疫学检测原理及临床应用课件

1、免疫学检测原理及临床应用疫学检测原理及临床应用1免疫学检测原理及临床应用疫学检测原理及临床应用1相关帮助需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎:fantibody全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库，其抗体信息数据来源于全球范围的研究机构与商业公司。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评价数据库两部分组成，以帮助研究者更高效的寻找并评估该抗体的性能。全球抗体搜索引擎是继基因与蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索平台需要相关的实验室仪器设备、生物试剂、医疗器械、制药设备、医药原料、体外诊断试剂及耗材与技术服务信息的，可以访问探生网进行咨询，期待您的加入疫学检测原理及临床

2、应用相关帮助需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全球抗体内容提要：概念基于抗原-抗体反应的检测方法免疫细胞检测免疫分子检测免疫学诊断与检测掌握：原理 临床应用疫学检测原理及临床应用内容提要：概念掌握：原理疫学检测原理及临床应用概念：免疫学细胞生物学分子生物学 应用：免疫相关疾病的诊断、病情检测和疗效评价等。抗原抗体免疫细胞细胞因子检测理论和方法定性 定量疫学检测原理及临床应用概念：免疫学抗原检测理论和方法定性 定量疫学检测原理及临床应第1节 基于抗原-抗体反应 （antigen antibody reaction）的检测方法 一、原理二、反应的特点三、影响因素四、基本检测方法疫学检测原

3、理及临床应用第1节 基于抗原-抗体反应 一、原理疫学检测原理及临床应用 一、原理1、抗原抗体反应的 特异性2、抗原抗体反应的 可见性 抗原抗体按适当比例结合，形成肉眼可见的现象。疫学检测原理及临床应用 一、原理1、抗原抗体反应的 特异性疫学检测原理及临床应用应 用1、利用已知抗原检测未知抗体（1）检测病原微生物的相应抗体以辅助诊断疾病： 伤寒病、流行性乙型脑炎、AIDS病等。（2）检测自身抗体诊断自身免疫病：SLE、类风湿性关节炎等2、利用已知抗体检测未知抗原（1）鉴定病原菌：诊断疾病（2）检测肿瘤相关抗原：检测甲胎蛋白以诊断肝癌（3）检测血型抗原、HLA抗原：鉴定血型，亲子鉴定（4）检测药物

4、半抗原： 确认运动员是否服用兴奋剂疫学检测原理及临床应用应 用1、利用已知抗原检测未知抗体（1）检测病原微生物的相（一）抗原-抗体结合反应的特点特异性带现象与可见性可逆性取决于抗原表位与抗体高变区结合部位空间构型的互补的程度亲和力（affimity）亲合力（avidity）疫学检测原理及临床应用（一）抗原-抗体结合反应的特点特异性取决于抗原表位与抗体高变抗原抗体结合的带现象与可见性（一）抗原-抗体结合反应的特点疫学检测原理及临床应用抗原抗体结合的带现象与可见性（一）抗原-抗体结合反应的特点疫可逆性：（一）抗原-抗体结合反应的特点低pH值高浓度盐冻融等AgAb解离取决于亲和力大小疫学检测原理及临

5、床应用可逆性：（一）抗原-抗体结合反应的特点低pH值AgAb解离取疫学检测原理及临床应用疫学检测原理及临床应用（二）抗原抗体反应的影响因素电解质酸碱度温度抗原抗体的性质疫学检测原理及临床应用（二）抗原抗体反应的影响因素电解质疫学检测原理及临床应用1.电解质： 亲水性-疏水性 失去电荷-发生凝集（二）抗原抗体反应的影响因素疫学检测原理及临床应用1.电解质：（二）抗原抗体反应的影响因素疫学检测原理及临床应2、酸碱度： 最适pH值：68 假阳性 假阴性（二）抗原抗体反应的影响因素疫学检测原理及临床应用2、酸碱度：（二）抗原抗体反应的影响因素疫学检测原理及临床应3.温度： 适当温度-增加碰撞机会 加快

