丙型肝炎病毒核酸定量检测标准作业指导书教程文件

1、资料收集于网络，如有侵权请联系网站删除资料收集于网络，如有侵权请联系网站删除可编辑丙型肝炎病毒核酸定量检测标准作业指导书目的测，适用于丙型肝炎病毒感染的扶助诊断。范围适用于丙型肝炎病毒核酸定量检测。职责操作人员：负责标本制备检测、仪器操作、报告发送。专业组组长：负责本组耗材的请购，监督本组标本检测、仪器操作、报告发送、质控管理等各方面工作。实验室主任：负责监督和指导实验室各方面工作。原理采用荧光 扩增，并且检测荧光信号，仪器软件系统自动绘制出实时扩增曲线，根实现关于未知样本的检测。另外，本试剂盒带有内标物质，用于关于核酸提取的整个进程进行监控，减少假阴性结果的出现。样本要求适用标本类型：血清标

2、本采集2l，注入无菌的真空采血管中（未加抗凝剂，室温放置 离心5min；吸取上层血清，转移至1.5ml 灭菌离心管。标本保存和运送3 本应避免反复冻融。标本运送采用干冰（或者冰袋）4 天。拒收标本：拒绝重度溶血样本、肝素抗凝的血浆。仪器和试剂设备AB7500 核酸扩增仪、恒温金属浴、生物安全柜、低温离心机等。试剂生产厂家：中山大学达安基因股份有限公司产品标准批号：YZB/国 7271-2013最低检出量：最低检出量为500 IU/ml试剂各组分见表 1：组分名表 1试剂盒组分表称规 格数 量RNA 提取液A200 ul/管1核酸提取试剂RNA 提取液B5 瓶2EPC H2O3 瓶1HCV 内标

3、溶液100 ul/管1PCR 检测试剂HCV 反映液 A270 ul/管1HCV 反映液B30 ul/管1阴性质控品200 ul/管1质控品HCV 强阳性质控品200 ul/管1HCV 临界阳性质控品200 ul/管1操作步骤试剂准备（试剂储存和准备区）相应记录。反映液配制、离心数秒后使用。N4临界阳性空白孔单人份扩增体系配制见表表 2反映液配置表组分组分HCV 反映液AB总体积用量/人份3分装到反映管，反映液分装时尽快避免产生气泡，盖紧管盖，经传递窗传递到标本制备区。 H2O 的无水乙醇，振荡混匀，配制成乙醇，盖紧盖子，经传递窗传递到标本制备区。RNA提取（标本制备区）进入标本制备区，从传递

4、窗中取出PCR乙醇，放入标本制备区冰箱冷藏。、提取液B打开金属浴，调节温度为用镊子夹取n灭菌离心管放于安全柜内离心管架上= 3阴性质控品）向离心管中各加入内标溶液，再诀别加入提取液B，）提取液A，漩涡振荡混匀5s，室温静置 1min。8000 rpm 离心 1min ，小心吸弃上清。0 lA提取液B，盖紧管盖，充分混匀（用移液枪吹打0 m 加预冷的rpm加预冷的rpm5H2O，用移液枪吹打混匀，室取出已分装好的反映管，向关于应编号的管中加入处理好的的样本（囊括待测标本、阴性质控品、强阳性质控品、临界阳性质控品）离心数秒，经传递窗移至扩增检测区（用移液枪小心吸取上清液，尽 量不要碰到底层沉淀）P

5、CR扩增（扩增区从传递窗中取出PCR反映管，放入仪器样本槽内。定量参考品及待测标本ee 一栏中设置样本名称r1： 。核酸扩增仪标准作业指导书个循环； ，1个循环； 收集荧光个循环；保存文件，运行仪器。结果分析值。图谱窗口设置的 自动获得分析结t界面察看结果，记录样本数值。如果反映体系扩增曲线在则判定样本的阴性。如果反映体系扩增曲线在 检测通道均有关于数增长期且检测通道 扩增曲线在检测通道有关于数增长期且检测通道无关于数增长期，则判定样本阳性性。质量控制质量控制要求时方可进行检测结果的判断。试剂盒自带质控关于数增长期。 测通道，临界阳性质控品。阳性定量参考品：增长曲线呈S。室内质控每次实验应选择

6、适当的HCV RNA 质控品做室内质控。以上要求需在同一次实验中同时满足，否则，本次试验无效，需从新进行。干扰因素止皮屑、毛发等的临床标本中内源性克制物：血红蛋白、免疫球蛋白、白细胞内乳铁蛋白、脂类、等都可克制PCR 反映，标本应避免溶血、脂血、黄疸等。标本应按采集要求采集，操作中应小心谨慎，标本容器及实验用具应鉴定合格。阴性关于照品应与标本一起提取，以即时发现交叉污染。11. 生物参考区间： 1.0102 IU/ml1.0 108IU/ml警示危急值：危急值。异常结果处理医生联系、勾通，查找原因并且采取措施，于疑问报告发放处理记录表中记录处理进程。如需复查，需即时保存标本。临床意义HCV 感

7、染诊断的指标，指导临床治疗。变异的潜在来源标本保存不当或反复冻融，都会影响检测结果的准确。注意事项更换手套。阳性质控品和检测样本均应视为具有传染性物质，应避免接触到皮肤和粘膜。实验进程必需严格分区操作，各区物品均为专用，不得交叉使用。样本的处理操作应在生物安全柜内进行。所用检测试剂使用前应完全解冻，瞬时离心后使用，应避免反复冻融。-待用4。操作进程中应防止交叉污染，尽快使用鉴定合格的滤芯吸头，阴性关于照品应与标本一起提取。查各反映管是否盖紧，以免荧光物质泄露污染仪器。标本制备区所用到的试管、吸头等需打入盛有消毒剂的容器，并且与废物一起灭菌后方可丢弃。扩增完毕立即取出反映管，密封在专用塑料袋内，丢弃于指定地点。实验中用过的吸头请直接打入盛有丢弃。每次实验均