TORCH学习资料part1课件

1、TORCH项目学习资料郑州安图绿科生物工程有限公司2009年3月TORCH 项目介绍TORCH 诊断意义TORCH 诊断方法TORCH国内外产品介绍风疹病毒Rublla Virus (RV)Cytomegalovirus (CMV)巨细胞病毒Herpes Simplex Virus 2 (HSV-2)单纯疱疹病毒2型Toxoplasma gondii (Toxo)弓形虫Herpes Simplex Virus 1 (HSV-1)单纯疱疹病毒1型TORCH 简介 TORCH一词是Nahmia于1971年撰造的，是由许多引起宫内感染的微生物英文名称的第一个字母组成的。To指弓形虫（toxoplas

2、ma），R指风疹病毒（rubella virus），C指巨细胞病毒（cytomegalovirus），H指疱疹病毒（herpes virus）。TORCH的英文含义是“火炬”，以此提起人们对母婴传播疾病的重视。这五种病原体感染的范围广、危害大，孕妇由于内分泌系统的改变导致机体免疫力下降，容易发生原发性感染，以前感染过的孕妇体内潜伏的病毒也容易被激活而发生复发感染。妊娠期感染不仅危害母体，往往还对胎儿和新生儿产生严重不良后果，可以导致流产、早产、死胎或胎儿生长迟缓和发育畸形，通过产道和母乳可以引起新生儿感染，如果累及神经系统，可造成不同程度的智力障碍以及各种瘫痪、失聪、失明等严重后遗症，从而影响

3、人口素质。 TORCH感染在围产医学中称之为“TORCH综合征”，已经受到全世界医学界尤其是妇产科和儿科医生的高度重视。欧美等发达国家早在七十年代就将风疹、弓形体、巨细胞病毒等检测列为孕期筛查项目，目前我国的医疗及计划生育部门也逐步开展了孕早期TORCH检测工作，随着国家优生优育工作的深入进行，人们将更加重视对TORCH感染的检测及预防。卫生部于“七五”、“八五”、“九五”连续将此列为攻关课题，其中“八五”、“九五”为全国重点课题。 巨细胞病毒是一种双链DNA病毒，属于疱疹病毒亚科，是人类疱疹病毒组中最大的一种病毒。 其感染的特征是出现有典型的胞浆及核内包涵体的巨大细胞，故名巨细胞病毒。其形态

4、最大由162个壳粒（capsomer），正20面体构成。有典型的疱疹病毒结构，形态与单纯疱疹病毒及水痘-带状疱疹病毒非常相似，不易区别。 巨细胞病毒结构猫头鹰眼细胞一、病原体巨细胞病毒（CMV） CMV遍布世界各地，人是CMV的唯一宿主且对其有广泛的易感性。血清学调查表明：40%-100%成人有CMV抗体，其流行无季节性倾向。 CMV感染在人群中随着年龄、社会环境以及经济条件不同而不同。在亚洲和非洲90%的人口受感染，其中大多数人在青少年时期即有抗体，说明感染年龄较早，而西方国家其感染发生较晚。调查还表明，低经济收入人群较高经济收入人群感染率高。70岁左右人群比20岁左右人群抗体阳性率高，男女

5、之间抗体阳性率基本相同。 二、流行病学通过对郑州地区约1200份临床样本的血清学检测，人群感染率在95%以上。多数人一生中都感染过CMV，但主要为无症状的亚临床感染。成人CMV感染和免疫功能有密切关系，病毒往往以潜伏感染的形式持续终生，只有当宿主免疫状态失去平衡，如器官和骨髓移植、癌症、妊娠以及应用免疫抑制剂等时，潜伏的病毒才复活。潜伏病毒的复活和无症状的携带者都能引起病毒的传播。 三、临床感染孕妇感染：孕妇的原发或新的复发感染均可引起新生儿宫内或围产期感染，当孕妇患有巨细胞活动感染时，病毒可通过胎盘进入胎儿体内引起先天性感染。孕妇的原发感染对胎儿的危害比复发感染严重，它不仅可引起先天性感染，

6、而且后遗症较多且严重，原发性孕期感染CMV的胎儿50%可出现智力低下，视力受损，听力丧失等症状，特别是引起婴儿的巨细胞包涵体病（CID，CID的特点是网状内皮系统和中枢神经系统受），患儿可多个系统、多个器官受损，其病死率达1020。青少年和成年人感染：表现为单核细胞增多症，由原发感染引起，症状表现为无力、肌痛、长期发烧、肝功异常、淋巴细胞增多、出现大量非典型淋巴细胞。输血后感染：输血后引起单核细胞增多症，突然发烧，典型发生于输血后3-4周，以后出现淋巴细胞增多，脾大。免疫抑制者的感染：在免疫抑制者中，原发CMV感染发病率和死亡率都明显增高，器官移植者和患恶性肿瘤接受化疗者，CMV感染与发病危险