6、结合速度 37（二）抗原抗体反应的影响因素疫学检测原理及临床应用3.温度：（二）抗原抗体反应的影响因素疫学检测原理及临床应用4、抗原和抗体的性质 关键因素-特异性和亲和力 决定因素-二者的比例（二）抗原抗体反应的影响因素疫学检测原理及临床应用4、抗原和抗体的性质（二）抗原抗体反应的影响因素疫学检测原理（三） 抗原或抗体的检测方法 凝集反应沉淀反应补体参与的反应免疫标记技术疫学检测原理及临床应用（三） 抗原或抗体的检测方法 凝集反应疫学检测原理及临床应 （一）凝集反应（agglutination） 颗粒性抗原（红细胞、细菌、 乳胶颗粒等）与抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。疫学检测原理及临床

7、应用 （一）凝集反应（agglutination） 颗粒性抗1、直接凝集(direct agglutination)2、间接凝集 （indirect agglutination） 3、间接凝集抑制试验（in direct agglutination inhibition test）4、协同凝集试验 （co-agglutination test） （一）凝集反应（agglutination）疫学检测原理及临床应用1、直接凝集(direct agglutination) （二）沉淀反应（precipitation） 可溶性抗原（免疫球蛋白、细胞裂解物、组织浸液等）与相应抗体结合， 形成不溶性免疫复

8、合物，出现不透明的沉淀物。多在半固体琼脂凝胶上进行，形成白色的沉淀。疫学检测原理及临床应用（二）沉淀反应（precipitation） 1、单向免疫扩散（single immunodiffusion）常用于测定IgG、IgM、IgA、C3、C4等。沉淀环抗体混于琼脂凝胶中制板环的直径与抗原含量成正相关疫学检测原理及临床应用1、单向免疫扩散（single immunodiffusi2、双向免疫扩散（doule immunodiffusion）：常用于抗原或抗体的定性检测、组成和两种抗原相关性分析。疫学检测原理及临床应用2、双向免疫扩散（doule immunodiffusion3、免疫电泳（im

9、munoelectrophoresis）对流免疫电泳(counterimmunoelectrophoresis)疫学检测原理及临床应用3、免疫电泳（immunoelectrophoresis）对4、免疫比浊法（immunonephelomtry）：快速简便。用于血清IgG、IgA、IgM、 补体C3、C4含量测定疫学检测原理及临床应用4、免疫比浊法（immunonephelomtry）：快速简 （三）补体参与的抗原抗体反应1、50 %补体溶血试验（CH50测定） 血清总补体量测定2、补体结合试验(complement fixation test)：检测抗原或抗体。原理：用已知的指示系统检测试验

10、系统是否结合补体进行诊断试验原理？检测系统：待测样品和已知抗原（或抗体）指示系统：SRBC和溶血素溶血阴性；不溶血阳性补体疫学检测原理及临床应用 （三）补体参与的抗原抗体反应1、50 %补体溶血试验（CH 用标记物标记抗体或抗原进行抗原抗体反应借以提高免疫学诊断的敏感性荧光素 ：异硫氰酸荧光素（黄绿色荧光）、藻红蛋白、 罗丹明（红色荧光）放射性同位素： 125I、131I酶：辣根过氧化物酶、硷性磷酸酶免疫荧光检测法（IFA）放射免疫检测法（RIA）酶免疫检测法（EIA） （四）免疫标记技术液相（ELISA）、固相（免疫组化技术）疫学检测原理及临床应用 用标记物标记抗体或抗原进行抗原抗体反应借以

11、提1、免疫荧光法（immunofluorescence,IF）用荧光标记抗体，再与待检标本中抗原反应那个，所形成的抗原抗体复合物在荧光显微镜下散发荧光，借此对抗原进行定性和定量。疫学检测原理及临床应用1、免疫荧光法（immunofluorescence,IF间接ELISA双抗夹心法2、酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA法）疫学检测原理及临床应用间接ELISA双抗夹心法2、酶联免疫吸附试验疫学检测原理及临 抗细胞因子的抗体包被（1）（2）（3）（4）抗原包被用于效应细胞分泌的单一细胞因子的测定，也可测定分泌特异抗体的B细胞的频数。疫

