中药安全性质量控制技术研究及应用实例

1、第4章 中药安全性质量控制技术研究及应用实例关于中药药有毒、无毒的的现代认认识一、毒的的涵义在本草中中是一个个广义的的概念，有毒无无毒是指指药物对对人体有有无毒性性而言。周礼谓：“聚聚毒药以以共医事事”，这这里的毒毒药为中中药的总总称。明代张景景岳认为为：“药药以治病病，因毒毒为能，所谓毒毒者，因因气味之之偏也”。中药毒性性的含义义：毒性即为为偏性（药性）以偏纠偏偏是中药药治疗疾疾病的基基本原则则用之得当当即可发发挥治疗疗作用用之不当当则可毒毒害机体体 两种误解解正确理解解中药安全全无毒，无不良良反应中药有毒毒，全面面禁用中药西药药都有不不良反应应利大于弊弊者，应应用弊大于利利者，禁禁用二、中

2、中药安全全性的观观点国家食品品药品监监督管理理局公布布2009年全国不不良反应应/事件报告告638996例。1、不良反反应病例例中：化学药占占86.7%，涉及3100多个品种种。中药占13.3%，涉及2600多个品种种化学药不不良反应应中，注注射剂占占61%。中药不良良反应中中，注射射剂占52%。2、说明：化学药（西药）的不良良反应超超过中药药。注射剂的的不良反反应超过过口服药药西药注射射剂的不不良反应应超过中中药注射射剂例1反应停不良反应应近10000例（海豹豹儿）死亡近5000例三、举例例说明例2 2007年美国FDA对十大药药品发出出最严重重的“黑框警告告”药 品销售额(美元)主要不良反

3、应处 理抗抑郁药，包括舍迪林、氟优沙明等2006年206亿服药后出现自杀倾向黑框警告红细胞生成类药品2006年66亿中风、心肌梗塞、死亡黑框警告再普林2006年44亿代谢障碍、肥胖2006年赔偿7亿美元，2007年又赔偿5亿美元文迪雅2006年34亿心脏病发作及死亡率增高黑框警告，并有两药厂吊销此药生产艾可拓2006年30.5亿增加心力衰竭风险黑框警告另有5种畅销药被黑框警告，或被召回或停产小柴胡汤汤“肺炎”马兜铃酸酸“肾衰”鱼腥草注注射剂“过敏性休休克”双黄连注注射液“中毒死亡亡”活血破血血中药脏脏器出血血临床严重重毒性报报道频频频中药不良良反应事事件关于中药药毒性的的热点问问题“马兜铃”的

4、震撼撼“小柴胡汤汤”事件的的反思“鱼腥草注注射液”的风波波“马兜铃”的震撼撼1993年比利时时学者首首先发现现2例女性服服中草药药减肥治治疗后，出现进进行性肾肾间质纤纤维化，经调查查发现该该减肥药药中加入入了防己己，患者者服用后后血肌酐酐于3个月内升升高一倍倍，肾活活检显示示广泛间间质纤维维化。经药物成成分分析析发现，减肥胶胶囊中含含有马兜兜铃酸。至1998年在比利利时有100人患马兜兜铃酸肾肾病。“马兜铃”的震撼撼比利时学学者报告告了服用用含有马马兜铃酸酸的中草草药致急急进性肾肾功能衰衰竭，并并称这种种肾脏损损害为“中草药药肾病(ChineseHerb Nephropathy,CHN)”。此

5、后，有有关马兜兜铃酸引引起肾脏脏损害的的问题，引起了了国内外外学者的的广泛关关注并陆陆续发表表有关研研究报告告。“马兜铃”的震撼撼国内学者者认为，不宜笼笼统地将将马兜铃铃类植物物引起的的肾脏损损害称作作“中草草药肾病病”。马兜铃酸酸(aristolochicacid，AA)是引起CHN的一类药药物的主主要毒性性成分之之一，故故称为“马兜铃铃酸肾病病”(AAN)较为合适适，目前国外外学者也也应用了了这一病病名。“马兜铃”的连锁锁反应中药马兜兜铃是马马兜铃科科多年生生植物马马兜铃的的成熟果果实。苦、微辛辛，寒，归肺、大肠经经。清肺化痰痰，止咳咳平喘。用量不宜宜过大，以免引引起呕吐吐。中药马兜兜铃“