7、性增加，移植后1-4个月易发生潜伏病毒的复发，有肝脾肿大，淋巴细胞增多等症状。艾滋病人的感染：几乎所有的艾滋病人都有CMV感染，病人尿内排毒并有病毒血症。艾滋病人CMV感染有细胞免疫功能的损害，病人常因视神经炎引起视力衰退，有严重结肠炎及消耗症，常合并CMV肺炎，死亡率较高。先天性感染对胎儿威胁最大，故预防的重点应当是预防先天性感染。先天性感染主要是母亲原发性感染时母亲血中的病毒通过胎盘而感染胎儿。先天性感染对胎儿的损害与胎儿的月龄有关，胎龄越早受损越严重。从优生学考虑，凡妊娠期间诊为CMV原发性感染者，特别是妊娠早期，应视为高度危险性。对妊娠期间诊为CMV复发或再感染者，对胎儿影响较小，可继

8、续考虑妊娠。对宫颈分离到CMV者一般不需特别处理，因分娩时感染新生儿多不引起明显症状。有人认为宫颈局部的CMV会逆行造成先天性CMV感染，这个问题尚未得到证实。受CMV感染的小儿在一、二年内常常传播病毒，故对CMV无免疫力的孕妇（抗CMV抗体阴性者）应避免与之接触。 四、巨细胞病毒感染的预防1、临床标本直接检查：包括脱落细胞及组织病理检查（1）尿脱落细胞检查：用患者新鲜尿10-20ml，经离心沉淀、涂片、固定、染色后，在显微镜下可见特征性的巨细胞及核内包涵体。此细胞病理学方法简单，但灵敏度差。（2）组织病理学检查：常规组织病理学方法检查外科活检组织或尸检病理切片中上述典型的巨细胞和核内包涵体。

9、（3）电镜检查：标本固定后包埋，超薄切片，铅染色后电镜下观察。虽然能看到病毒颗粒，但不能从形态上区分CMV和单纯疱疹病毒颗粒，故很少用。五、巨细胞病毒感染的诊断风疹病毒（RV） 风疹病毒是披膜病毒科风疹病毒属的唯一成员，为有包膜的单股正链RNA病毒，外形呈球形，直径为5070nm，核衣壳为二十面体，其直径为30nm，疏松的包膜环绕，包膜表面有微小刺突，直径56nm，分子量为3.8106，具有血凝和溶血活性。风疹病毒有三种结构蛋白即E1、E2和C蛋白，分子量分别为58kD、4247kD、33kD。E1和E2为包膜蛋白，以二聚物的形式分布在包膜上，核衣壳由病毒的RNA和C蛋白组成。 风疹病毒只有一

10、个血清型，但有多种基因型。可在Vero细胞或 VeroSLAM 细胞中培养。风疹病毒不耐热，易被高温或干燥灭活。一、病原体风疹病毒结构三、临床表现 风疹的临床表现类似麻疹但较麻疹感染症状轻，合并症少，感染风疹病毒后，一般有 1021天的潜伏期，之后进入前驱期，通常这一期比较短，病情也多不重。 常见症状有咳嗽、打喷嚏、流鼻涕、头痛、咽痛、食欲不振以及发热等感冒样症状。一般发热12天开始出疹。皮疹为淡红色的斑丘疹，分散或融合成片，一般由面部延及躯干和四肢，于24小时内布满全身，手掌及足底无皮疹，面部及四肢皮疹稀疏，躯干尤其背部皮疹密集，融合成片，35天皮疹逐渐消退，全身症状也同时消失，亦有人称之为

11、“三日麻疹”。皮疹消退后，通常无色素沉着及脱屑。 一般情况下，风疹全身症状比较轻微，与显著的皮疹显得很不相称。出疹前后有耳后、枕部及颈后淋巴结肿大，肿大淋巴结轻度压痛，不融合、不化脓，此点对风疹的早期诊断有帮助。实验室检查示血白细胞总数偏低、淋巴细胞增多，可出现异型淋巴细胞；患病3天后常可在血中检测到风疹病毒特异性抗体。无皮疹性风疹患者可只有发热、上呼吸道炎症、淋巴结肿痛，血清学检查风疹病毒特异性抗体为阳性。 三、临床表现 风疹感染分为先天和后天两种。一般后天感染即通常说的风疹，先天感染指 CRS。调查表明，感染风疹病毒与未感染风疹病毒的妊娠妇女相比，其死产和自然流产要高2-4倍。 风疹病毒对

12、血管内皮细胞的损伤作用是严重先天性器官缺损的重要原因。孕妇病毒血症可引起胎盘绒毛膜上皮发炎或毛细血管内皮受损，破坏了胎盘的屏障，使病毒进入胎儿体内，引起胎儿先天性感染，临床症状可于出生后发生，也可延长至几年后出现。先天性感染除引起流产、死产外，活产者大约29%表现为“先天性风疹综合征”（congenital rubella syndrome, CRS），即出生时体重低于2.5公斤，发育迟缓，出生后全身性器官受损，先天性心脏病，畸形，耳聋、失明等。CRS患儿最常见的是白内障等眼疾患，其次是耳聋，60%有心血管系统缺损。 孕妇妊娠1个月内感染风疹病毒，婴儿先天性畸形的发生率为11%-58%，2个月