12、学检测原理及临床应用 抗细胞因子的抗体包被（1）（2）（3）（4）抗原包被用于效 BAS-ELISA法（ biotin-avidin-system，生物素-抗生物素系统-ELISA法）：敏感性更高。用于抗原抗体以及DNA、RNA的检测。卵白及某些微生物中的蛋白质疫学检测原理及临床应用 BAS-ELISA法（ biotin-avidin3、免疫组化 (immunohitochemistry)应用标记的抗体与组织或细胞抗原反应，借助形态学观察，对组织或细胞表面抗原进行定性、定量、定位检测。疫学检测原理及临床应用3、免疫组化 (immunohitochemis4、放射免疫测定法 （radioimmu

13、nassay,RIA）用发射性核素标记抗体或抗原进行免疫学检测。疫学检测原理及临床应用4、放射免疫测定法 （radioimmunassay5、化学发光免疫分析（chemiluminescence immunoassay）将发光物质标记抗原或抗体，发光物质在反应剂激发下生成激发态中间体，当回复至稳定的基态时发射光子，通过自动发光分析仪测定管子参量，可反应样品中抗体或抗原含量。疫学检测原理及临床应用5、化学发光免疫分析（chemiluminescence 6、免疫印记法（immunoblotting）又称western 印记法：结合凝胶电泳和固相免疫技术，将借助电泳所区分的蛋白质转移至固相载体，在

14、应用酶免疫、放射免疫等技术进行检测。疫学检测原理及临床应用6、免疫印记法（immunoblotting）又称west第2节 免疫细胞检测机体免疫功能状态的重要指标免疫细胞来源-外周血疫学检测原理及临床应用第2节 免疫细胞检测机体免疫功能状态的重要指标疫学检测原理及（一）免疫细胞及其亚类计数1、淋巴细胞的分离：外周血葡聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法白膜层单核细胞淋巴细胞BT吸附分离过尼龙毛柱分离疫学检测原理及临床应用（一）免疫细胞及其亚类计数1、淋巴细胞的分离：外周血葡聚糖-（1）尼龙棉柱分离法 B细胞滞留与柱上 T细胞流出（2）E花环分离法成熟人T细胞表面有CD2，绵羊红细胞的受体2、淋巴细胞亚

15、群的分离疫学检测原理及临床应用（1）尼龙棉柱分离法2、淋巴细胞亚群的分离疫学检测原理及临床（3）洗淘法（panning）（4）流式细胞仪（flowcytometry,FCM）（5）磁珠分离法： 用抗CD4交联的微珠可将T细胞 中的CD4+T细胞与CD8+T细胞分。疫学检测原理及临床应用（3）洗淘法（panning）（4）流式细胞仪（flowc3、淋巴细胞亚群计数免疫荧光计数微量细胞毒试验疫学检测原理及临床应用3、淋巴细胞亚群计数免疫荧光计数疫学检测原理及临床应用 （二）淋巴细胞功能测定1、测定淋巴细胞功能的体外试验（1）T细胞增殖试验（淋转）：丝裂原、抗CD3单克隆抗体等能非特异地激活T细胞，

16、使之发生转化增殖，计算淋巴母细胞转化率（正常值6580%） 疫学检测原理及临床应用 （二）淋巴细胞功能测定1、测定淋巴细胞功能的体外试验（1）1、细胞增殖试验具体方法形态学观察法3H-TdR渗入法：用液体闪烁仪测定样品的射线放射活性 MTT法疫学检测原理及临床应用1、细胞增殖试验具体方法形态学观察法疫学检测原理及临床应用检测CTL、NK、 LAK、TIL细胞杀伤靶细胞的功能51Cr释放法乳酸脱氢酶释放法 细胞凋亡检查法：TUNEL法（TdT dependent dUTP-biotin nick end labeling）、FACS测定法（2）淋巴细胞介导的细胞毒试验（LMC）疫学检测原理及临床

