G兼性厌氧杆菌培训课件

1、G兼性厌氧杆菌G兼性厌氧杆菌第一节 肠杆菌科（有28个属）共同特征：1G中等大小杆菌，运动者周身鞭毛，无芽胞，无荚膜（个别有），非抗酸染色。2需氧兼性厌氧，普通培养基上生长好。3糖发酵产酸（+）或产酸产气。4接触酶阳性（志贺氏菌除外）。5硝酸盐还原试验阳性（欧文氏菌除外）6在含0.5%胆盐的培养基上生长。G兼性厌氧杆菌2第一节 肠杆菌科（有28个属）G兼性厌氧杆菌2一、埃希氏菌属 本属有5个种：大肠埃希氏菌，蟑螂菌，费格森菌，赫曼氏菌，伤口菌。其中最重要的是大肠菌，俗称大肠杆菌。（一）形态及染色特征 G中等大小杆菌，八根鞭毛，能运动，无芽胞，无荚膜但常有微荚膜。G兼性厌氧杆菌3一、埃希氏菌属G

2、兼性厌氧杆菌3（二）培养特性1普通培养基上：生长良好，37 24h 形成圆形，光滑，隆起，湿润，半透明灰白色菌落。2普通肉汤：均匀浑浊，管底有粘性沉淀，管壁有菌环。3麦康凯琼脂：红色菌落（沙门氏菌无色）原理，麦康凯平板含有乳糖有胆盐，分解乳糖的细菌产酸使指示剂变红，胆盐有利于肠杆菌科细菌生长，对其它菌有抑制作用。G兼性厌氧杆菌4（二）培养特性G兼性厌氧杆菌4大肠杆菌微菌落照片 G兼性厌氧杆菌5大肠杆菌微菌落照片 G兼性厌氧杆菌5大肠杆菌革兰氏染色照片大肠杆菌平板菌落照片G兼性厌氧杆菌6大肠杆菌革兰氏染色照片G兼性厌氧杆菌64伊红美蓝琼脂：黑色带金属闪光的菌落（沙门氏菌无色）。原理：伊红，美兰均

3、为指示剂，又能抑G+生长，含有乳糖。大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷，染上红色，再与美兰结合形成紫黑色菌落，不分解乳糖不着色，伊红美蓝不结合，故沙门氏菌无色。5远藤氏琼脂：带金属光泽的红色菌落。G兼性厌氧杆菌74伊红美蓝琼脂：黑色带金属闪光的菌落（沙门氏菌无色）。G兼6SS琼脂（沙门氏菌志贺氏菌分离培养基）：红色小菌落。7三糖铁（TSI）：斜面黄色，底部黄色，不产生H2S。 原理：三糖铁含葡萄糖、乳糖，蔗糖。其中乳糖、蔗糖含量为G的10倍，大肠杆菌三种糖均发酵产酸，足以使底部和斜面变黄。沙门氏菌不发酵乳糖和蔗糖，只发酵G产酸，斜面部分先变黄，但产酸量少且接触空气又受到氧化，另外分解含氮物质产

4、碱，所以斜面又变为红色，而下端的酸不被氧化，一直呈黄色。G兼性厌氧杆菌86SS琼脂（沙门氏菌志贺氏菌分离培养基）：红色小菌落。G（三）生化特征G 乳 麦 蔗 靛基质实验：+（I） ； MR（甲基红试验）+（M）VP（乙酰甲基醇）（Vi）； 柠檬酸基利用试验（C）I M Vi C + + 硝酸盐还原试验+ 、 H2S 、 尿素分解三糖铁：斜面黄色/底部黄色，不产生H2S。G兼性厌氧杆菌9（三）生化特征G兼性厌氧杆菌9（四）抗原构造及血清型： 大肠杆菌抗原主要有O抗原（菌体抗原，有173种），K抗原（被膜或荚膜抗原，有80种），H抗原（鞭毛抗原，有56种）。1O抗原：存在于细胞壁中，由脂多糖（LP

5、S）中的特异性多糖侧链组成，O抗原是S型菌的一种耐热菌体抗原，121 2h不破坏其抗原性，当S型菌丢失特异性多糖侧链时，即变为R型菌，O抗原也随之丢失。G兼性厌氧杆菌10（四）抗原构造及血清型：G兼性厌氧杆菌102K抗原：位于菌体表面的荚膜或被膜中，在80种K抗原中，除K88，K99是两种蛋白质抗原外，其余均为多糖。具有K抗原的菌株不能被其相应的抗O血清所凝集叫“O不凝集性”。因为K抗原可抑制活细菌在相应抗O血清中的凝集反应，这样可作为判定大肠杆菌是否具有K抗原的一个标准。据耐热性不同，K抗原又分为：L、A、B 三型。G兼性厌氧杆菌112K抗原：位于菌体表面的荚膜或被膜中，在80种K抗原中，除