6、马兜铃”的连锁锁反应AA是马兜铃铃科马兜兜铃属植植物中所所含的共共同成分分，含有有或可能能含有马马兜铃酸酸的常用用中药品品种为马兜铃、天仙藤藤、青木木香、广广防己、关木通通、寻骨骨风、朱朱砂莲、细辛等。“马兜铃”的连锁锁反应含马兜铃铃酸的常常见中成成药有：龙胆泻肝肝丸、耳耳聋丸、八正丸丸、纯阳阳正气丸丸、大黄黄清胃丸丸、当归归四逆丸丸、导赤赤散、甘甘露消毒毒丹、排排石颗粒粒、跌打打丸、妇妇科分清清丸、冠冠心苏合合丸、苏苏合丸、辛荑丸丸、十香香返生丸丸、济生生桔核丸丸、止嗽嗽化痰丸丸等。“马兜铃”的连锁锁反应我国发生生了龙胆胆泻肝丸丸的“马马兜铃酸酸事件”原因是用用关木通通替代木木通2003年2

7、月28日国家药药品监管管局发出出关于加强强对龙胆胆泻肝丸丸监督管管理的通通知木通为木通科科植物三三叶木通通Akebiatrifoliata(Thunb.)Koidz.的木质茎茎藤。功效：泻泻火行水水通血脉。关木通为马兜铃铃科植物物东北马马兜铃AristolochiamandshuriensisKom.的茎藤。功效：清清心火，利小便便，通经经下乳。“马兜铃”的连锁锁反应2002年6月，美国国食品药药品管理理局宣布布禁售70多种含马马兜铃酸酸的中成成药。香港卫生生署发言言人宣布布：将从从2004年6月1日起，停停止进口口和销售售含有马马兜铃酸酸的中药药材及其其制剂。欧盟、澳澳洲等国国也禁止止含马兜

8、兜铃的中中药材及及中成药药进口。“小柴胡汤汤”事件件“小柴胡汤汤”事件件小柴胡汤汤出自张张仲景伤寒论组方：柴柴胡、人人参、黄黄芩、大大枣、半半夏、生姜姜、甘草草，共七七味药功效：疏疏畅气机机、调和和胃肠、和解表表里主治：伤伤寒少阳阳证。往往来寒热热、胸胁胁苦满，苔苔白，脉脉弦“小柴胡汤汤”事件件常用于感感冒、慢慢性肝炎炎、肝硬硬化、急急慢慢性胆胆囊炎、胆结石石、急性性胰腺炎炎、胸膜膜炎、淋淋巴腺炎炎、胃炎炎、胃溃溃疡等国内外研研究证明明，小柴柴胡汤对对肝癌、肺癌、结肠癌癌等肿瘤瘤，预防防其恶性性转化具具有一定定作用“小柴胡汤汤”曾风风靡日本本20世纪70年代初期期，日本本的津村村顺天堂堂制成了

9、了小柴胡胡汤颗粒粒制剂。1976年，日本本京畿大大学东洋洋医学研研究所主主任有地地滋教授授通过年研究究，在和和汉药研研讨会上上发表了了“津村村小柴胡胡汤颗粒粒对慢性性肝炎有有治疗效效果”的的报告，在日本本引起不不同凡响响。“小柴胡汤汤”曾风风靡日本本此后有21家汉方厂厂家加入入生产开开发小柴柴胡汤行行列，对对小柴胡胡汤进行行多方面面的研究究，呈现现了空前前的小柴柴胡汤热热。20世纪70-90年代小柴胡汤汤在日本本是使用用最多的的药物，广泛地地应用于于治疗慢慢性肝炎炎。估计计每年服服用小柴柴胡汤者者有100万人，消消费金额额约90亿130亿日元。“小柴胡汤汤”事件件1989年12月日本胸部部疾患

