隐球菌临床推广课件

1、隐球菌临床推广隐球菌临床推广隐球菌临床推广第一页，编辑于星期四：二点 五十二分。隐球菌临床推广隐球菌临床推广隐球菌临床推广第一页，编辑于星期 隐球菌病感染诊断现状一 产品介绍二 适用科室及临床意义三 相关标准四第二页，编辑于星期四：二点 五十二分。 隐球菌病感染诊断现状一 产品介绍二 适用科室及临床意义三 隐球菌为圆形菌体，外周有荚膜，内有反光孢子，但无菌丝。隐球菌属已知有37个不同的种，但具致病性的多为新型隐球菌，其特点是菌体由一层很厚的多糖荚膜所包被。 新型隐球菌主要包括新生变种、格特变种等简 介第三页，编辑于星期四：二点 五十二分。隐球菌为圆形菌体，外周有荚膜，内有反光孢子，但无菌丝。简

2、 流行病学38个 ICUs of 27个意大利医院384 例真菌感染 (318例侵袭性念珠菌感染；63例霉菌感染；3例隐球菌感染)Tortorano AM et al. Mycoses. 2011, 55: 7379.第四页，编辑于星期四：二点 五十二分。流行病学38个 ICUs of 27个意大利医院TortorHIV感染者器官移植患者接受大剂量皮质类固醇或单克隆抗体（如阿仑单抗、英夫利昔单抗）和/或其他免疫抑制剂治疗的患者其他无基础疾病的患者John R. Perfect, etc. Clinical Infectious Diseases 2010; 50:291322 美国感染病学会的

3、“隐球菌病治疗临床实践指南（2010 年更新）”中指出，隐球菌病的易感人群主要包括：宿主因素第五页，编辑于星期四：二点 五十二分。HIV感染者John R. Perfect, etc. Cl流行病学随着AIDS患者的增多，各种机会性感染的发病率也随之上升，新型隐球菌成为继白色念珠菌之后最常见的机会性感染真菌，其在HIV中的感染率已达8.5%。隐球菌性脑膜炎发生率和死亡率在发达国家达到10-30%， 在发展中国家可达到50-100%。早期隐球菌感染临床表现缺乏特异性，脑脊液变化不典型，但是当发展为隐球菌性脑膜炎时，死亡率可达到20%。早期、快速、准确地诊断很有必要第六页，编辑于星期四：二点 五十

4、二分。流行病学随着AIDS患者的增多，各种机会性感染的发病率也随之现有检测手段墨汁染色（菌体）真菌培养（活菌）ELISA（荚膜多糖抗原）乳胶凝集法（荚膜多糖抗原）胶体金法 （荚膜多糖抗原）第七页，编辑于星期四：二点 五十二分。现有检测手段墨汁染色（菌体）第七页，编辑于星期四：二点 五十1. 印度墨汁染色： 敏感性差，阳性检出率很低2. 脑脊液或血液培养（金标准）： 阳性检出率低，培养（2-10天）及鉴定时间长，易误诊3. 抗原检测试验： 脑脊液和血清样本抗原检测的敏感性可达到97%和87%*，能实现早期快速诊断* Tyler Warkentien, MD. Int J STD AIDS. 20

5、10 October ; 21(10): 679684.现有检测手段第八页，编辑于星期四：二点 五十二分。1. 印度墨汁染色：* Tyler Warkentien, 隐球菌荚膜多糖抗原 由3种不同的单糖聚合而成 是引起病理变化的主要毒性因子 在菌体生长和繁殖过程中，GXM不断分泌到胞外 通过发挥免疫抑制作用和免疫调理作用影响宿主免疫系统 Oscar Zaragoza, etc.Adv Appl Microbiol. 2009, 68: 133216隐球菌荚膜多糖抗原GXM (Glucuronoxylomannan, GXM) ：荚膜多糖抗原是隐球菌特有的分泌物，可以作为隐球菌感染的诊断依据第九

6、页，编辑于星期四：二点 五十二分。隐球菌荚膜多糖抗原 由3种不同的单糖聚合而成 Oscar Z 隐球菌病感染诊断现状一 产品介绍二 临床意义及适用科室三 相关标准四第十页，编辑于星期四：二点 五十二分。 隐球菌病感染诊断现状一 产品介绍二 临床意义及适用科室三 隐球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）原理第十一页，编辑于星期四：二点 五十二分。隐球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）原理第十一页，编辑于星期四：隐球菌抗原检测试剂盒（胶体金免疫层析法）试剂盒组成隐球菌抗原检测试纸条50条 样本稀释液滴定液阳性对照稳定性/储存方法2年有效期室温储存第十二页，编辑于星期四：二点 五十二分。隐球菌抗原检测试剂盒（胶体