13、内为11%-36%，3个月内为7%-15%，4个月内为7%以下，5个月内仍旧有先天性耳聋胎儿出生，妊娠6个月以外感染风疹病毒基本没有胎儿畸形的危险。 四、临床感染 接种疫苗：目前对风疹预防的主要方法是接种冻干风疹减毒活疫苗。接种对象为年龄为 8个月以上的风疹易感者和育龄期妇女。在发达国家，风疹已几乎被实施疫苗计划免疫所消灭，只是在未免疫人群中仍有少数发生，但在免疫项目开展不好的国家，风疹仍有流行。 防止疫苗病毒对胎儿的损害：尽管疫苗病毒对胎儿危害较小，但已有报道从妊娠前后误种疫苗者人工流产的胎儿组织中分离到疫苗病毒。因此必须明确规定，接种疫苗前后2个月内禁止怀孕。 由于CRS患儿能长期排毒，所

14、以对CRS患儿应予适当管理，医院中怀孕的风疹抗体阴性的医护人员应避免与CRS患儿接触。 应把工作重点放在预防CRS患儿的出生上，有条件的医院应逐步开展早孕 TORCH感染检查工作，其中包括风疹病毒的血清学监测。五、风疹病毒的预防 病毒分离培养 病毒分离常用的临床标本有咽拭子、外周血单核细胞、胚胎、新生儿血浆和尿 液 ，将标本接种于Vero细胞中对RV进行检测：(1)用免疫荧光标记的RV特异 性单克隆抗体直接检测；(2)将病毒感染的细胞进行离心，收集细胞，用戊二醛 将细胞团块固定2h，经饱和醋酸铀和柠檬酸铅染色，观察病毒颗粒。尽管RV 能感染多种培养细胞系，但其感染程度和排毒水平往往较低，给病毒

15、体的检测 带来一定困难。 核酸检测 此技术所常用的标本有咽拭子、脐血、外周血单核细胞、绒毛膜、羊水等。 PCR是一种具有敏感性高、特异性强的靶DNA快速检测方法。 抗体血清学诊断 RV蛋白包括非结构蛋白(nonstructural protein，NSP)和结构蛋白 (structural protein，SP)两部分，前者由P150和P90组成，后者由核蛋白C 和2个外膜糖蛋白E1、E2组成。目前的血清学抗体诊断技术都是基于RV结构 蛋白的酶联免疫检测技术，主要有间接ELISA法检测RV-IgG和IgM，捕获法 检测RV-IgM。六、风疹病毒感染的诊断风疹病毒感染后抗体出现及存在时间弓形虫弓

16、形虫（Toxoplasma gondii）属于球虫寄生虫，是寄生于人和哺乳动物组织细胞内广泛性分布的机会性致病原虫，因其滋养体如弓形而得名，它引起的弓形体病toxoplasmpsis）是一种人畜共患病，广泛流行于世界各地。国际公认的强毒株代表为RH株，弱毒代表为Beverley株。 弓形虫生活史中出现5种形态，即滋养体（速殖子 tachyzoite）；包囊（可长期存活于组织内）；裂殖体；配子体和卵囊（oocyst）。前3期为无性生殖，后2期为有性生殖，弓虫生活史的完成需双宿主。在终宿主（猫与猫科动物）体内，上述5种形态俱存；在中间宿主（包括禽类、哺乳类动物和人）体内则仅有无性生殖。无性生殖常可

17、造成全身感染，有性生殖仅在终宿主肠粘膜上皮细胞内发育造成局部感染。 弓形虫（Tox）一、病原体弓形虫的传播方式有两种： 猫犬粪便中的弓形虫卵囊污染了水或食物而使人感染。 人接触或进食含有传染性包囊的生肉或不熟肉类。病原体通过粘膜侵入机体后即在局部增殖并侵入局部淋巴结，以后再通过血液或淋巴循环进一步扩散到全身器官，引起病变。弓形虫主要侵犯单核吞噬细胞和各种脏器的实质细胞。病原体在细胞内增殖，直至细胞破裂释放出弓形虫再侵入其他细胞。如此反复，形成坏死灶和周围组织的急性炎症。病变主要由滋养体引起，包囊一般不引起炎症，但如弓形虫毒力强，数量多，特别当机体免疫力下降，可发生急性感染，严重者可发生死亡。感

18、染晚期，机体内弓形虫逐渐趋于静止，但在脑与眼部因抗体不易到达，病情可继续发展。阴性感染或病情已静止的病人，由于肿瘤、接受免疫抑制剂等引起免疫力低下时，也能导致复发，甚至急性传播。 二、流行病学世界各国人群弓形虫感染率不等，从0.6到94，许多国家感染率在2550左右，在西方国家中以法国感染率最高，达80。我国各地人群弓形虫感染率不同，不同作者在不同地方采用不同方法调查的感染率人0.30到47.3不等。郑州地区人群的平均感染率在2-5%之间。速殖子期是弓形虫的主要致病阶段，以其对宿主细胞的侵袭力和在有核细胞内独特的内二芽殖法增殖破坏宿主细胞。虫体逸出后又重新侵入新的细胞，刺激淋巴细胞、巨噬细胞的

