中药化学皂苷类化合物的提取分离技术

1、3.6 皂苷类化学成分的提取分离技术1 一、 结构与分类 二、 理化性质 三、 检识方法 四、 提取与分离方法2一、结构与分类（一）定义 该类化合物溶于水后，形成的水溶液经振摇后能产生大量持久性、似肥皂样的泡沫，这类化合物称为皂苷。3（二）分布1、甾体皂苷 主要分布薯蓣科、百合科、玄参科、菝契科、龙舌兰科等单子叶植物中。 2、三萜皂苷 三萜类(triterpenes)在自然界分布广泛，菌类、蕨类、单子叶、双子叶植物、动物及海洋生物中均有分布，尤以双子叶植物中分布最多。少数三萜类成分也存在于动物体，如从羊毛脂中分离出羊毛脂醇，从鲨鱼肝脏中分离出鲨烯；从海洋生物如海参、软珊瑚中也分离出各种类型的三

2、萜类化合物。 4（三）存在形式 多以游离或成苷成酯的形式存在 常见的糖：葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、鼠李糖，糖醛酸，特殊糖（如芹糖、乙酰氨基糖等） 糖链：单糖链、双糖链、三糖链 成苷位置：3、28（酯皂苷）或其它位-OH 次皂苷：原生苷被部分降解的产物5（四）研究进展与生物活性1、甾体皂苷类抗生育：杀灭精子、抗早孕 主要用作合成甾体避孕药和激素类药物的原料。 降血糖:伪原知母皂苷A和原知母皂苷A 降低胆固醇和免疫调节 抗真菌、杀虫等6防治心脑血管疾病： 地奥心血康胶囊含8种由黄山药中提取的甾体皂苷，总量在90%以上，治疗冠心病。 心脑舒通由蒺藜果实中提取的总甾体皂苷，用于心脑血管疾病的防治

3、。 盾叶冠心宁从盾叶薯蓣中提取的水溶性皂苷。抗肿瘤： 从百合科植物Ornithogalum saundersiae中分离出一种皂苷OSW-1,此化合物对人的正常细胞几乎没有毒性，而对恶性肿瘤细胞具有强烈毒性。体外生理活性实验表明，它的抗癌活性比目前临床应用的顺铂、紫杉醇等高100倍，有望成为一类新的抗癌药物。（四）研究进展与生物活性7（四）研究进展与生物活性2、三萜皂苷类人参皂苷能促进RNA蛋白质的生物合成，调节机体代谢，增强免疫功能。柴胡皂苷能抑制中枢神经系统，有明显的抗炎作用，并能减低血浆中胆固醇和甘油三酯的水平。 七叶皂苷具有明显的抗渗出、抗炎、抗淤血作用，能恢复毛细血管的正常的渗透性，

4、提高毛细血管张力，控制炎症，改善循环，对脑外伤及心血管病有较好的治疗作用。近30年来，三萜类成分的研究进展很快，特别是近10年从海洋生物中得到不少新型三萜化合物，是萜类成分研究中较为活跃的领域之一。8 （五）结构与分类按苷元结构分为两大类型:1、甾体皂苷：具有27个C的螺旋甾烷或异螺旋甾烷结构；2、三萜皂苷：具有30个C组成，由6个异戊二烯单位。91、甾体皂苷 由甾体皂苷元与糖组成，苷元具有27个碳，其基本碳架称为螺甾烷及其异构体异螺甾烷。 10以异螺甾烷为例，说明甾体皂苷元的结构特点11甾体皂苷元的结构特点 （1）分子中含有A、B、C、D、E、F六个环，A、B、C、D环为环戊烷骈多氢菲甾体母

5、核；C17位上侧链和C16骈合为五元含氧环（呋喃环E），E环上又以 连接六元含氧环（吡喃环F），共同组成螺旋甾烷结构。（2）甾核四个环的稠合方式为A/B顺式或反式，B/C和C/D均为反式。螺缩酮形式12甾体皂苷元的结构特点（3）所有的甾体皂苷元在C10、C13、C20和C25位都有一个甲基， 1) C10、C13位的甲基为角甲基，均为-型； 2) C20位甲基为-型; 3) 由于F环为椅式，C25位的甲基应有立方体异构，C25位为竖键时，为-型，其绝对构型为S型（L型），C25位甲基为平伏键时，为-型，其绝对构型为R型（D型）。13甾体皂苷元的结构特点（4）分子中有多个羟基，大多数在C3位上有

