山东栽培黄芩的指纹图谱研究

1、山东栽培黄芩的指纹图谱研究【关键词】黄芩指纹图谱高效液相色谱法色谱指纹图谱分析技术是当前进展复杂物质体系质量控制及研究的重要手段。以中药色谱指纹图谱为代表的一类狭义的化学指纹图谱，着眼于生物代谢产物化学特征的分析与质控形式研究，所形成的理论和技术涉及多个前沿研究领域与穿插学科，有力促进了中药质量控制形式的开展，同时也符合中药现代化开展的必然趋势和要求。因此色谱指纹图谱分析技术目前已逐步成为中药质量评价的关键技术1。黄芩为唇形科植物黄芩SutellatiabaialensisGergi.的枯燥根。黄芩最早收载于?神农本草经?，为传统常用中药，具有清热燥湿解毒，止血安胎的成效。随着中药野生资源的逐

2、渐减少和自然环境保护的需要，以人工栽培品入药已成为主流，人工种植具有产量大、价格低、环境条件稳定可控等优点，近些年国家也在逐步推行GAP标准化种植基地的建立。黄芩作为山东道地药材目前种植面积非常大，全省种植在6667ha以上，且在全国普遍被认为是优质产品，以青岛和文登所产的最著名，有“条芩“文芩之称2。本文利用HPL法建立山东栽培黄芩的指纹图谱，利用软件生成对照指纹图谱，为更有效控制栽培黄芩质量，从而为建立符合规模化消费的黄芩基地提供更科学的数据。1仪器与试药2方法2.2检测波长的选择?中国药典?明确黄芩苷在280n处有最大吸收，因此选择250，260，270，280，290，300，310，

3、320n波长进展考察。最后结果显示在280n波长下各特征峰吸收度差异较小，整个图谱中各峰之间的比例较协调，直观效果较好，提供信息量较大。2.3流速和柱温的考察取同一批样品，按上述测定方法，对流速0.8l/in，1.0l/in，1.2l/in分别进展考察。结果说明，不同流速，除了保存时间有所改变外，峰形及别离情况均不受影响，按常规，选择流速1.0l/in。柱温选择30，35，40进展考察。结果说明，30柱温时色谱峰别离最好。2.5参照峰的选择用上述色谱条件，分别注入液相色谱仪黄芩苷和黄芩素对照品溶液10l，进展测定。结果黄芩素在整个色谱图的最后位置出峰，而黄芩苷出峰时间适中且别离良好，因此选择黄

4、芩苷作为参照物4。2.6评价系统采用国家药典委员会开发的中药色谱指纹图谱相似度评价系统试用版(2022A)。2.7供试溶液的制备2.7.1对照品溶液的制备分别精细称定黄芩苷对照品和黄芩素对照品适量，加色谱甲醇溶解并稀释成60g/l和0.1g/l的溶液。2.7.2供试品溶液的制备取黄芩药材中粉0.1g，精细称定，加醋酸乙酯甲醇3:120l，加热回流2h，放冷，滤过，并用少量提取溶剂洗涤容器和残渣，滤液蒸干，用色谱甲醇溶解并移至10l容量瓶中定容，过0.45滤膜，即得供试品溶液。2.8方法学考察2.8.1精细度取黄芩样品一批，制备供试品溶液。按上述方法重复进样6次，考察精细度。考察10个主要色谱峰

5、的相对保存时间的RSD为0.0289%1.0734%，峰面积大于5的共有峰峰面积的RSD为0.2816%2.9555%，均符合规定。将色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，计算整体相似度为0.9991，说明仪器精细度良好。2.8.2重复性取同一批黄芩样品5份，制备供试品溶液，测定指纹图谱。考察10个主要色谱峰的相对保存时间的RSD为0.13062.2799，峰面积大于5的共有峰峰面积的RSD为1.31592.7777，均符合规定。将色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，计算整体相似度为0.9991，说明该方法重复性良好。2.8.3稳定性取黄芩样品适量，制备供试品溶液，分别在0，3，6，

6、12，24h进样，测定指纹图谱。考察10个主要色谱峰的相对保存时间的RSD为0.03650.5600，峰面积大于5的共有峰峰面积的RSD为1.55622.2453，均符合规定。将色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，计算整体相似度为0.9991，说明供试品溶液在24h内稳定性良好。2.9黄芩药材指纹图谱的建立2.9.1图谱测定时间确实定取样品溶液10l，注入高效液相色谱仪，记录120in内色谱图，结果说明，65in后无有意义峰出现，故确定图谱记录时间为65in。2.9.2指纹图谱共有峰的标定对10个产地的黄芩样品进展了测定，将10批样品的指纹图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，利用手动

7、多点校正，对色谱峰进展匹配，选定稳定性好，吸收强，特征明显的色谱峰为共有峰，共标定了10个特征峰占总峰面积的90以上，各峰的相对保存时间的RSD在0.2186%1.4765%之间。见表1。表1共有峰的保存时间略2.9.3相似度分析对10批黄芩样品进展测定，进样量10l，获得各被测样品的指纹图谱。对10批样品的测定结果以AIA的数据格式导出，输入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，以中位数作为模板，计算各样品的整体相似度，各样品的整体相似度在0.8350.997之间。见图1和表2。由表2可看出各批样品相似度除了S6泰安农大的小于0.9外，其余样品相似度均大于0.94，各样品间相似度良好。图1相似度测

8、定结果略2.9.4系统聚类分析用SPSS11.0软件，以各批样品指纹图谱相对峰面积为变量，采用中位数法，以欧式平方间隔 对样本聚类分析，结果见图2。由图2可以看出样品6区别于其余样品，自为一类，这与相似度分析的结果根本一致。2.9.5对照指纹图谱的建立及评价根据10批样品指纹图谱的特点，确定10个共有指纹峰，标号见图1。导出各批指纹图谱的信号，用中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算生成对照指纹图谱，见图3及表3。并计算各批次黄芩药材的供试液指纹图谱与对照指纹图谱之间的相似度。结果见表4。结果10批次的指纹图谱与对照指纹图谱的相似度除S6泰安农大的样品外均大于0.95。图2聚类分析表略表2相似度结果略图3黄芩对照指纹图谱略表3各共有峰技术参数略表410批栽培黄芩与对照指纹图谱相似度略3讨论本实验采用的HPL法对山东10批不同产地的黄芩进展分析，发现各指纹图谱虽存在一定差异，但均具有一样色谱特征峰，且各色谱峰别离分析效率高，保存时间也相当稳定，由此建立的对照指纹图谱可作为山东栽培黄芩质量综合控制的新方法。样品6与对照图谱差异大的原因在于黄芩素的峰吸收值太大，根据理解可能是因为样品处理时，没有及时晒干，使局部黄芩苷分解成黄芩素苷元所致。【参考文献】1田润涛，谢培山.色谱指纹图谱相似度评价方