19、浸润，导致组织的急性炎症和坏死。包囊内缓殖子是引起慢性感染的主要形式，包囊因缓殖子增殖而体积增大，挤压器官，使功能受到障碍。包囊增大到一定程度，可因多种因素而破裂。游离的虫体可刺激机体产生迟发性变态反应，并形成肉芽肿病变，后期的纤维钙化灶多见于脑、眼部等。宿主感染弓形虫后，在正常情况下，可产生有效的保护性免疫，多数无明显症状，当宿主有免疫缺陷或免疫功能低下时才引起弓形虫病，即使在隐性感染，也可导致复发或致死的播散性感染；近几年有报导艾滋病患者因患弓形虫脑炎而致死。弓形虫的感染分为先天性感染和获得性感染二类。先天性感染发生于初孕妇女，虫体经胎盘血流传播，受染胎儿或婴儿多数表现为隐性感染，有的出生

20、后数月甚至数年才出现症状；也可造成孕妇流产、早产、畸胎或死产，尤以早孕期感染，畸胎发生率高。据研究表明，婴儿出生时出现症状或发生畸形者病死率为12，而存活中80有精神发育障碍，50有视力障碍。以脑积水、大脑钙化灶、视网膜脉络膜炎和精神、运动的障碍为先天性弓形虫病典型症状。此外，可伴有全身性表现，在新生儿期即有发热、皮疹、呕吐、腹泻、黄疸、肝脾肿大、贫血、心肌炎、癫痫等。四、临床感染获得性弓形虫病可因虫体侵袭部位和机体反应性而呈现不同的临床表现。因而无特异症状，须与有关疾病鉴别。患者多数与职业、生活方式、饮食习惯有一定关系。淋巴结肿大是获得性弓形虫病最常见的临床类型，多见于颌下和颈后淋巴结。其次

21、弓形虫常累及脑、眼部，引起中枢神经系统异常表现，在免疫功能低下者，常表现为脑炎、脑膜脑炎、癫痫和精神异常。弓形虫眼病的主要特征以视网膜脉络膜炎为多见，成人表现为视力突然下降，婴幼儿可见手抓眼症，对外界事物反应迟钝，也有出现斜视、虹膜睫状体炎，色素膜炎等，多见双侧性病变，视力障碍外常伴全身反应或多器官病损。多数隐性感染者，当患有恶性肿瘤，施行器官移植，长期接受免疫抑制剂、放射治疗、细胞毒剂等医源性免疫受损情况下或先天性、后天性免疫缺陷者，如艾滋病患者、孕期妇女等都可使隐性感染状态转为急性重症，使原有病症恶化。 1、病原学检查（具确诊意义） 涂片染色法：取急性期患者的体液、脑脊液、血液、骨髓、羊水

22、、胸水经离心后，沉淀物作涂片，或采用活组织穿刺物涂片，经姬氏染色后，镜检弓形虫滋养体。此法简便，但阳性率不高易漏检。此外也可切片用免疫酶或荧光染色法，观察特异性反应，可提高虫体的检出率。 动物接种分离法：采用敏感的实验动物小白鼠，样本接种于腹腔内，一周后剖杀取腹腔液镜检，阴性需盲目传代至少3次，样本亦可接种于离体培养的单层有核细胞。动物接种和细胞培养是目前常用的病原查诊方法。五、弓形虫的临床诊断2、抗原检测用免疫学方法检测宿主细胞内的病原（速殖子或包囊）或循环抗原。循环抗原（CAg）为弓形虫在宿主体内增殖过程中的代谢和裂解产物，在弓形虫感染早期、急性期或活动期的血清及体液中有较高的含量。因此，

23、CAg的检测可作为弓形虫现症感染的辅助诊断方法，认为它有助于诊断人类弓形虫感染，特别是对于免疫受损患者。但是弓形虫病的虫血症短暂，所以检测抗原血症的实用性还有待研究。3、抗体检测（IgA IgM IgG）间接血凝试验(Indirect Haemagglutination Test IHA) 间接免疫荧光试验(Indirect Immunofluores-cent Test,IFT) 酶联免疫吸附试验（ELISA） 1、形态结构单纯疱疹病毒（Herpes simplex virus,HSV）属于疱疹病毒科亚科，呈球形，完整病毒由核心、衣壳、被膜(Tegument)及囊膜组成。核心含双股DNA，缠

24、绕成纤丝卷轴。衣壳呈二十面体对称，由162个壳微粒组成，直径为100nm。衣壳外被一层被膜覆盖，厚薄不匀，最外层为典型的脂质双层囊膜，上有突起。囊膜表面含gB、gC、gD、gE、gG、gH糖蛋白，与病毒对细胞吸附/穿入（gB gC gD gE）、控制病毒从细胞核膜出芽释放(gH)及诱导细胞融合（gB gC gD gH）有关。并有诱生中和抗体(gD 最强)和细胞毒作用（已知的HSV糖蛋白均可）。单纯疱疹病毒（HSV）一、病原体2、培养特性HSV可在多种细胞中生长，常用的细胞系有BHK细胞，Vero细胞、 Hep-2细胞等。病毒初次分离时，原代乳兔肾细胞、人胚肺细胞较敏感。HSV感染动物范围广泛，

