仪器分析高效液相色谱法

1、关于仪器分析高效液相色谱法第1页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四2022/10/2第2页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四2022/10/2凝胶柱上加上中药提取物第3页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四2022/10/2洗脱的效果第4页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四2022/10/2HPLC基本组成示意图HPLC主要由色谱柱、加压泵和检测器组成第5页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四2022/10/2色谱柱色谱柱是液相分离的核心部件第6页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期

2、四2022/10/2输液泵输液泵分单元等度泵和多元梯度泵第7页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四2022/10/2检测器对没有紫外吸收的物质的检测，以蒸发光散射检测器用得较多检测器种类很多，现在最常用的是紫外检测器第8页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四2022/10/2进样器 手动进样器Rheodyne 7725i几乎成了所有液相色谱仪的进样器第9页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四2022/10/2进样器 手动进样器六通阀第10页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四2022/10/2进样器自动进样器可由软件完全控

3、制Waters 717 Agilent 第11页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四2022/10/2色谱工作站色谱工作站就是HPLC的控制系统外企的在数万元左右，国产的几千元。第12页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四2022/10/2色谱工作站工作站的两大功能1.控制仪器2.处理数据第13页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四2022/10/2液相色谱仪器常见种类 high performance liquid chromatograph第14页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四2022/10/2液相色谱仪（2）第

4、15页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四2022/10/2液相色谱仪（3）安捷伦Agilent 1100 第16页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四2022/10/2液相色谱仪（4）第17页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四2022/10/2液相色谱仪（5）上海伍丰科学仪器有限公司第18页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四2022/10/2液相色谱仪（6）戴安公司Ultimate 3000第19页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四2022/10/2高效液相色谱法的特点 特点：高压、高效、高速 现

5、代药物分析最有用的工具和方法第20页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四2022/10/2高效液相色谱法在药典中的使用1985年版1990年版1995年版2000年版2005年版数量8561212791327比例%0.53.25.110.441.3第21页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四2022/10/2高效液相图谱各成分依次流出色谱柱，从进样到出峰的时间称为保留时间第22页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四2022/10/2定性方法定性: 确定成分归属，依据与对照品相比较时，相同的保留时间第23页，共42页，2022年，5月20日，

6、21点3分，星期四2022/10/2定量方法外标法内标法归一法第24页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四2022/10/2定量方法外标法第25页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四内标法对照溶液：精密称（量）取对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子测定用的对照溶液。供试品溶液：再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图。 第26页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四2022/10/2定量方法内标法对照品供试品内标物第27页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四2022/10/2定量方

7、法归一法第28页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四29（1）吸附色谱法（2）正相色谱法（3）反相色谱法 一般反相色谱法 反相离子对色谱 反相离子抑制色谱主要分离方法第29页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四流动相的选择 在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。 常用溶剂的极性顺序： 水(最大) 甲酰胺 乙腈 甲醇 乙醇 丙醇 丙酮二氧六环 四氢呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 异丙醚 二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳环己烷己烷煤油(最小)第30页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四31流动相的制备供试品和对照品溶液配制（各两份

8、）系统适用性试验操作前的准备第31页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四32理论塔板数（n）：分离度（R）：系统适用性实验： 重复性 对照溶液连续进样5次 相对标准偏差应不大于2.0%第32页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四33拖尾因子（T）： w0.05h为0.05峰高处的峰宽； 为峰极大至峰前沿之间的距离。除另有规定外，T应在0.951.05之间第33页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四实例：高效液相色谱外标法测定头孢拉定含量 取含头孢拉定为94.1%和头孢氨苄为2.3%的对照品35.35mg溶解定容为50ml，取10l注入高效液

9、相色谱仪，测得头孢拉定峰面积为13842558，头孢氨苄峰面积为354934；另称取头孢拉定供试品35.88mg，溶解定容为50ml，取10l注入高效液相色谱仪，测得头孢拉定峰面积为14158286，头孢氨苄峰面积为472368；按供试品的总量分别计算头孢拉定和头孢氨苄的百分含量。第34页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四第35页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四第36页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四内标液 取正三十二烷加正己烷溶解并稀释成1.0mg/ml溶液对照液 精密称取VitE对照品0.2011g置棕色具塞锥形瓶中，精密加入

10、内标液10ml，密塞，振摇使溶解，取 13ul注入GC仪，测定，计算供试液 精密称取供试品0.1998g置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液10ml，密塞，振摇使溶解，取13ul 注入GC仪，测定，计算维生素E含量测定对照液供试液第37页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四第38页，共42页，2022年，5月20日，21点3分，星期四按中国药典2015版（二部）的规定测定维生素E，做系统适用性实验时的数据如上表。 取维生素E对照品20.80mg(98.0%)，精密加入浓度为1.044mg/ml的内标物（正三十二烷）溶液10.00ml溶解，取1l 注入气相色谱仪，对照品峰面积为481736，内标物峰面积为238787，求维生素E的理论塔板数、维生素E与内标物的分离度和校正因子各为多少？再精密称取维生素E供试品22.68mg，内标物28.00mg，用气相色谱法测得供试品峰面积为529887，内标物峰面积为644911，计算供试品中维生素E的含量。 物质Rt/minW(1/2h)/minW/min对照品8.880.250