分子诊断策略与常用技术培训课件

1、分子诊断策略与常用技术分子诊断策略与常用技术 一、分子诊断的概念和特点 概念： 利用现代分子生物学和分子遗传学的技术和方法，通过检测基因结构或其表达水平是否正常，从而对人体健康状态和疾病作出诊断的方法。 传统的诊断：表现型基因型 基 因 诊 断：基因型表现型 （ 逆向诊断）2分子诊断策略与常用技术 一、分子诊断的概特点特异性强灵敏度高早期诊断性 适应性强一、分子诊断的概念和特点检测致病基因突变；分析与疾病连锁的遗传标志；建立多基因疾病表型克隆；定量分析致病基因的表达水平 已明确疾病表型与基因型的关系分子诊断的前提3分子诊断策略与常用技术特点一、分子诊断的概念和特点检测致病基因突变；分析与疾病连

2、锁二、分子诊断策略直接诊断直接检测致病基因的突变 基因突变类型缺失、点突变、重复、插入等间接诊断应用DNA多态性为遗传标记进行连锁分析，确定待测者是否得到带有致病的染色体，从而间接地作出诊断 DNA多态RFLP、VNTR、SNP4分子诊断策略与常用技术二、分子诊断策略直接诊断直接检测致病基因的突变间接诊断DNA多态（DNA Polymorphism） 群体中每个个体DNA区域中等位基因（或片段）存在两种或两种以上的形式，对基因功能没有影响，称DNA多态。DNA分析中常用的遗传性多态性标记有3类：1）RFLP：称限制性片段长度多态性，为第一代多态性标记；2）重复序列多态性（VNTR）：如STR其

3、重复次数在人群中存在变异，形成多态即 VNTR ，为第二代多态性标记；3）单碱基多态性（SNP）：发生在基因组中的单个核苷酸的替代，为第三代多态性标记。二、分子诊断策略5分子诊断策略与常用技术DNA多态（DNA Polymorphism）二、分子诊断策三、分子诊断常用技术核酸分子杂交技术等位基因特异寡核苷酸探针(allele specific oligonucleotide, ASO)DNA限制性长度多态性(restriction fragment length polymorphism, RLFP)分析PCR-SSCPDNA测序 DNA芯片技术 6分子诊断策略与常用技术三、分子诊断常用技术核

4、酸分子杂交技术 6分子诊断策略点突变（C to T）5335G53引物1引物2探针1探针2A等位基因特异寡核苷酸探针（ASO） 7分子诊断策略与常用技术点突变（C to T）5335G53引物1引物2分子诊断策略与常用技术培训课件RLFP分析法9分子诊断策略与常用技术RLFP分析法9分子诊断策略与常用技术RFLP分析 优点 分辩率高，无需标记,重复性好，简便快速直观 主要用于核酸变异分析比较, 微生物的分群分型，癌基因分析，遗传病的诊断等。 局限 只能应用突变引起限制性酶切位点改变筛选，检测效率低。10分子诊断策略与常用技术RFLP分析 优点10分子诊断策略与常用技术 原理 将经扩增的DNA片

5、段变性形成单链，由于序列不同，单链构象就有差异，在中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳的迁移率不同，通过与标准物的对比，即可检测出有无变异。 优点 检测基因变异，具有操作简便、快速特点，不需特殊设备，适用于大样本筛选。 己广泛应用于检测各种病原体基因的点突变及缺失突变，基因的多态性分析等。PCR/单链构象多态性分析（SSCP）11分子诊断策略与常用技术 原理PCR/单链构象多态性分析（SSCP）11分子诊断策略（ PCR-SSCP）示意图12分子诊断策略与常用技术（ PCR-SSCP）示意图12分子诊断策略与常用技术DNA测序13分子诊断策略与常用技术DNA测序13分子诊断策略与常用技术DNA自动测序结果

6、举例14分子诊断策略与常用技术DNA自动测序结果举例14分子诊断策略与常用技术DNA芯片技术15分子诊断策略与常用技术DNA芯片技术15分子诊断策略与常用技术四、分子诊断的应用及举例遗传疾病肿瘤感染性疾病判断个体疾病易感性器官移植组织配型法医学中个体识别、亲子鉴定16分子诊断策略与常用技术四、分子诊断的应用及举例遗传疾病16分子诊断策略与常用技术Mst酶切位点(CCTNAGG)53正常基因53突变基因1.15kb1.35kb镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析GAG GTG 谷Aa缬Aa17分子诊断策略与常用技术Mst酶切位点(CCTNAGG)53正常基因53+0.2kb1.15kb1.35kb正常人突变携带着患者镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析18分子诊断策略与常用技术+0.2kb1.15kb1.35kb正常人突变携带着患者镰 Normal Gene Probe与正常 Probe 杂交稳定 Mutation S Gene Probe与异常 S杂交 稳定 镰状红细胞贫血患者基因组的ASO探针杂交19分子诊断策略与常用技术 Normal Gene Probe与正常 斑点杂交结果：镰状红细胞贫血患者基因组的ASO探针杂交/ /S S/S正常探针异常探针20分子诊断策略与