25、多种动物脑内接种可引起疱疹性脑炎，小白鼠足垫接种可引起中枢神经系统致死性感染，家兔角膜接种引起疱疹性角膜炎，豚鼠阴道内接种可引起宫颈炎和宫颈癌。接种鸡胚绒毛尿囊膜上，形成增殖性白色斑块。3、耐受性因为单纯疱疹病毒的囊膜为典型的脂质双层，所以它对乙醚及脂溶剂特别敏感，对高温和低PH都不稳定，在低温下可生存数月，湿热50或干燥9030分钟灭活。单纯疱疹病毒分为1型和2型，两者有50%的同源性，其形态结构基本一致，很难区分，但其感染途径、感染率和引起的症状有很大不同。HSV-1主要是通过呼吸道、皮肤和粘膜密切接触传播，感染腰以上部位的皮肤粘膜和器官，人感染非常普遍，发展中国家成人抗HSV-1抗体阳性

26、率为95-100，其中原发性感染中8090为隐性感染。新生儿HSV感染发病率为0.05-1/万例，其中绝大多数为母亲生殖道HSV上行播散或分娩时经产道感染所致。常见的临床表现是粘膜或皮肤局部集聚的疱疹，偶而也可发生严重的全身性疾病，累及内脏。如引起疱疹性口腔炎（herpetic stomatitis ）、疱疹性角膜炎（herpes simplex keratitis，HSK） 、疱疹性脑炎（Herpes Simplex Virus Encephalitis，HSE）等。HSV-2主要是通过性接触传播和母婴传播，感染腰以下部位的皮肤粘膜和器官，可以引起生殖器疱疹、也是宫颈癌、阴茎癌的协同诱因，同

27、时会增加感染包括艾滋病在内的病毒性疾病的几率。生殖器感染HSV-2较HSV-1易活化，常出现复发性感染。目前生殖器HSV感染发生率不断上升，在某些西方国家已跃居性病常见病因的第二位，我国成人HSV-2的抗体阳性率为3-5%。二、流行病学 原发感染半岁以后的婴儿，因为来自母体的抗体消失，此时容易发生HSV-1的原发感染。HSV-1原发感染常发生于115岁，最常引起龈口炎，在牙龈、咽颊部黏膜产生成群疱疹，疱疹破裂后形成溃疡，病灶内含有大量病毒。此外，还可以引起疱疹性角膜结膜炎、皮肤疱疹性湿疹、疱疹性甲沟炎或疱疹性脑炎。初次感染约90%无临床症状，多为隐性感染。疱疹性口炎(herpeticstoma

28、titis)是小儿容易发生的单纯疱疹病毒1型IgG（HSV-1）引起的急性口腔粘膜感染，也可能单独发生在唇及口周皮肤。本病多见于6岁以下儿童，尤其是6个月至2岁的儿童更多。本病潜伏期约47天，开始多有发烧、咽痛、头痛、全身不适等先兆，23天后口腔开始出现症状，先是出现散在红色斑疹，很快斑疹上形成散在或成丛的小水泡，周围有红边。初起时发痒，继而有痛感。水泡很快溃破，形成浅溃疡迅即结痂，数日即脱落自愈。全身症状或轻或重，所属淋巴结有时略肿大。三、临床感染单纯疱疹病毒性角膜炎(herpes simplex keratitis ,HSK)，简称单疱角膜炎，是由单纯疱疹病毒1型IgG(herpes si

29、mplex virus,HSV-1)引起的角膜感染，是一种严重的世界性致盲眼病，其发病率和致盲率均占角膜病的首位。HSK原发感染常见于幼儿，有全身发热和耳前淋巴结肿痛，唇部和皮肤单疱感染，眼部受累表现为急性滤泡性结膜炎、膜性结膜炎、眼睑皮肤疱疹，大约2/3患者出现点状或树枝状角膜炎，不到10%的患者发生角膜基质炎和葡萄膜炎；HSK复发感染包括树枝状和地图状角膜炎、非坏死性和坏死性角膜基质炎等，感染的病毒株及机体的遗传体质，与疾病类型及复发的严重程度有关。单纯疱疹病毒性脑炎(Herpes Simplex Virus Encephalitis，HSE)是一种由于单纯疱疹病毒感染脑实质引起的，以发热

30、、口唇疱疹、头痛呕吐、意识障碍、偏瘫、抽搐、精神异常为主要表现、脑脊液可检出单纯疱疹病毒抗原或特异性抗体阳性的脑部感染性疾病，又称急性坏死性脑炎、急性包涵体脑炎，是临床较为常见的中枢神经系统感染性疾病，其中95以上为HSV-1感染。本病呈散发性，见于世界各地，无季节性倾向，任何年龄均可发病，也无性别差异，病情险恶，病死率高，据报道为30%70%。 潜伏感染和复发感染HSV原发感染产生免疫力后，将大部分病毒清除，部分病毒可沿神经髓鞘到达三叉神经节（HSV-1）和脊神经节（HSV-2）细胞中或周围星形神经胶质细胞内，以潜伏状态持续存在，与机体处于相对平衡，不引起临床症状。当机体发热、受寒、日晒、月