7、金免疫层析法）试剂盒组成第十二页，特 点无需样本预处理10分钟得到结果定性或半定量测定结果客观血清，脑脊液，血浆第十三页，编辑于星期四：二点 五十二分。特 点无需样本预处理第十三页，编辑于星期四：二点 五十二分样本收集及制备按照无菌操作收集脑脊液、血浆和血清样本。样本最多可以在 2-8放置 72 小时。不反复冻融的情况下，样本可以在-20以下保存更长时间。样本在运输过程中应保持在 2-8或者-20以下。第十四页，编辑于星期四：二点 五十二分。样本收集及制备按照无菌操作收集脑脊液、血浆和血清样本。第十四定性检测操作步骤简单5步，10分钟得到结果第十五页，编辑于星期四：二点 五十二分。定性检测操作

8、步骤简单5步，10分钟得到结果第十五页，编辑于星 注意：若对照条带未出现，则说明该检测无效，应重新检测。定性检测结果 第十六页，编辑于星期四：二点 五十二分。 注意：若对照条带未出现，则说明该检测无效，应重新检测半定量检测操作步骤1、以 1:5 作为初始稀释浓度，依次 1:2 稀释至 1:2560。 分别放置于10 个微离心管中并编号1-10。2、向 1 号试管中加入 4 滴样本稀释液。3、分别向标号 2-10 的试管中加入 2 滴滴定液。4、将 40 L 样本加入 1 号试管并混匀。5、从 1 号试管中吸取 80 L 样本混合液转移至 2 号试管并混匀，依次进行稀释直至 10 号试管。6、1

9、0 号试管中吸取 80 L 样本混合液并丢弃以保证试管内最终体积为 80 L。7、将试纸条的白端分别没入试管中。8、等待 10 分钟，读取并记录实验结果。第十七页，编辑于星期四：二点 五十二分。半定量检测操作步骤1、以 1:5 作为初始稀释浓度，依次 1半定量检测操作步骤第十八页，编辑于星期四：二点 五十二分。半定量检测操作步骤第十八页，编辑于星期四：二点 五十二分。半定量检测操作步骤-2第十九页，编辑于星期四：二点 五十二分。半定量检测操作步骤-2第十九页，编辑于星期四：二点 五十二分半定量检测(滴度)结果 对于半定量滴定检测，患者的滴度应报告为产生阳性结果的最高稀释度。第二十页，编辑于星期

10、四：二点 五十二分。半定量检测(滴度)结果 对于半定量滴定检测，患者的滴度质量控制阳性对照：将 1 滴样本稀释液加入试管中，再加入 1 滴隐球菌抗原阳性对照。阴性对照为：将 2 滴样本稀释液加入试管中。分别插入试纸条，10 分钟后读取结果。依据本地、国家的法规及认证机构的指导方针或要求，可能需要做额外的质控检测。第二十一页，编辑于星期四：二点 五十二分。质量控制阳性对照：将 1 滴样本稀释液加入试管中，再加入 1胶体金法和培养/墨汁染色对比CrAg LFA package insert (IMMY)灵敏度特异性胶体金法试剂盒95.83%99.84%墨汁染色86.39%100.00%真菌培养60

11、.72%100.00%第二十二页，编辑于星期四：二点 五十二分。胶体金法和培养/墨汁染色对比CrAg LFA package胶体金法和ELISA/乳胶凝集法对比血清型灵敏度(ng 隐球菌抗原/ml)A (新型隐球菌)B (哥特隐球菌)C(哥特隐球菌)D (新型隐球菌)IMMY 胶体金法1198IMMY 乳胶凝集法284738062ELISA28232,000770其他厂家乳胶凝集法193794054TR Kozel, Clin. Vaccine Immunol. (2011) 18:1292TR Kozel, 8th International Conference on Cryptococc

12、us and Cryptococcosis (2011)灵敏度远远高于其他方法第二十三页，编辑于星期四：二点 五十二分。胶体金法和ELISA/乳胶凝集法对比血清型灵敏度(ng 隐球隐球菌抗原分布时间感染血液脑脊液肺部脑膜炎肺以外无症状症状胶体金法隐球菌抗原检测的其他方法Adapted from Kozel and Bauman, Expert Opin. Med. Diagn. (2012) 6:245第二十四页，编辑于星期四：二点 五十二分。隐球菌抗原分布时间感染血液脑脊液肺部脑膜炎肺以外无症状症状胶胶体金法和乳胶凝集法对比胶体金法乳胶凝集法检测时间10 分钟长达60分钟样品预处理无需需要(