10、学学会杂志志首次报道道了小柴柴胡汤引引起药物物性肺炎炎例，之后其其他报刊刊也陆续续刊登了了小柴胡胡汤引起起肝功损损伤之类类的报道道，对间间质性肺肺炎尤为为重视。至1999年底，因因服小柴柴胡汤造造成间质质性肺炎炎已升为为188例，死亡亡22例。“小柴胡汤汤”事件件1996年3月，日本本厚生省省在“紧紧急安全全情报”中发出出了“关关于小柴柴胡汤严严重的副副作用间质性肺肺炎的警警告”。日本厚生生省2000年1月14日发出“医药品品医疗用用具等安安全性情情报”通通令：全全面禁止止肝炎、肝硬化化、肝癌癌患者使使用小柴柴胡汤。“小柴胡汤汤”事件件的反思思药方无错错辨辨证有误误。滥用小柴柴胡汤是是造成悲悲

11、剧的主主因。中医治病病强调辨辨证论治治。不根据症症状反应应使用小小柴胡汤汤，又长长期服用用一个方方药，脱脱离了中中医辨证证论治理理论。“小柴胡汤汤”事件件的反思思中药必须须在中医医理论指指导下应应用。日本的“小柴胡胡汤副作作用死亡亡事件”实质，是违反反了中医医辨证论论治的原原则，违违反了中中医治病病必辨方方证的原原则。“鱼腥草注注射液”风波目前上市市的含鱼鱼腥草的的注射剂剂鱼腥草注注射液新鱼腥草草素钠氯氯化钠注注射液新鱼腥草草素钠注注射液注射用新新鱼腥草草素钠复方蒲公公英注射射液炎毒清注注射液鱼金注射射液目前在我我国有100多家生产企业业生产这这类产品品临床使用用主要是是抗感染染治疗鱼腥草注注

12、射液不不良反应应鱼腥草注注射液等等7个注射剂剂在临床床应用中中出现了了过敏性性休克、全身过过敏反应应、胸闷闷、心急急、呼吸吸困难和和重症药药疹等严严重不良良反应，甚至有有引起死死亡病例例报告。鱼腥草注注射液不不良反应应从目前收收到的病病例报告告和文献献资料分分析表表明，含含鱼腥草草的注射射剂与其其所引起起的过敏敏性不良良反应，存在较较明确的的关联性性。过敏性休休克的病病例报告告来源和和涉及企企业、批批号无明明显集中中现象，说明过过敏反应应可能是是该类品品种的共共性问题题。2006年6月6日，国家家食品药药品监管管局发出出的关于暂停停使用和和审批鱼鱼腥草注注射液等等7个注射剂剂的通告告2006年

13、9月：国家家药监局局发出关于肌注注用鱼腥腥草注射射液等注注射剂恢恢复使用用申报资资料和程程序的通通知（急急件）（国食药药监办2006461号）常见中药药中毒原原因1.剂量过大大或长期期持续服服用。2.用法不当当，没有有按中药药的正确确用法使使用。3.炮制不充充分，有有毒成分分含量过过高。4.患者不遵遵医嘱，自行服服药。5.中药品种种混乱、有毒药药物管理理不善。四、中药药中的有有害物质质（一）外外源性污污染：包包括重金金属和农农药残留留；（二）内内源性毒毒性物质质：一般般是指中中药自身身的一些些毒性次次生代谢谢产物。（一）中中药材中中重金属属元素含含量测定定技术中国药典典2010年版（一一部）要

14、要求，在在中药中中通常监监控的有有害重金金属主要要包括铅铅、镉、汞、铜铜、砷等等。1.前处理方方法1.1湿法消解解所谓湿法法，是指指借助化化学反应应使固体体试样转转化为溶溶液的分分解方法法。通常常是采用用单一或或混合强强酸，在在适当的的温度下下，将样样品中的的有机成成分氧化化破坏，使金属属化合物物转变为为离子状状态。1.2干法消解解（灰化化法）该法是通通过高温温方法将将试样中中的重金金属元素素游离。一般是是将样品品先于小小火炭化化至无烟烟，再移移入马弗弗炉中高高温灰化化完全，冷却，用稀酸酸溶解灰灰分，定定量转移移至量瓶瓶中。1.3压力消解解罐消解解法（高高压密封封溶样法法）样品仍采采用强酸酸消