31、经、情绪紧张，使用垂体或肾上腺皮质激素，遭受某些细菌病毒感染等，潜伏的病毒会被激活增殖，沿神经纤维索下行至感觉神经末梢，至附近表皮细胞内继续增殖，引起复发性局部疱疹。其特点是每次复发病变往往发生于同一部位，最常见在唇鼻间皮肤与粘膜交界处出现成群的小疱疹。疱疹性角膜炎、疱疹性宫颈炎等亦可反复发作。 先天性及新生儿感染妊娠期妇女因HSV原发感染或潜伏的病毒被激活，病毒可经过胎盘感染胎儿，诱发流产、早产、死胎或先天性畸形。孕妇生殖器有疱疹病损者，分娩时病毒可传给婴儿而发生新生儿疱疹感染，感染危险性在40-60%，其中60-70%致死，幸存而无后遗症只有15%。一般有四种感染类型：无症状型、疱疹型、中

32、枢神经系统型及全身播散型感染。大多数病儿于产后1-3周出现临床症状，其中80%首先显现皮肤损害，约20%不出现皮肤损害，只表现为播散性或中枢神经系统感染。 1、直接检查单纯疱疹病毒常采用疱疹液、皮肤粘膜病灶刮取物、活检组织在免疫电镜下特异性地检查感染细胞和组织标本，可发现细胞内有不成熟的病毒颗粒。也可将标本涂片用姬姆萨染色，于光学显微镜下观察多巨细胞和细胞内嗜酸性包涵体。上述方法受取样部位和病变时机的影响，敏感性和特异性不高，不适于临床大规模检测之用。2、病毒分离培养病毒培养是实验室诊断HSV 感染较为敏感的方法，HSV-1和HSV-2能产生典型的CPE(致细胞病变作用)。如镜检发现细胞肿胀、

33、变圆、有巨细胞或融合细胞出现等典型的细胞病变和细胞核内包涵体说明病毒存在。细胞培养的病毒分离率常受感染的特异部位不同而有差异。据报道脑脊液(CSF)中单纯疱疹病毒培养的阳性率很低，一般不超过5。生殖器疱疹标本细胞培养HSV的阳性率则较高。但也有文献报道培养分离生殖器标本易于污染，操作复杂。无法检测亚临床型、潜伏性生殖器疱疹。3、核酸检测中山大学达安基因已有荧光PCR试剂盒上市。4、抗体检测主要通过酶联免疫法检测血清标本内的HSV抗体(IgM及IgG)。目前市场上的检测试剂盒有分型（HSV-1 HSV-2）和不分型（HSV-1+2）试剂盒两种。四、单纯疱疹病毒的诊断TORCH的诊断意义孕妇在怀孕

34、期间原发性感染TORCH，可引起胎儿的先天性感染，造成出生缺陷，TORCH IgG和IgM抗体的检测可以区分孕妇是否在怀孕期间感染了五种病原体，并可结合其他诊断方法确定胎儿是否受到先天性感染。再次感染和怀孕后期感染对胎儿的危害比较小，最好在孕前检查免疫状态以了解孕期血清学的转化。或在怀孕期间检查以确定感染时间。多数母亲感染后无特殊症状或无症状，因此临床诊断的意义不大。病毒感染可产生特异性抗体，但并不总能提供免疫力。所以可发生再次感染并传播给胎儿。孕早期应识别易感孕妇，提供相关高危因素的咨询。早期证实母亲的感染，能帮助及早确定采取侵入性或非侵入性的产前诊断方法。为有效评估胎儿的风险及制订合理的处

35、理方案，应准确掌握：流行病学情况、高危因素、自然病程、后遗症的发生率、产前诊断的方法和其局限性、预防和治疗的措施。检查结果意 义危险性处理措施IgM +IgG +早期感染过体内有抗体；近期复发感染或体内潜伏的病毒被激活。高同时采取其它检测方法进一步确诊，若近期感染指标仍旧为阳性或胎儿情况不佳，应终止妊娠。IgM +IgG -急性期初次感染极高临床上少见。处理方法与上相同。IgM -IgG +早期感染过，体内有抗体，有一定免疫力；无近期感染。低无需进一步处理。IgM -IgG -无感染史，体内无抗体，无免疫力。视为易感人群无严格监控，有条件应进行人工免疫。IgG抗体4倍升高近期复发感染或体内潜伏

36、的病毒被激活。高同时采取其它检测方法进一步确诊，若近期感染指标仍旧为阳性或胎儿情况不佳，应终止妊娠。TORCH检测的临床诊断意义IgM抗体、IgG抗体出现时间 IgM抗体在感染后23天出现，7-14天达到最大值，此后维持一段时间的平衡。在愈合期IgM抗体水平快速下降，8周左右基本检测不到抗体。潜伏感染、无症状感染和复发感染时基本检测不到IgM抗体，所以IgM抗体是近期感染的指标。 IgG抗体在感染后7天左右出现，2周左右达到最大值，此后缓慢下降，至愈合期基本维持平衡。一旦病毒再次复发，IgG抗体水平再次快速升高并于1周内达到高峰，此后快速恢复到正常值，所以IgG抗体是继往感染的指标。一般来说，

