白花蛇舌草课件

1、 白花蛇舌草饮片蛋白提 取与蛋白组分分析 答辩人：李华清 指导老师：方羽生 白花蛇舌草饮片蛋白提 研究目的白花蛇舌草简介白花蛇舌草饮片蛋白提取与蛋白组分分析实验结果与讨论实验注意事项展望研究目的 研究目的1、探索合适的蛋白提取方法；2、通过SDS电泳获得白花蛇舌草饮片中主要的蛋白组分及分析其分子量；3、通过凝胶层析来纯化蛋白，并利用示差分析仪分析白花蛇舌草中糖肽的含量； 研究目的白花蛇舌草简介 一、白花蛇舌草的形态特征 二、白花蛇舌草的临床应用白花蛇舌草简介 一、白花蛇舌草的形态特一、白花蛇舌草的形态特征 白花蛇舌草（Hedyotis diffusa Willd）茜草科耳草属植物，一年生的带根

2、全草，其叶狭长，形似蛇舌，又开白花，以形状之，故名白花蛇舌草 。一、白花蛇舌草的形态特征 白花蛇舌草（二、白花蛇舌草的临床应用1 治疗病毒性肝炎（HBV）2 治疗癌症3 治疗关节炎、炎症和疼痛4 治疗痤疮、系统性红斑狼疮二、白花蛇舌草的临床应用1 治疗病毒性肝炎（HBV）白花蛇舌草饮片蛋白提取与蛋白组分分析 一、蛋白提取方法 二、电泳图像采集分析 三、层析后蛋白组分分析白花蛇舌草饮片蛋白提取与蛋白组分分析 一、蛋白一、蛋白提取方法蛋白提取方法丙酮沉淀法硫酸铵沉淀法提取液为：40mmol，pH为4.45或7.0的Tris溶液提取液为：（20mmol/L Tris-HCL，PH8.0，含5mmol

3、/L的EDTA、10mmol/L 的DTT 0.05mmol/L 的SDS） 一、蛋白提取方法蛋白提取方法丙酮沉淀法硫酸铵沉淀法提取液为：试剂 15% 分离胶 / mL 6% 浓缩胶 / mL 双蒸水0.52.6230% 丙烯酰胺2.50.81.0mmol/L Tris（pH8.0）1.90.510% SDS0.050.0410% AP0.050.04TEMED0.0020.004总体积 54 胶的配制试剂 15% 分离胶 / mL 6% 浓缩胶 / mL 双蒸二、电泳图像采集分析 图1 丙酮沉淀法提取蛋白的电泳图二、电泳图像采集分析 图1 丙酮沉淀法提取蛋白的电泳图 图2 硫酸铵沉淀法提取的

4、蛋白电泳图 图2 硫酸铵沉淀法提取的蛋白电泳图 三、层析后蛋白组分的分析本实验主要是用G-75的方法来纯化蛋白，还通过示差仪来检测白花蛇舌草中的糖肽含量。三、层析后蛋白组分的分析本实验主要是用G-75的方法来纯层析后蛋白电泳图谱 图4 层析后蛋白电泳图层析后蛋白电泳图谱 图4 层 实验结果与讨论 一、实验结果 二、实验结论 实验结果与讨论 一、实验结果1、不同蛋白提取方法比较蛋白提取方法蛋白电泳条带数蛋白带清晰度条带偏移度技术繁琐度丙酮沉淀法多（六条）清晰垂直简单硫酸铵沉淀法多（六条）清晰垂直复杂一、实验结果1、不同蛋白提取方法比较蛋白提取方法蛋白电泳条带2、由图3可以知道，白花蛇舌草饮片主要

5、含有四个组分的蛋白，两个糖肽峰，在相应的一号峰、二号峰和三号峰之间含有少量的糖肽。 2、由图3可以知道，白花蛇舌草饮片主要含有四个组分的蛋白，两二、实验结论1、根据图1、图2的电泳图可知，白花蛇舌草饮片主要有六条蛋白条带，其分子量约在12533100116Da之间，而且该范围的蛋白均比较清晰，说明了白花蛇舌草饮片蛋白在该分子量范围内的蛋白含量相对较高，即是白花蛇舌草饮片中含有大量的中分子量蛋白，小分子与大分子物质较少。 二、实验结论1、根据图1、图2的电泳图可知，白花蛇舌草饮片2、从电泳后的图4看出，色带条数区别不太明显，分子量在19261-131266之间，而且Sephadex G-75凝胶

6、柱分离蛋白质的范围是3000-80000，所以样品中的小分子蛋白和大分子蛋白都不能很好地分离，因此分离效果不好。 2、从电泳后的图4看出，色带条数区别不太明显，分子量在1923、本实验主要是通过冻干的方法来浓缩层析后的蛋白，但是因为G-75的缓冲液中含有0.15mol/L的NaCl，所以冻干的粉末中含有大量的盐。因此，要通过超滤来除盐，也可以达到提高浓度的目的。但是冻干容易损失蛋白，超滤也容易损失小分子蛋白。 3、本实验主要是通过冻干的方法来浓缩层析后的蛋白，但是因为G 实验中的注意事项（3）根据装柱要求一次性将凝胶均匀置入空柱内，注意保证湿态装柱，并避免柱内产生气泡和断层。（4）把柱子连到层析仪时，先运行层析仪，使连接管有液体流出，再把柱子连接到仪器上，目的是排出管子中的气泡。（5）示差仪在使用前要先排除气泡，先排样品池，然后按balance同时排样品池和参比池。（6）温度越高，G-75就越容易长菌。因此，上完样后，要先用双蒸水冲洗柱子，再用20%的乙醇冲洗和浸泡柱子。（1）胶的凝固速度与气温有关，温度越低，胶越难凝固。因此，冬天制胶需要放在烘箱中凝固，但会造成胶的一部分凝得快，另外一部分凝得比较慢，那么，跑出来的条带就会越跑越宽，或者前一天晚上配好胶，留待第二天用。（2）电极缓冲液不能加太少，否则没有电流；但是加太满会造成电流过大，使电极缓冲液变成黄色