15、解，与湿法法消解不不同的是是样品要要置于聚四氟乙乙烯罐内密封封，置于于烘箱内内在一定定温度下下保持一一定时间间。1.4微波消解解法将样品和和相应的的试剂放放置于高高温，高高压密闭闭样品罐罐或敞口口容器中中。利用用微波加加热容器器中的消消解液，使各样样品快速速溶解的的湿法消消化。2.测定方法法2.1原子吸收收光谱法法（AAS）该法已被被中国药典典2010年版收载载为测定定中药材材中重金金属的法法定方法法之一。根据各各种元素素的性质质及原子子化的方方法不同同，该法法又可分分为火焰焰原子化化法、非非火焰原原子化法法和低温温原子化化法。（1）火焰原原子化法法：该法是利利用化学学火焰使使物质分分解并原原

16、子化的的方法。可用于于铜、铁铁、锌、锰、钙钙等常量量元素的的检测，缺点是是原子化化效率不不高，火火焰中中自由原原子浓度度很低，灵敏度度低。（2）非火焰焰原子化化法该法是利利用石墨管高温下使使样品原原子化通通过炉内内光路产产生吸收收 的原原理来测测定的。与火焰原原子化法法相比，石墨炉炉原子化化法样品品消耗少少，特别别适用于于分析非非常少量量的试样样，灵敏敏度高；缺点是是石墨管管昂贵，不能同同时测定定多个元元素。该该法可用用于除汞以外外的重金属属元素测测定。（3）低温原原子化法法该法是利利用化学学反应方方法预处处理试样样，在室室温至摄摄氏几百百度的条条件下使使其原子子化，因因此又称称为化学学原子化

17、化法。冷原子子化法：该法专专用于汞元素的测定。将样品消消解后还还原生成成汞，在在汞蒸气气发生器器中，用用载气将将汞蒸气气吹出，通过石石英吸收收池的汞汞蒸气对对汞空心心阴极灯灯的辐射射产生吸吸收，从从而进行行定量分分析。氢化物物原子化化法：一一般用于于铅、砷砷、汞等等元素的的测定。将气态分分析物引引入石英英炉内在在较低温温度下实实现原子子化的一一种方法法。它主主要是与与蒸气发发生法配配合使用用。2.2原子荧光光光谱法法（AFS）原子荧光光光谱是介介于原子发射射光谱和原子吸收收光谱之间的光光谱分析析技术。它的基基本原理理是基态原子子（一般蒸蒸汽状态态）吸收收合适的的特定频频率的辐射而被激发发至高能

18、能态，而而后激发发过程中中以光辐射的形式发发射出特特征波长的荧光，通过测测定原子子荧光的的强度即即可求得得样品中中该待测测元素的的含量。2.3电感耦合合等离子子体原子子发射光光谱法（ICP-AES）本法为中国药典典2010年版附录录新收载载的方法法。基本原理理是样品品由载气气引入雾雾化系统统进行雾雾化后，以气溶溶胶形式式进入等等离子体体的中心心通道，在高温温和惰性性气氛中中被充分分蒸发、原子化化、电离离和激发发，使所所含元素素发射各各自的特特征谱线线。根据据各元素素特征谱谱线的存存在与否否，鉴别别样品中中是否含含有某种种元素（定性分析析）；由特特征谱线线的强度度测定样样品中相相应元素素的含量量

19、（定量分析析）。2.4电感耦合合等离子子体质谱谱法（ICP-MS）与ICP-AES相比，该该法最大大的优点点是检出出限极低低，达到到了pg.ml-1级的水平平。其次次分析精精密度高高、分析析速度快快、可同同时测定定含量差差别较大大的各组组分，可可用于绝绝大多数数重金属属元素的的定性分分析和定定量分析析，同时时进行多种元素素及同位位素的测定，是目前前痕量元元素分析析领域中中最先进进的方法法。2.5其他方法法（1）比色法法：主要要用于重金属总总量和总总砷的测定。（2）紫外分分光光度度法：该该法是利利用重金金属元素素与试剂剂反应后后显色，在紫外外光下有有吸收的的原理来来测定重重金属的的含量。多用于于

