人类精液检查与处理课件

1、 *医生专业：生殖医学（试管婴儿、人工 授精）、产前诊断 地址：*妇幼保健院生殖遗传科电话：*邮箱：*网址：* 人类精液检查与处理（WHO第五版）-解读 *妇幼保健院 生殖遗传科 韩宝生 受精是一个精卵相互作用严格有序 而又协调互动的复杂过程必须具备条件:有正常的生殖细胞(精子和卵子) 精子和卵子能正常结合成受精卵精子制备（5-6章） 质量保障 （7章）精液分析（2-4章） WHO第五版由三部分组成第五版特征 各个实验项目具有详细的操作步骤、试剂组成、剂量 计算、参考值解释等。认为精子总数比精子浓度更能准确评估睾丸功能，但 需要精准测量精液体积。将活力分成前向运动、非前向运动和不活动三类。详细

2、论述了无精子症的检测。详细论证了精子形态检测及意义。增加精子冷冻章节。质量控制的重要性。修订参考值范围，以5%定为参考值的下限。 精液分析内容精液质量控制精液指标概况精液安全指南精液指标概况精液概述 Semen Summary在射精时、储存在附睾内的高度浓缩精子悬液与 附性腺（前列腺、精囊腺和尿道球腺）分泌液混 合、形成精液。精子性状反映睾丸生精功能、输精管道的通畅。精液总量反映附性腺的分泌活性。精液分析提供了男性生殖功能必要信息，有助于 评估男性生育能力及明确男科疾病诊断。 精液正常参考值范围 Sperm Normal Range 外观：灰白、乳白或淡黄色胶冻状 气味：似栗树花或角豆树花特殊

3、腥味 液化：60分钟。 PH值：7.2 体积：1.5ml 总数：39106 浓度：15106/ml。 总活力（PR+NP）：40%； PR：32% 存活率：58%。 正常形态率：4%。注：参考值下限（第5个百分位数，95%可信区间）精液分析-标准程序标本采集 初步肉眼 观察 显微镜检查 禁欲2-7天。应用手淫方法取精，器皿无毒，精液采集完整, 温度在20-37。实验室附近的私密房间内采集；否则应在采集 后1小时内送到实验室，转运温度20-37。标本记录姓名、禁欲天数及采集时间等。禁用避孕套取精及性交中断法取精。什么是生殖医学标本采集 Specimen Collection外观：正常为均质灰白色

4、。液化：室温下，正常标本15分钟、一般60分钟， 不液化者较少见。粘稠度：采用滴管或玻璃棒操作，拉丝长不应超过 2cm，粘稠度高的标本较常见。体积：采用称重（精液密度为1.043-1.102g/ml）或 直接测量，正常体积下限是1.5ml。PH值：采用6.0-10.0的pH试纸，正常下限是7.2。如 果无精子症病人精液PH值小于7.0,可能存在射精管道 的堵塞或输精管先天性缺如。什么是生殖医学初步肉眼观察 Preliminary Observation精液体积的测量与称重方法 标本制备 精子聚集 精子凝集 非精子细胞成分 精子活力 精子存活率 精子数量 精子形态 什么是生殖医学显微镜检查 Mi

5、croscopic Examination注：建议应用相差显微镜；10*10倍物镜、目镜；形态检测应用100*10计数板（或载玻片）与盖玻片应标准化。充分混匀标本，取10l精液滴在洁净计数板上，盖上 盖玻片，避免产生气泡。某些特殊标本如粘度异常、液 化不良、精子聚集或精子凝集等可造成均匀性差，注意 要混匀。温控板上（37）放置约1分钟使其稳定、停止漂移，进 行评估及检测。如果应用计算机软件检测，输入病人相关资料，包括姓 名、年龄、禁欲时间及肉眼观察信息等。计算分析：系统、随机地观察4-6个以上视野，分析400 个以上精子，计算机自动进行分级、统计浓度及精子运 动的资料。分析过程中应注意去除圆细

6、胞。标本制备 Specimen Preparetion精子聚集 Sperm Aggregation不活动精子之间，活动精子与粘液丝、非精子细胞、细 胞碎片之间粘附在一起，为非特异性聚集。无明显临床意义。（a） 精子与上皮细胞、（b）精子与细胞碎片、（c）精子与精子的非特异性聚集精子凝集 Sperm Coagulation特指活动精子以头对头、 尾对尾或混合型相互粘附 在一起的现象，精子常表 现活跃快速摆动，但因为 精子相互凝集、活动受限.记录凝集程度（1-4）级 粘附部位（A-E级）。提示免疫学因素.应用混 合抗球蛋白MAR）反应、（免疫珠（IB）反应检测 精子包被抗体。染片后的精子凝集精液中

7、常含有一定的非精子细胞成分，包括泌尿生殖 道的上皮细胞，以及生精细胞、白细胞等，后者统称 “圆细胞” 。其染色方法同精子形态染色，见后面章节。白细胞数目不应超过1106/ml。当精液中白细胞数目 多时，应该进行微生物检测以证实有无附性腺的感染。 然而无白细胞不能排除附性腺感染的可能性。计数：假如N是计数400个精子相同视野中一种特定细 胞类型的数目，S代表精子浓度（106/ml），这种特定 类型细胞的C（106/ml）可用下列公式计算 C=S（N/400）非精子细胞成分 Non sperms Cells左上图：精液检测时的圆细胞。左下图：21精子细胞；22正在吞 噬的巨噬细胞；23精母细胞。右