37、感染后IgM抗体的滴度会在一个月内达到高峰，2-4个月基本消失，这段时期也称急性或近期感染，随后抗体滴度开始下降，但是有些人IgM抗体会持续阳性或存在半年以上，所以仅从IgM抗体的检测结果还并不能完全判定孕妇是否为急性感染。更加准确的临床意义还应结合IgG亲和力测定来区分是否为急性感染，因为低亲和力的IgG抗体出现在感然后的第一个月，既往和复发感染才会出现高亲和力的IgG抗体。亲和力的高低以亲和指数表示，感染后3个月内的血清样本CMV-IgG亲和指数一般为21%13%，既往感染的亲和指数一般为78%10%。所以高IgM抗体滴度的同时IgG亲和指数较低则预示着初次急性感染 。 羊水的病原体培养和

38、PCR检测可以确认胎儿是否受到先天性感染。仅IgM抗体的检测存在缺陷IgG抗体亲和力的检测作为补充确诊方法以CMV和RV为例对临床检测结果进行解释和进一步处理初次感染后的17周内IgG抗体为低亲和力抗体（AI40%），25周后完全成熟为高亲和力抗体（AI60%）。临检中心引用以巨细胞病毒为例说明孕妇原发感染与新生儿的先天性感染和有症状感染的关系19941999 意大利出现症状没有症状n=18 (46.2%)n=21 (53.8%)未感染 病毒分离培养阴性 IgG-/IgM-; IgG+/IgM- (高亲和力)原发感染 病毒分离培养阳性或阴性 IgG-/IgM+; IgG+/IgM+ (低亲和力

39、)复发感染 病毒分离培养阳性/阴性 IgG+/IgM+ (高亲和力)感染状态不明 病毒分离培养阴性 未检测IgM抗体，IgG亲和力中等 经进一步检测分成4组611 个有垂直传播巨细胞病毒风险的孕妇未感染者n=300 (49.1%)没有出现先天性感染原发感染者n=161 (26.3%)出现先天性感染复发感染者n=125 (20.5%)没有出现先天性感染感染状态不明n=25 (4.1%)没有出现先天性感染病毒分离培养和PCR在胎儿和新生儿CMV感染诊断中灵敏度和特异性比较结果显示： PCR灵敏度100%，可以作为初筛实验。 病毒分离培养特异性100%，可以作为确诊实验。TORCH感染严重程度的影响

40、因素病原体 种类、数量、毒力、是否持续 孕妇免疫力 初染/再染，孕母免疫力下降 胎儿孕周/成熟度 孕周小，成熟度低者病变严重TORCH先天性感染的途径经胎盘感染 经羊水感染 经产道感染 经母乳感染标本采集： 孕 妇：血液、尿液、乳汁、宫颈分泌物 胎 儿：胎盘组织、绒毛、羊膜、羊水 新生儿：脐血、鼻咽/外耳道分泌物、胃液、 脑脊液、尿液。检测方法： 形态学：光镜下检查 病原学：分离培养/接种 血清学：IHA、IFA、ELISA 分子生物学：PCRTORCH综合症的诊断TORCH-IgG和TORCH-IgM抗体检测方法间接ELISA法检测TORCH-IgG抗体包被抗原血清中特异性IgG抗体酶标记抗

41、人IgG抗体底物终止液间接ELISA法检测TORCH-IgM抗体包被抗原酶标记抗人IgM抗体底物终止液血清中特异性IgM抗体血清中特异性IgG抗体血清需用吸附剂去除特异性IgG和RF因子的干扰包被抗人IgM抗体捕获ELISA法检测TORCH-IgM抗体（中和抗原法）酶标记特异性抗原的抗体底物终止液血清中人IgM抗体此反应模式被国内外普遍采用特异性中和抗原包被抗人IgM抗体捕获ELISA法检测TORCH-IgM抗体（酶标记抗原法）底物终止液血清中人IgM抗体目前国内已上市产品均采用此法酶标记特异性抗原间接法和捕获法检测TORCH-IgM方法的优劣间接法优点：方法简单，原材料容易制备。间接法缺点：

42、易受特异性IgG竞争性结合固相抗原的干扰，造成假阴性。易受类风湿因子的干扰，造成假阳性。为去除以上两因素的干扰，需要对样本用吸附剂处理，操作复杂。本底较高，阴阳性样本反差不明显。包被抗原间接法检测TORCH-IgM抗体的干扰因素酶标记抗人IgM抗体血清中特异性IgM抗体血清中特异性IgG抗体血清中特异性IgG抗体IgM型RF因子包被抗原RF因子酶标记抗人IgM抗体血清中特异性IgG抗体 捕获法优点：有效地去除了特异性IgG的干扰，降低了类风湿因子的干扰。不需要实验前对样本进行预处理，操作简便。阴性本底干净，阴阳性样本反差明显。酶标记抗原的方法较中和抗原的方法更具优势。捕获法缺点：原材料要求高。

