胞表面的不完全抗体，需要使用放散技术(elution test)，使抗体从红细胞上解离下来进行鉴定。常用的放散方法有热放散法、乙醚放散法、磷酸氯喹法和冷酸放散法。2）操作方法：选择合适的放散方法，将抗体从红细胞膜上解离下来；选择合适的谱细胞，与放散液混匀，按照抗体筛检所介绍的方法，选择合适的方法进行反应；将凝集结果与谱细胞格局图进行比较，确定抗体的种类。（2）游离于血清或血浆中的不完全抗体的鉴定1）游离在血清内的不完全抗体的鉴定，其方法与抗体筛检类似，关键是试剂谱细胞的选择。2）操作方法：选择合适的谱细胞，与待检血清混匀，按照抗体筛检所介绍的方法选择合适的方法进行反应；将凝集结果与谱细胞格局图表5-3进行比较，确定抗体的种类。表5-3红细胞谱细胞抗原分布格局序号Rh-hrKiddMNSsDuffyDiegoKellLewisPDCEcejkajkbMNSsFyaFybDiaDibKkLeaLebP11+00+0+00+0+0+2+0+0+0+0/0003+00+0+/0/+/+4+00+0+00/0/0+5+0+0+0+00+0+0+6+00+0+0+0+00+0+0+07000+00+0/