20、铅、汞汞的测定定。（3）高效液液相色谱谱法（4）极谱法法（5）免疫学学方法（6）激光诱诱导击穿穿光谱法法第二节中中药药中农药药残留测测定技术术一.前处理技技术中药材的的提取与与净化：目的是是将中药药材中残残留的微微量农药药残留物物提取出出来，又又不能引引入新的的溶剂污污染。实实际上是是分离与与净化技技术的综综合应用用。1.超临界流流体萃取取技术（SFE）超临界流流体，是是指温度度和压力力处于临临界温度度和临界界压力之之上的流流体。常常用的萃萃取剂是是二氧化化碳，适适宜非极性和和极性较较小的物物质的提取。若要提提取极性性大的成成分，可可以加入入适宜的的夹带剂（如甲醇醇、乙醇醇和水等等）。2.固相

21、萃取取（SPE）和固相相微萃取取技术（SPME）固相萃取取：是利用用固体吸吸附剂将将液体样样品中的的目标化化合物吸吸附，使使其与样样品的基基体和干干扰化合合物分离离，然后后再用洗洗脱液洗洗脱或加加热解吸吸附，达达到分离离和富集集目标化化合物的的目的。固相微萃萃取法：根据吸吸附-解吸原理理，在进进样器的的针头部部分涂一一层固定定液或键键合一层层固定相相，直接接将其插插入液体体样品或或样品的的顶空，萃取、浓缩有有机化合合物后，将进样样器直接接插入GC进样口加加热，使使被测物物质进入入分析器器进行测测定。主主要和气气相色谱谱以及液液相色谱谱联用。3.加速溶剂剂萃取（ASE）加速溶剂剂萃取是是在较高高

22、的温度度（50200）和压力力（10003000psi或10.320.6MPa）下用溶剂萃取取固体或半半固体样样品的新新颖样品品前处理理方法。优点：有机溶溶剂用量量少，10g样品一般般仅需15ml溶剂；快快速，完完成一次次萃取全全过程的的时间一一般仅需需15min；基体影影响小；萃取效效率高，选择性性好，已已进入美美国EPA标准方法法；且使使用方便便、安全全性好，自动化化程度高高。4.凝胶渗透透色谱（GPC）凝胶渗透透色谱基基于体积积排阻的的分离机机制，是是利用有有机溶剂剂和疏水水凝胶大大分子从从样品中中提取分分离不同同分子量量干扰物物的一种种常用有有效分离离技术。被测量的的高聚物物溶液通通过

23、一根根内装不不同孔径径的色谱谱柱，柱柱中可供供分子通通行的路路径有粒粒子间的的间隙（较大）和粒子子内的通通孔（较较小）。当聚合合物溶液液流经色谱柱时，较大大的分子子被排除除在粒子的小孔之之外，只只能从粒粒子间的的间隙通通过，速速率较快快；而较较小的分分子可以以进入粒粒子中的的小孔，通过的的速率要要慢得多多。经过过一定长长度的色色谱柱，分子根根据相对分子子质量被分开，相对分分子质量量大的在在前面（即淋洗洗时间短短），相相对分子子质量小小的在后后面（即即淋洗时时间长）。二、定量量技术气相色谱谱法定义：以惰性气体体为流动相相，以固固定液或或固体吸吸附剂作作为固定定相的色色谱法称称为气相相色谱法法。以

24、固定液液作为固固定相的的色谱称称为气液色谱谱，以固体体吸附剂剂作为固固定相的的色谱称称为气固色谱谱。原理：使混合物物中各组组分在两两相间进进行分配配,其中一相相是不动动的(固定相),另一相(流动相)携带混合合物流过过此固定定相,与固定相相发生作作用,在同一推推动力下下,不同组分分在固定定相中滞滞留的时时间不同同,依次从固固定相中中流出。通常采用用的检测测器有：热导检测测器，火焰离离子化检检测器，氦离子子化检测测器，超超声波检检测器，光离子化化检测器器，电子捕捕获检测测器，火焰光度度检测器器，电化学学检测器器，质谱检测器等等。 中国药典典2010年版一部部附录收收载气相相色谱法法用来测测定农药药