43、TORCH国内外产品介绍项目生产厂家批准文号批准日期CMV-IgM北京现代高达国药准字S20060070 2006-11-22北京贝尔国药准字S20060003 2006-1-28达安基因（荧光PCR)国药准字S20060056 2006-6-23普生(天津)科技有限公司食药监械(准)字2008第3401004号2008-8-19上海中信亚特斯诊断试剂有限公司国食药监械(进)字2009第3400148号2009.01.22意大利DIESSE Diagnostica Senese 国食药监械(进)字2009第3400167号2009.01.22CMV-IgG上海中信亚特斯诊断试剂有限公司国食药监

44、械(进)字2008第3403565号2008.12.15RV-IgM北京现代高达国药准字S20070008 2007-4-2北京贝尔国食药监械（准）字第2007第3401343号2007-12-29上海中信亚特斯诊断试剂有限公司国食药监械(进)字2008第3403562号2008.12.15DIESSE Diagnostica Senese国食药监械(进)字2009第3400165号2009.01.22珠海经济特区海泰生物制药有限公司国食药监械(准)字2008第3401414号2008.12.24RV-IgG上海中信亚特斯诊断试剂有限公司国食药监械(进)字2008第3403564号2008.1

45、2.15美国美德声科学技术公司北京代表处国食药监械(进)字2009第3400305号2009.02.18国内批准上市的TORCH试剂盒目录项目生产厂家批准文号批准日期TOX- IgM珠海海泰国药准字S20020001 2002-1-4北京现代高达国药准字S20060099 2006-12-31北京贝尔国食药监械(准)字2008第3400988号2008.08.19上海中信亚特斯诊断试剂有限公司国食药监械(进)字2008第3403561号2008.12.15索林诊断（集团）有限公司国食药监械(进)字2007第3402146号2007.12.29康乃格诊断公司国食药监械(进)字2005第34013

46、39号2005.05.23TOX-IgG珠海海泰国药准字S200400192004-3-17TOX-CA浙江医学科学院国药准字S20030029 2003-2-13HSV-2 IgM北京贝尔生物工程有限公司国食药监械(准)字2008第3400990号2008.08.19北京现代高达国食药监械（准）字第2007第3401094号2007-11-12HSV IgM(1+2)上海中信亚特斯诊断试剂有限公司国食药监械(进)字2009第3400306号2009.02.18意大利DIESSE Diagnostica Senese国食药监械(进)字2009第3400168号2009.01.22HSV-IgG

47、(1+2)上海中信亚特斯诊断试剂有限公司国食药监械(进)字2009第3400307号2009.02.18HSV-2 PCR中山大学达安基因股份有限公司国食药监械(准)字2008第3400443号2008.03.31项目国外厂家检测方法RV-IgGAbbott微粒子酶联免疫荧光法(MEIA)RV-IgMAbbott微粒子酶联免疫荧光法(MEIA)CMV-IgGAbbott微粒子酶联免疫荧光法(MEIA)CMV-IgMAbbott微粒子酶联免疫荧光法(MEIA)TOX-IgGAbbott微粒子酶联免疫荧光法(MEIA)TOX-IgMAbbott微粒子酶联免疫荧光法(MEIA)HSV-1 IgGBi

48、oCheck酶联免疫间接法(ELISA)HSV-1 IgMBioCheck酶联免疫间接法(ELISA)HSV-2 IgGBioCheck酶联免疫间接法(ELISA)HSV-2 IgMBioCheck酶联免疫间接法(ELISA)RV-IgGBioCheck酶联免疫间接法(ELISA)RV-IgMBioCheck酶联免疫间接法(ELISA)CMV-IgGBioCheck酶联免疫间接法(ELISA)CMV-IgMBioCheck酶联免疫间接法(ELISA)TOX-IgGBioCheck酶联免疫间接法(ELISA)TOX-IgMBioCheck酶联免疫间接法(ELISA)国外有代表性的TORCH试剂盒

49、目录项目国外厂家检测方法RV-IgGBio-Rad酶联免疫间接法(ELISA)RV-IgMBio-Rad酶联免疫间接法(ELISA)CMV-IgGBio-Rad酶联免疫间接法(ELISA)CMV-IgMBio-Rad酶联免疫间接法(ELISA)RV-IgGBECKMAN磁珠酶免(间接)RV-IgMBECKMAN磁珠酶免(捕获)TOX-IgGBECKMAN磁珠酶免(间接)TOX-IgMBECKMAN磁珠酶免(捕获)HSV1-IgG/-IgM/-IgAViro Immun酶联免疫间接法(ELISA)HSV2-IgG/-IgM/-IgAViro Immun酶联免疫间接法(ELISA)RV-IgGViro Immun酶联免疫间接法(ELISA)RV-IgMViro Immun酶联免疫捕获法(immunocaptureassay)CMV-IgG/-IgM/-IgAViro Immun酶联免疫间接法(ELISA)TOX-IgAViro Immun酶联免疫间接法(ELISA)TOX-IgGViro Immun酶联免疫间接法(ELISA)TOX-IgMViro Immun酶联免疫捕获法(immunocapture