6、羟基，多为-型并常与糖结合成苷。（5）苷元上常含有羰基和双键，羰基常在C12位上，少数在C6和C11位上。双键常在5（6）、9（11）。（6）分子中有三个手性碳：C20、C22、C25 。（7）甾体皂苷分子大多不含羧基，呈中性，故甾体皂苷又称为中性皂苷。14甾体皂苷的结构分类1、糖链结合在C3-OH上（如知母皂苷A-和薯蓣皂苷）；2、糖链结合在C1-OH上：沿阶草皂苷D；3、两个糖链分别与甾体皂苷元上的C3和C1位置的羟基结合。4、两个糖链分别与甾体皂苷元上的C3-OH和F环开环后形成的-OH相结合。15甾体皂苷元结构举例162、三萜皂苷 是由30个碳组成的萜类化合物，由六个异戊二烯单位组成。

7、 三萜皂苷分子多含有-COOH，又称为酸性皂苷。 三萜皂苷的分类多按其苷元中30个碳组成环的数目多少，分为四环三萜皂苷和五环三萜皂苷。17（1）四环三萜皂苷 其基本骨架也是甾烷结构,A/B、B/C、C/D环均为反式稠合；C17连接8个碳原子支链，C4位上有偕二甲基，C10、C14位上各连有一甲基，根据C18甲基位置不同，又可将四环三萜皂苷元分成两类 ： 1）羊毛脂甾烷型 2）达玛烷型181）羊毛脂甾烷型 C10、C14位上各连有一个甲基，C4位上有二个甲基，另外一个甲基在羊毛甾烷型中位于C13位。19 从灵芝中分离出一个三萜化合物，具有扶正固本之功。它的结构与羊毛甾烷相比，多了3=O，11=O

8、，15=O，23=O，27-CH327-COOH，是羊毛脂甾烷的高度氧化化合物。202）达玛烷型与羊毛脂烷型区别：C18甲基连在C8位上。21举例：人参中含有人参皂苷(ginsenosides)22人参中的人参皂苷(ginsenosides)23由20(S)-原人参三醇衍生的皂苷有溶血性质，而由20(S)-原人参二醇衍生的皂苷则具对抗溶血的作用，因此人参总皂苷不能表现出溶血的现象。 由达玛烷衍生的人参皂苷，在生物活性上有显著的差异。24（2）五环三萜皂苷 基本母核为五个六元环（多氢蒎），根据E环变化可分为三种类型： 1）-香树脂烷型（齐墩果烷型） 2）-香树脂烷型 （乌苏烷型） 3）羽扇豆烷型

9、25 1）-香树脂烷型（齐墩果烷型） 基本碳架是多氢蒎的五环母核，环的构型为A/B反，B/C反，C/D反，D/E顺，其中C4、C20位上的均为偕二甲基，C8、C10、C17均为-型甲基，C14位上甲基为-型甲基。一般C3位上的羟基为-型，并与糖结合成苷。C28常有-COOH，C12、C13位往往有不饱和双键的存在。 26举例： （1） 齐墩果酸首先由油橄榄的叶子中分得，广泛分布于植物界，如在青叶胆全草、女贞果实等植物中游离存在，但大多数与糖结合成苷存在。齐墩果酸具有抗炎、镇静、防肿瘤等作用，是治疗急性黄胆性肝炎和慢性迁延性肝炎的有效药物。 含齐墩果酸的植物很多，但含量超过10%的很少，从刺五加

10、、龙牙葱木中提取齐墩果酸，得率都超过10%，纯度在95%以上，是很好的植物资源。 27举例：（2）甘草(Glycyrrhiza urlensis)中含有甘草次酸(glycyrrhetinic acid)和甘草酸(glycyrrhizic acid)又称甘草皂苷(glycyrrhizin )或甘草甜素。甘草酸具有肾上腺皮质激素样作用，能抑制毛细血管通透性，减轻过敏性休克的症状。可以降低高血压病人的血清胆甾醇。甘草次酸有促肾上腺皮质激素(ACTH)样作用，临床上用于抗炎和治疗胃溃疡。但只有18-H的甘草次酸才有此活性，18H者无此活性。 28举例：（3） 柴胡为伞形科柴胡属植物柴胡、狭叶柴胡以及同

11、属植物的干燥根。 柴胡中皂苷类成分主要为：柴胡皂苷A、C、D、E等。具有解热、镇痛、镇咳、抗炎等作用。292） -香树脂烷型（乌苏烷型） -香树脂烷型(-amyrane),又称为熊果烷型，其分子结构与齐墩果烷型不同之处是E环上两个甲基位置不同，即C20位的甲基移到C19位上。此类三萜大多是乌苏酸的衍生物。30 熊果酸（Ursolic acid） 植物来源：木犀科植物女贞(Ligustrum lucidum Ait.)叶药理作用： 熊果酸又名乌索酸，乌苏酸，属三萜类化合物。具有镇静、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗溃疡、降低血糖等多种生物学效应。 女 贞31熊果酸研发进展 近年来发现熊果酸具有抗致癌、抗