25、残留量量，包含含了3中有机氯氯类、12种有机磷磷类和3种拟除虫虫菊酯类类农药。定量分析析与方法法学验证证生药中化化学成分分的定量量分析是是评价生生药质量量的重要要手段。常用：分光光度法和色色谱法。用于生药药定量分分析的方方法必须须进行验验证，以以证明采采用的含含量测定定符合相相应的分分析要求求。验证证内容：准确度度、精密密度、专专属性、检测限限、定量量限、线线性、范范围和耐耐用性。（一）准准确度指用该方方法测定定的结果果与真实实值或参参考值接接近的程程度，一般用回回收率表表示。应应在规定定的范围围内测试试。测定方法法的准确度度用已知纯纯度的对对照品做做加样回回收率测测定，加入对照照品的量量要适

26、当当对照品的的加入量量与供试试品中已已知含有有量之和和必须在在标准曲曲线线性性范围之之内。数据要求求同一浓度度供试品溶溶液，6个测定结结果或3不同浓度度分别制制备3份不同溶溶液。一般中间间浓度为为所取供供试品含含量的100%水平，80%120%（二）精精密度一般用偏偏差、标标准偏差差或相对对标准偏偏差表示示。重复性（批内精精密度）系指同一一分析人人员在同同一条件件下对同同一批样样品至少少制备6份以上或或3个不同浓浓度分别别制备3粉供试品品溶液（9份），进进行测定定，计算算相对标标准偏差差（RSD），RSD值一般要要求不大大于5。中间精密密度系指在同同一个实实验室，在不同同时间由由不同分分析人员

27、员用不同同设备测测定结果果之间的的精密度度。考察察随机变变动因素素对精密密度的影影响。3.重现性系指在不不同实验验室由不不同分析析人员测测定结果果之间的的精密度度。（三）专专属性又称为选选择性性。通常以不不含被测测成分的的供试品品作为空空白样品品进行试试验来说说明。（四）检检测限供试品中中被测成成分能被被检出的的最低浓浓度或最最小量，无需准准备定量量。（五）定定量限指供试品品中被测测成分能能被定量量测定的的最低量量，反应分析析方法是是否具备备灵敏的的定量检检测能力力。（六）线线性范围（八）耐耐用性系指在测测定条件件有小的的变动时时，测定定结果不不受影响响的承受受程度。二、定量量技术2.高效液相

28、相色谱法法（HPLC）定义：高效液液相色谱谱是以液体为流动相，采用高高压输液液系统，将具有有不同极性的单一溶剂或不同比比例的混合溶剂剂、缓冲液液等流动动相泵入入装有固固定相的的色谱柱，在柱内内各成分分被分离离后，进进入检测测器进行行检测，从而实实现对试样的分析。特点：高压、高高效、高高速。尤其适合合于高沸沸点、受受热不稳稳定易分分解的农农药残留留检测，如取代代脲、氨氨基甲酸酸酯、黄黄酰脲类类农药。 2020-01-17根据流动相相和固定定相的相相对极性性的不同同可以将将HPLC分为2种种类型，即正相和反相色谱。在在正相液液相色谱谱中，流流动相的的极性小小，通常常为非极极性的烷烷烃，固固定相的的

29、极性大大，通常常为硅胶胶、纤维维素等；在反相相液相色色谱中，流动相相的极性性大，通通常为水水一甲醇醇溶液、水一乙乙氰溶液液等，固固定相通通常为键键合的C18、C4等,极性性较弱。反相液相相色谱的的应用相相对广泛泛。2020-01-17液相色谱谱的定性依据据是保留时时间的相相对性，通常相相对误差差不能大大于5。定量量参数常常常采用用峰高、峰面积积、相对对峰高、相对峰峰面积等等。定量方法法通常采用用外标法、内标法法和面积积归一化化法。外标法可可分为外外标一点点法、标标准曲线线法等。2020-01-17l、外标一点点法(直直接比较较法)用与样品品类似的的浓度的的标准溶溶液，等等量进样样，比较较它们的