13、蛋白酶处理血清)样品类型血清, 脑脊液, 血浆血清和脑脊液储存室温冷藏第二十五页，编辑于星期四：二点 五十二分。胶体金法和乳胶凝集法对比胶体金法乳胶凝集法检测时间10 分 隐球菌病感染诊断现状一 产品介绍二 适用科室及临床意义三 相关标准四第二十六页，编辑于星期四：二点 五十二分。 隐球菌病感染诊断现状一 产品介绍二 适用科室及临床意义三 适用科室及临床意义新型隐球菌感染可发生于全身多个部位，最常见的感染主要发生在中枢神经系统、肺部、皮肤等。第二十七页，编辑于星期四：二点 五十二分。适用科室及临床意义新型隐球菌感染可发生于全身多个部位，最常见中枢神经系统隐球菌病-神经内科 隐球菌侵犯中枢神经系

14、统最常见，包括脑膜炎或亚急性脑膜炎、散播型脑膜炎等。 临床症状：首发症状间歇性头痛、恶心及呕吐，伴低热、周身不适、精神不振等非特异性症状。随病情发展，头痛渐加重转为持续性、精神异常、躁动不安，严重者出现不同程度意识障碍。肺隐球菌病-呼吸科 肺部是隐球菌侵入的门户 适用科室及临床意义第二十八页，编辑于星期四：二点 五十二分。中枢神经系统隐球菌病-神经内科适用科室及临床意义第二十八页，皮肤黏膜隐球菌病-皮肤科 10%15%的隐球菌病患者出现皮肤损害，比如出现丘疹、水疱、脓疱、传染性软疣样丘疹、痤疮样脓疱等症状。 儿童脑膜炎-儿科 儿童由于免疫系统不健全，也容易被隐球菌感染，一般儿童的脑脊液样本都会

15、做隐球菌筛查免疫缺陷人群-感染科、器官移植科、ICU等 新型隐球菌作为一种机会性感染真菌，主要侵犯免疫缺陷人群，如器官移植患者以及AIDS患者及使用免疫抑制剂人群等。 适用科室及临床意义第二十九页，编辑于星期四：二点 五十二分。适用科室及临床意义第二十九页，编辑于星期四：二点 五十二分。临床意义在撒哈拉以南的非洲地区，隐球菌脑膜炎是造成艾滋患者死亡的一种重要疾病，隐球菌抗原可以在病症发生的几周前被检测到。隐球菌抗原的检测对于隐球菌脑膜炎的预防有非常积极的作用。第三十页，编辑于星期四：二点 五十二分。临床意义在撒哈拉以南的非洲地区，隐球菌脑膜炎是造成艾滋患者死临床意义 筛查了HIV感染病人进行隐

16、球菌抗原预防的成本效益，使用隐球菌抗原可以显著降低成本第三十一页，编辑于星期四：二点 五十二分。临床意义 筛查了HIV感染病人进行隐球菌抗原预防的成本效临床意义荚膜多糖抗原是隐球菌特有的分泌物，是隐球菌感染确诊的依据。在感染的初期，荚膜多糖抗原就被检测到，因此是隐球菌病早期诊断的标志物。 随着病情的发展，荚膜多糖抗原的含量会随之发生变化，还可作为病情监测的指标。第三十二页，编辑于星期四：二点 五十二分。临床意义荚膜多糖抗原是隐球菌特有的分泌物，是隐球菌感染确诊的G实验： 检测真菌细胞壁特有成分1,3-D-葡聚糖 吞噬细胞将菌吞噬消化后释放1,3-D-葡聚糖到血液 不能检测到的真菌：隐球菌和接合

17、菌（包括毛霉菌、根霉菌等） G实验检测隐球菌为阴性结果的原因： 隐球菌含1,3-D-葡聚糖的量少 荚膜很厚，不易被吞噬细胞消化联合检测的意义第三十三页，编辑于星期四：二点 五十二分。G实验：联合检测的意义第三十三页，编辑于星期四：二点 五十二联合检测的意义第三十四页，编辑于星期四：二点 五十二分。联合检测的意义第三十四页，编辑于星期四：二点 五十二分。 隐球菌病感染诊断现状一 产品介绍二 适用科室及临床意义三 相关标准四第三十五页，编辑于星期四：二点 五十二分。 隐球菌病感染诊断现状一 产品介绍二 适用科室及临床意义三 收录指南 共识中声明，隐球菌荚膜多糖抗原的存在是肺侵袭性隐球菌病的的确诊证据之一第三十六页，编辑于星期四：二点 五十二分。收录指南 共识中声明，隐球菌荚膜多糖抗原的存在是肺侵袭性隐球资