蟾酥对可移植性小鼠淋巴细胞白血病疗效的研究

1、蟾酥对可移植性小鼠淋巴细胞白血病疗效的研究朱大诚尹小明陈秀珍罗小泉【关键词】蟾酥L615白血病模子保存时间细胞凋亡流式细胞术Keyrds:hansu；L615leukeiauld；Survivaltie；Apptsis；F以往的实行结果表白，蟾酥对淋巴细胞白血病E细胞具有较强的按捺作用，诱导E细胞调亡是其机制之一1。本研究举行体内实行，使用蟾酥溶液作用于可移植性小鼠淋巴细胞白血病-L615白血病，不雅察其疗效。现报道如下。1质料和要领1.1药品蟾酥购于山东临沂爱康药业，按文献1配成浓度为10g/l的蟾酥溶液，滤过除菌，然后再配成0.05，0.1g/l和0.3g/l3种溶度备用。1.2细胞造就L

2、615白血病细胞株购于中国医学科学院血液研究所天津。造就基为含体积分数10%的小牛血清杭州四序青的RPI-1640Gib公司产物，并参加双抗青霉素100g/l和链霉素100g/l。在37，5%2，饱和湿度的造就箱ThernFra公司产物中造就，取对数生恒久细胞举行造模。13模子的创立取对数生恒久L615白血病细胞L615细胞，离心1500r/in，8in，去上清液，用生理盐水洗涤2次，调解细胞终浓度为1.4106/l。取615近交系小鼠购自中国医学科学院血液学研究所16只，鼠龄810周，体重2427g，牝牡各半。无菌操纵，每只小鼠腹腔注射接种L615细胞7105个，造成L615白血病模子满身白

3、血病2。小鼠在层流架内豢养，统统与鼠打仗的物品均按无菌要求处置惩罚。1.4分组及给药要领将L615白血病模子小鼠随机分为4组。每组牝牡各半，即L615模子组比拟组(模子组，每次给生理盐水0.4l)；蟾酥组低剂量组，每次按0.6g/kg给药，蟾酥组中剂量组，每次按1.8g/kg给药，蟾酥组高剂量组，每次按5.4g/kg给药。模子创立后，第2天开始按以上方案腹腔注射给药，1次/d，一连10d。1.5不雅测指标体重变革；保存时间，用公式T-/100%盘算其生命延伸率T、别离为试验组、比拟组均匀保存天数；外周血白细胞B计数及分类，血小板PLT计数；肝脾指数；肝、脾、骨髓涂片及骨髓白细胞分类。16流式细

4、胞术F阐发取濒死期各组小鼠外周血，每个样本0.5l入已加淋巴细胞分散液的试管内，离心1500r/in，20in，然后警觉吸出白色层白细胞层，举行细胞计数每个样本细胞数应大于1106，用PBS洗涤，然后按凯基AnnexinV-FIT细胞凋亡检测试剂盒南京凯基生物科技生长产物要求举行操纵。上机检测流式仪为BETNDIKNSN,B、D公司产物，接纳enQuest软件猎取10000个细胞，dFitlt软件阐发并得到结果。1.7统计学处置惩罚接纳双侧t查验，P0.05以为差异有明显性。2结果2.1体重变革蟾酥，组给药前，给药后第5天及濒死期小鼠体重无显着改变，但比拟组濒死期与给药前比力，体重有所减轻，且

5、具有明显性差异P0.05。结果见表1。表1各组小鼠体重的变革比力(略)2.2保存时间蟾酥，组与比拟组比力，保存时间均有差异程度的延伸，蟾酥，组比力差异具有明显意义，各组小鼠保存时间及生命延伸率结果见表2。表2各组小鼠保存时间比力(略)2.3外周血象L615白血病鼠分组给药后，同组间比力白细胞数均渐渐上升，至第5天蟾酥、组有统计学意义。濒死小鼠白细胞均明显增高P0.01。血小板是先升后落，至濒死期，各组血小板数已非常低落P0.01。在给药后第5天外周血未创造L615细胞，但进入濒死期比拟组L615细胞已占50.25%，蟾酥，组L615细胞不及比拟组高，并具有明显性差异P0.05,P0.01。结果