17、应用检测CTL、NK、 LAK、TIL细胞杀伤靶细胞的功能（3）分泌功能测定检测细胞因子分泌细胞检测抗体形成细胞2、测定淋巴细胞功能的体内试验结合菌素试验迟发型超敏反应疫学检测原理及临床应用（3）分泌功能测定检测细胞因子分泌细胞2、测定淋巴细胞功能的迟发型超敏反应：旧结核菌素试验（ OT试验 ） 皮试（+）有一定的细胞免疫能力 皮试（）细胞免疫功能缺损疫学检测原理及临床应用迟发型超敏反应：旧结核菌素试验（ OT试验 ） 疫学检测原理第3节 免疫分子检测（一）免疫球蛋白测定1、体外用已知抗原检测相应抗体2、用已知抗体定性、定量测定各类免疫球蛋白疫学检测原理及临床应用第3节 免疫分子检测（一）免疫

18、球蛋白测定疫学检测原理及临床应（二）补体测定免疫比浊法ELISARIA疫学检测原理及临床应用（二）补体测定免疫比浊法疫学检测原理及临床应用（三）细胞因子检测1.免疫学测定法鉴定分离的淋巴细胞亚群，监测某些疾病状态的细胞免疫功能。IL-2、IL-2R、rIFN 、TNF等检测ELISA法 生物活性测定法 聚合酶链反应（PCR）法疫学检测原理及临床应用（三）细胞因子检测1.免疫学测定法疫学检测原理及临床应用（三）细胞因子检测2.生物活性测定法 原理：不同细胞因子具有特定的生物学活性，借助相应指示系统与之反应，从结果得知细胞因子的活性疫学检测原理及临床应用（三）细胞因子检测2.生物活性测定法疫学检测

19、原理及临床应用2.生物活性测定法促进细胞增殖和增殖抑制法抗病毒活性测定法直接杀伤法趋化活性测定法3.分子生物学测定法PCR疫学检测原理及临床应用2.生物活性测定法促进细胞增殖和增殖抑制法3.分子生物学测（四）CD分子、表面受体和粘附分子的测定（五）HLA分型疫学检测原理及临床应用（四）CD分子、表面受体和粘附分子的测定（五）HLA分型疫学第23章 免疫学防治免疫学预防免疫学治疗疫学检测原理及临床应用第23章 免疫学防治免疫学预防疫学检测原理及临床应用（一）人工主动免疫（artificial active immunization）用疫苗、类毒素接种机体，使之产生特异性的免疫，从而预防感染的措施

20、。一、人工免疫免疫预防疫学检测原理及临床应用（一）人工主动免疫一、人工免疫免疫预防疫学检测原理及临床应用 人工主动免疫常用制剂疫苗、类毒素 死疫苗（灭活疫苗）是选用免疫原性强的病原体，经理化方法使其失去活力制备而成的疫苗。伤寒菌、百日咳杆菌、霍乱弧菌、钩端螺旋体、流感病毒、狂犬病病毒、乙脑病毒疫苗均为灭活疫苗。 减毒活疫苗：是用减毒或无毒力的活病原体制成的疫苗。脊髓灰质病毒、卡介苗、麻疹病毒疫苗是常用的减毒活疫苗。 类 毒 素：细菌外毒素经甲醛处理后，失去毒性而保留其免疫原性即为类毒素。常用的类毒素有破伤风类毒素、白喉类毒素等。疫学检测原理及临床应用53 人工主动免疫常用制剂疫苗、类毒死疫苗和活疫苗的比较死疫苗活疫苗接种途径多采取皮下注射多为模拟自然感染途径、少数经皮下注射接种剂量较大较小接种次数二次或多次一般 只需一次免疫效果较差可靠免疫力维持时间数月1年长达35年以上疫苗保存易于保存不易保存不良反应较大较小制品类型可多种疫苗混合使用一般单独使用疫学检测原理及临床应用死疫苗和活疫苗的比较死疫苗活疫苗接种途径多采取皮下注射多为模（二）新型疫苗亚单位疫苗 乙肝表面抗原制备乙肝疫苗结合疫苗合成肽疫苗基因工程疫苗（三）核酸疫苗疫学检测原理及临床应用（二）新型疫苗亚单位疫苗（三）核酸疫苗疫学检测原理及临床应用 人工被动免疫 是给人体注射含