12、促癌、诱导F9畸胎瘤细胞分化和抗血管生成作用。研究发现：熊果酸能明显抑制HL60细胞增殖，可诱导其凋亡；能使小鼠的巨噬细胞吞噬功能显著提高。体内试验证明，熊果酸可以明显增强机体免疫功能。说明它的抗肿瘤作用广泛，极有可能成为低毒有效的新型抗癌药物。32 中药地榆 (Sanguisorba officinalis)具有凉血止血的功效，其中含有地榆皂苷B, E (sanguisorbin B and E)，是乌苏酸的苷。333）羽扇豆烷型 羽扇豆烷三萜类E环为五元碳环，且在E环19位有异丙基以构型取代，A/B、B/C、C/D及D/E均为反式。34白桦脂醇(betulin)存在于中草药酸枣仁、桦树皮、

13、棍栏树皮、槐花等中。 白桦脂酸(betulinic acid) 存在于酸枣仁、桦树皮、柿蒂、天门冬、石榴树皮及叶、睡菜叶等中。 羽扇豆醇(lupeol)存在于羽扇豆种皮中。35二、理化性质（一）性状 分子量大，多为白色，乳白色无定形粉末；无明显的熔点；具有苦而辛辣味；强吸湿性；（二）溶解性 1、多数皂苷易溶于水，热甲醇/乙醇、难溶于丙酮、乙酸乙酯、乙醚（含有多个糖分子、极性较大）。 2、在含水的丁醇和含水的戊醇中溶解度较大,因此丁醇与戊醇常作为自水溶液中分离皂苷萃取溶剂。 3、次级皂苷在水中的溶解度较原生苷低，易溶于醇，丙酮、乙酸乙酯中。 4、皂苷元亲脂性强。 5、具有助溶性。36（三）起泡性

14、又称表面活性1、具有表面活性剂的作用，能降低水溶液的表面张力。2、皂苷的水溶液经振摇能产生大量而持久性的泡沫，不因加热而消失（与蛋白质水溶液产生的泡沫相区别）；3、皂苷的起泡作用决定于皂苷分子中亲脂性的皂苷元部分及亲水性的多糖部分比例；4、皂苷水溶液振摇后产生的持久性泡沫与溶液的PH有关（区别中性皂苷和酸性皂苷）；（1）中性皂苷在碱性条件下产生较稳定的泡沫，在酸性的条件下泡沫不稳定；（2）酸性皂苷在碱性或酸性条件下，产生的泡沫的持久性相同。37（四）溶血性 皂苷的溶血作用是由于其可与胆甾醇生成不溶于水的复合物，生成沉淀，破坏了血红细胞的正常渗透，使血球内渗透压增加而发生崩解，产生溶血作用。 3

15、8（五）熔点与旋光性 皂苷的熔点较高，一般在熔解前就分解，所以一般测得的熔点是分解点，苷元的熔点随羟基数目的增加而升高。39（六）水解性 剧烈条件进行水解，一般用2-4mol/L的盐酸或硫酸，有时还需要加热或加压。由于水解条件剧烈，得到的往往不是真正的皂苷元，而是人工次生物。 为得到原生皂苷元可采用酶水解或Smith降解。40（七）沉淀反应皂苷的水溶液可以和一些金属盐类如铅盐、钡盐、铜盐等产生沉淀。 此性质可用于皂苷的分离：先用金属盐使皂苷沉淀下来，分离出来之后在对其分解脱盐。 如：三萜皂苷+PbAc2沉淀分解脱铅皂苷 缺点：铅盐吸附力强，容易带入杂质，并且在脱铅时铅盐也会带走一些皂苷，脱铅也

16、不一定能脱干净。 三萜皂苷为酸性皂苷，可用中性PbAc2沉淀，而甾体皂苷则为中性皂苷，须用碱性PbAc2沉淀。41（八）甾体皂苷可与甾醇形成分子复合物 甾体皂苷的乙醇溶液可被甾醇（常用胆甾醇）沉淀。 除胆甾醇外，凡是含有C3位OH的甾醇都可与皂苷结合生成难溶性分子复合物。若C3-OH为构型，或者是当C3-OH被酰化或生成苷键，就不能与皂苷生成难溶性的分子复合物。 生成的分子复合物用乙醚回流提取时，胆甾醇可溶于醚，但皂苷不溶，从而达到纯化皂苷和检查是否有皂苷成分的存在。42三、检识方法（一）显色反应（1）浓H2SO4-醋酐（Liebermann-burchard） 反应 样品溶于冰醋酸，加浓硫酸