8、下图：29、31、33单核细胞； 30、32多形核白细胞。意义：前向精子活力与妊娠率相关，特别是前向精子 总数具有重要临床意义。方法 1.估计法：涂片后，高倍镜下观察5个视野，求出平均 数106，即为每毫升大概精子数（106/ml）。 2.CASA计算机辅助精子分析：系统观察至少4-6个以上 视野，对至少400个精子进行分级,高精确性。能提 供精子动力学的量化指标。精子活力-01 Sperm Motility 分级：将精子活力分为PR、NP、IM三级：PR（前向运动）：精子主动呈直线或沿较大圆周运动，不 论其速度如何。NP（非前向运动）：原地打转、头部颤动、尾部摆动等非 前向运动。IM（不活动

9、）：无活动。 参考值：精子总活力（PR + NP）下限为40% （第5个百分位数，95%可信区间38-42）前向运动精子（PR）下限为32% （第5个百分位数，95%可信区间31-34） 精子活力-02 Sperm Motility视频1视频2精子存活率-01 Sperm Survival Rate意义：鉴定不活动精子是活精子还是死精子；核查活力评估的准确性；其百分率应超过活动精子百分率。活的但不动的精子比例较高，提示精子鞭毛结构缺陷；较高比例的死精子症提示附睾病理改变。方法 1.伊红-苯胺黑法：黑色背景，使淡染的精子更易分 辨。活精子头部呈白色、死精子头部呈红色或暗粉 红色。 2.伊红法：活

10、精子头部呈白色或淡粉红色、死精子头 部呈红色或暗粉红色。 3.低渗膨胀法：所有尾部膨胀的精子为活精子。伊红-苯胺黑：L活精子， D1、D2死精子。低渗膨胀法：具有尾部膨胀 的精子为活精子。精子存活率-02 Sperm Survival Rate参考值：精子存活率下限为58% （第5个百分位数，95%可信区间55-63）精子数量 Sperm Count意义：（1）精子总数、精子浓度与妊娠时间、妊娠率存在关联，并且可以预测受孕，精子总数与生殖结局相关的更多数据已被认可。（2）精子总数是衡量睾丸功能的特异性指标。方法：改良Neubauer血细胞计数板法。注意：（1）使用特殊的盖玻片；（2）充分清洗干

11、净。参考值：精子浓度下限为15106/ml （第5个百分位数，95%可信区间12-16106/ml） 精子浓度乘以精液体积得出精子总数。其下限为39106 （第5个百分位数，95%可信区间33-46106）注意精子数目少、隐匿精子症、可疑无精子症等情况。精子形态-01 Sperm Morphology涂片制备用10ul精液、45、 约1秒涂一张玻片。讲究“拖”片。染色方法：推荐巴氏、Shorr、Diff-Quik染色法。精子形态-02 Sperm Morphology正常精子概念形态正常精子总数具有 临床意义精子形态评估较困难正常精子：几乎没有头 部、中段或主段缺陷， 尾部无锐利折角。处于临界

12、形态的精子都 认为是异常。头部光滑椭圆形,长度为4.0- 5.0m，宽为2.5-3.65m， 长宽之比在1.50-1.75之间。顶体占头部的1/2-2/3( 1/3)。 胞浆小滴小于头部的1/3。尾部应是直的、均一的，长度 约为45m。 精子形态-03 Sperm Morphology正常精子图示精子形态-04 Sperm Morphology异常精子分类 1.头部缺陷； 2.颈部和中段缺陷； 3.主段缺陷； 4.过量残留胞浆：胞浆小滴大于精子头部的1/3。 异常精子类型的示意图头部缺陷颈部和中段缺陷主段缺陷过量残留胞浆参考值：正常形态精子的参考值下限为4% （第5个百分位数，95%可信区间3

13、.0-4.0 精子形态-05 Sperm Morphology可供选择的实验 Sperm Morphology精子-宫颈粘液的相互作用精子透明带结合实验精子顶体反应检测 精子DNA碎片精浆生化检查 精液安全指南精液具有潜在感染性，应避免接触、防止溅撒，谨慎 对待和处理。操作时必须带上一次性橡胶或塑料手套。必须穿上实验室大衣或一次性外罩，离开实验室时必 须脱去大衣或外罩。工作人员应该注射乙型肝炎疫苗。严格防止被精液污染的锐利器械所意外伤害，避免皮 肤伤口接触精液。 实验室必须准备好消毒肥皂或灭菌皮肤清洁剂，应常 规洗手。实验室应常规定期消毒。 禁止在实验室内饮食、吸烟、化妆、储存食物等。 精液质量控制标准化的实验室操作手册（SOPs）规范齐全的仪器设备技术人员定期培训内部质控、外部质评总 则 Specimen Collection精子密度质量控制用10%甲醛液，固定2个或多个健康男性精液样本，为 阳性对照。储存在2-8，定期取0.1ml检测密度。检 测至少10次获得标准差（SD）。 画出统计图，按照质控原则可判断出误差的不同类型（随机性或系统性），从而指导对可能的原因进行分析. 精子形态学质量控制定期