30、的峰高或或峰面积积。Cx一未知样样浓度Cd标样浓度度Ax未知样峰峰面积A标样峰面面积 2020-01-172、外标标法(工工作曲线线法)Cx一未知样样浓度Ax未知样峰峰面积Kx一直接斜斜率（1）柱切换换高效液液相色谱谱技术柱切换技技术是指指用阀来来改变流流动相走走向和流流动相系系统，从从而使洗洗脱液在在一特定定时间内内从预处处理柱进进入到分分析柱的的在线线固相分分离技术术。优点：提高色色谱系统统的分辨辨率和选选择性；使待测测组分富富集，提提高灵敏敏度；在一个个网络系系统中实实现多个个分离目目标；在线衍衍生化，提高灵灵敏度和和重现性性；在线净净化样品品，样本本不需预预处理或或预处理理大大简简化，

31、可可直接进进样分析析。（2）高效液液相色谱谱柱后衍衍生荧光光法该方法主主要是针针对氨基基甲酸酯酯类农药药。衍生化是是药物分分析中常常用的一一种分析析手段。其原理理是待测测样品与与衍生化化试剂定定量快速速反应，并加入入特定的的功能的的基团生生成符合合检测要要求的衍衍生化物物，通过过检测生生成衍生生化物的的量间接接测定待待测样品品的量。通过合适适的化学学反应,生成特殊殊衍生化化物，1.改变待测测物的色色谱保留留特性以以改善分分离度；2.改变待测测物的检检测特性性，以增增加其对对检测器器的响应（例：紫外标标记、荧荧光标记记、电化化学标记记）；3.生成稳定定的衍生生化物，改善待待测物的的不稳定定性（例

32、：-SH基团易氧氧化的问问题可通通过酰化化来解决决）。化学衍生生化的目目的:HPLC化学衍生生化分类类在线化学学衍生化化是否与HPLC系统联机机离线化学学衍生化化柱前衍生生化发生衍生生化发应应的先后后柱后衍生生化柱前衍生生化在色谱分分离前，预先将将样品制制成适当当的衍生生物，然然后再进进入色谱谱柱进行行分离检检测。优点：（1）对用作作流动相相的溶剂剂体系没没有限制制；（2）反应条条件，反反应速率率不受限限制；（3）通过选选择合适适的试剂剂以及萃萃取方法法，可以以消除许多多干扰；（4）过量溶溶剂、试试剂容易易除去；（5）转变成成合适的的衍生物物，可使使分离度度改进。缺点:（1）操作过过程繁琐琐，

33、容易易影响定定量准确确性。（2）当一个个复杂组组分样品品经过衍衍生化反反应后，有可可能产生生多种衍衍生化产产物给色色谱分离带带来困难难。柱后衍生生化将样品先先注入色色谱柱，按选定定的色谱谱条件使使样品组组分得以以分离，当各个个组分从从色谱柱柱流出后后，分别别与衍生生化试剂剂相遇，在一定定的反应应条件下下，生成成具有某某种检测测特性的的衍生化化产物再再进入检检测器。要求：（1）对流动动相的选选择更严严格，必必须考虑虑衍生化化试剂、反反应产物物的溶解解度，以以及它们们与流动相可能能发生的的副反应应；（2）由于在在高效液液相色谱谱中采用用高流速速，因此此反应速率率必须很很快（小小于30s）；（3）检测器器对衍生生化试剂剂不能有有响应。柱后衍生生流程图图如下：泵进样阀色谱柱衍生化试试剂泵反应器检测器记录仪紫外衍生生化荧光衍生生化电化学衍衍生化手性衍生生化固定化酶酶反应器器（IMER）衍生化反反应类别别：荧光衍生生反应在液相色色谱法中中，荧光光检测器器是一种种高灵敏敏度、高高选择性性的检