17、-醋酐(1:20)，产生红 紫 蓝 绿 污绿等颜色变化，最后褪色。 甾体皂苷颜色变化快，在颜色变化的最后呈现污绿色；而三萜皂苷颜色变化稍慢，且不出现污绿色。 （2）氯仿-浓硫酸（salkawski）反应 将样品溶于氯仿，加入浓硫酸后，在氯仿层呈现红色或兰色，硫酸层有绿色荧光出现。 43（3）三氯醋酸（Rosen-Heimer）反应 样品溶液点于滤纸上，喷25%三氯醋酸乙醇溶液，加热至100，显红色紫色斑点。 （4）三氯化锑或五氯化锑反应 将样品醇溶液点于滤纸上，喷以20%三氯化锑（或五氯化锑）氯仿溶液（不应含乙醇和水）干燥后，60-70 加热，显黄色、灰蓝色、灰紫色斑点，在紫外灯下显蓝紫色荧光

18、（甾体皂苷则显黄色荧光）。 注意：五氯化锑腐蚀性很强，宜少量配置，用后倒掉。（5）冰醋酸-乙酰氯（Tschugaeff）反应 样品溶于冰醋酸，加乙酰氯数滴及氯化锌结晶数粒，稍加热，则呈现淡红色或紫红色。44（二）色谱检识亲水性强的皂苷：分配色谱 展开剂：极性大的溶剂（水饱和的正丁醇）亲脂性强的皂苷和皂苷元，用吸附或分配薄层均能得到较好的分离效果。451、吸附薄层吸附剂：硅胶展开剂：（亲脂性相对强一些）环已烷-乙酸乙酯（1：1），氯仿-丙酮（1：1）酸性皂苷：在展开剂中加入少量醋酸，防止产生拖尾现象；显色剂：三氯醋酸、浓硫酸或50%的硫酸，三氯化锑或五氯化锑等。462、纸色谱亲脂性皂苷/皂苷元：

19、固定相为甲酰胺；流动相为氯仿/苯；亲水性较大的苷：固定相为水；流动相为乙酸乙酯-吡啶-水（3：1：3） 显色剂：三氯化锑、五氯化锑、三氯醋酸-氯胺T等。 （三）其他检识方法1、泡沫试验 2、溶血试验47第二节 提取分离方法一、提取皂苷：用不同浓度的醇溶剂提取；再用石油醚、苯等亲脂性溶剂萃取，除去油脂、色素等脂溶性杂质；水溶液再用正丁醇萃取出皂苷成分。皂苷元：先将药材或提取出来的皂苷溶液加酸加热水解后，再用亲脂性有机溶剂提取； 注意 1、在剧烈的酸水解条件下，皂苷元可能发生异构化； 2、酸水解前先用酶水解，不但能缩短酸水解时间，还能提高皂苷元得率。48二、分离1、混合溶剂沉淀法（分段沉淀法）2、

20、胆甾醇沉淀法3、铅盐沉淀法4、色谱法4950第三节 应用甘草是豆科植物甘草属甘草等的干燥根及根茎。具有补脾益气、润肺止咳、缓急止痛、调和诸药功效。甘草中主要有效成分为甘草皂苷，甘草皂苷属-香树脂烷型三萜皂苷，称为甘草酸（甘草甜素）。51（一）甘草酸粗品的提取52（二）甘草酸单钾盐的制备53三）甘草次酸的制备541、皂苷类化合物A.分子较小，易结晶B.分子较大，不易结晶C.易溶于石油醚、苯、乙醚D.有升华性E.多数无溶血现象552、柴胡皂苷a是A.-香树脂烷型三萜类B.-香树脂烷型三萜类C.达玛烷型三萜类D.羊毛脂甾烷型三萜类E.甾醇类563、乌索酸结构类型是A.螺旋甾烷醇型B.-香树脂烷型C.

21、-香树脂烷型D.羽扇豆烷型E.达玛烷型574、人参皂苷元的主要结构类型是A.羊毛甾烷型B.呋甾烷型C.达玛烷型D.异螺旋甾烷型E.变形螺旋甾烷型585、甾体皂苷与三氯乙酸在滤纸上A.加热至60生成红色渐变为紫色B.加热至60生成黑色后逐渐退色C.加热至100生成红色渐变为紫色2D.不加热即有阳性反应E.加热至100以上也不显色596、甾体皂苷元A.由20个碳原子组成B.由25个碳原子组成C.由27个碳原子组成D.由28个碳原子组成E.由30个碳原子组成607、甘草皂苷是A.-香树脂烷型三萜类B.-香树脂烷型三萜类C.达玛烷型三萜类D.羊毛脂甾烷型三萜类E.甾醇类618、分离酸性皂苷和中性皂苷可选用的方法是A.丙酮沉淀法 B.冰醋酸-乙酰氯C.乙醚沉淀法D.有机溶剂萃取法 E.碱水萃取法629、原人参二醇是