6、见表3。表3各组小鼠外周血B，PLT计数及L615细胞百分比比力(略)2.4肝脾指数各组殒命小鼠的肝脏指数无差异，脾脏指数蟾酥组较比拟组低，组间比力有统计学意义P0.05。结果见表4。表4各组肝脾指数比力(略)2.5肝、脾、骨髓涂片及骨髓白细胞分类比拟组及蟾酥各组小鼠殒命后，取其肝、脾、骨髓举行涂片剖解时见胸腹部皮下有出血点且比拟组出血点更普及而麋集，乃至出现淤斑，瑞氏染色。油镜下可见，各组肝、脾、骨髓内绝大部门为L615细胞，且生长茂盛，尤其是肝脏内L615细胞比在体外造就时体积大，外形不规矩。总体印象：胞浆少，嗜碱性，核浆比例严峻失调，胞核体积远宏大于胞浆；核染色质粗，核仁1数个图1。骨髓

7、白细胞分类见表5。蟾酥组L615细胞百分比比比拟组明显淘汰P0.05。表5各组骨髓B及L615细胞百分比比力(略)2.6流式细胞仪测定白细胞凋亡率按照F检测结果可知图2，蟾酥诱导L615白血病小鼠白细胞凋亡，随药物浓度的增长凋亡率也增长图2中右上象限为晚期凋亡百分率，右下象限为早期凋亡百分率，两者之和为凋亡细胞百分率。结果见表6。表6各组白细胞凋亡率比力略3讨论本实行结果表现：蟾酥作用于L615白血病小鼠后，能明显延伸小鼠生命，且随药物浓度增长，而生命延伸率也增长，实行前后，蟾酥组小鼠体重变革不大。而L615模子组体重显着减轻。外周血象濒死期比力白细胞数，蟾酥组远低于比拟组；各组在病程早、中期

8、血小板数目渐渐升高，进入白血病晚期随之落落，比拟组落落更为明显，这与剖解所见比拟组皮下出血点更显着一样等。这大概是蟾酥对骨髓的非常造血成效具有按捺作用，而对凝血成效影响较校L615细胞在外周血白细胞中所占比例比拟组远高于蟾酥各组。这些变革皆说明比拟组小鼠的病情比蟾酥组更严峻，从脾脏指数的变革表现比拟组脾脏受到了L615细胞的严峻浸润，同时说明蟾酥对L615细胞侵占免疫体系具有必然的按捺作用。流式细胞术证明，蟾酥能诱导小鼠体内白血病细胞的凋亡。以上实行数据表白，蟾酥对L615白血病具有必然的疗效，其机制之一是诱导白细胞凋亡，再那么对机体免疫体系成效的庇护有必然的作用。如今白血病治疗重要接纳药物、

9、化疗和骨髓移植等3个方面。药物治疗白血病结果不甚抱负，副作用多，乃至出现骨髓按捺征象，化疗虽有杀灭白血病细胞排除白血病细胞的浸润作用，但同时对正常细胞也有损伤，骨髓移植乐成率不高，且用度贵。按照白血病的临床特点，在中医学中属于“急劳“热劳“虚劳“血症的领域3。白血病属顽疾，古代医家以为对顽病痼疾当“以毒攻毒，蟾酥为有毒中药，以蟾酥治疗白血病切合“以毒攻毒原那么。蟾蜍治愈淋巴细胞白血病就是个例子4。从蟾酥抗实体肿瘤表现，它在抗肿瘤的同时还具有规复细胞免疫成效及提拔白细胞作用5。这与我们的实行结果一样等，为蟾酥走向临床，应用于白血病的治疗提供了必然的理论根据。当前抗白血病药物存在骨髓按捺征象，与之比拟蟾酥具有其良好性。【参考文献】1朱大诚，尹小明，黄学明，等.蟾酥对白血病E细胞的按捺作用及诱导其凋亡的研究J.时珍国医国药，2022，1810：2398.2储建新，李肇玫615近交系小鼠及其在实行肿瘤研究