6、L型K抗原：对热敏感100 1h破坏其抗原性，并失去与相应抗体的结合力和凝集性，位于被膜中，偶见于荚膜中。A型K抗原：耐100 1h ，但121 2.5h破坏其抗原性和O不凝集 性，但保留与相应抗体结合能力。位于荚膜中，抗A血清可使具有相应A抗原的菌体出现荚膜肿胀现象。B型K抗原：100 1h 破坏其抗原性与相应抗体的凝集性，但保留其与相应抗体结合力。G兼性厌氧杆菌12L型K抗原：对热敏感100 1h破坏其抗原性，并失去与相应3H抗原：不耐热，是一种蛋白质，抗原性好，80破坏其抗 原性，每一个有动力的细菌仅含一种H抗原，且无两相变异，无鞭毛细菌无H抗原。根据大肠杆菌抗原的鉴定，可用OKH排列表

7、示其血清型即大肠杆菌抗原结构式： O8K23（L）H19表示该菌具有O抗原8，L型K抗原23，H抗原为19。G兼性厌氧杆菌133H抗原：不耐热，是一种蛋白质，抗原性好，80破坏其抗 （五）致病性 大多数是在正常条件下不致病的共栖菌，但特定条件下，如移位侵入肠外组织或器官可致肠杆菌病；但也有极少数是病原性大肠杆菌。G兼性厌氧杆菌14（五）致病性G兼性厌氧杆菌14据毒力因子与发病机制不同可分五类：（1）产肠毒素大肠杆菌（ETEC）：引起人和幼畜腹泻（黄痢）。（2）产类志贺毒素大肠杆菌（SLTEC）：引起猪水肿病，犊牛出血性肠炎。（3）肠致病性大肠杆菌（EPEC）：兔腹泻，猪腹泻。（4）败血性大肠杆

8、菌（SEPEC）：猪，犊牛败血症，鸡的大肠杆菌败血症，气肠炎，脑膜炎，肠炎，肉芽肿。（5）尿道致病性大肠杆菌（UPEC）：犬、猪的尿道感染。 G兼性厌氧杆菌15据毒力因子与发病机制不同可分五类：G兼性厌氧杆菌15（一）产肠毒素大肠杆菌：由粘附表性菌毛和肠毒素两类毒力因子构成，具致病力与二者密切相关，缺一不可。1粘附素性菌毛：又叫粘附素或定居因子，其对应的抗原叫粘附素抗原或定居因子抗原。已发现的粘附素有F4（K88）、F5（K99）、F6（987P），F41，F42，F17。它不是导致宿主腹泻的直接致病因子，但是构成ETEC感染的重要毒力因子。ETEC必须首先粘附于宿主的小肠上皮细胞，才能避免肠

9、蠕动和肠液分泌的清除作用，并得以在肠内定居和繁殖，进而发挥致病作用。2 在体内或体外生长时产生并分泌到细胞外的一种蛋白质毒素，根据对热的耐受性不同分为：G兼性厌氧杆菌16（一）产肠毒素大肠杆菌：由粘附表性菌毛和肠毒素两类毒力因子构不耐热肠毒素（LT）：65 30min灭活，有抗原性。作用于小 肠和兔回肠引起肠液积蓄，引起水样腹泻。耐热肠毒素（ST）：100 30min不灭活，无抗原性。又可分为： STa：来源猪，牛ST：对人和猪、牛、羊均有肠毒性。 ST b：来源于人ST：仅在猪源ETEC中产生。ETEC的致病机理：通过口腔进入宿主的小肠，以其菌毛粘附素黏附于肠粘膜上，以抵御肠蠕动和流动肠液的

10、冲刷作用，从而定居于肠内，大量繁殖。此时大量产生并释放肠毒素，对其靶细胞产生毒性作用。导致肠绒毛细胞吸收功能降低，造成在肠管内水和电解质大量积蓄，引起水样腹泻和迅速脱水。G兼性厌氧杆菌17不耐热肠毒素（LT）：65 30min灭活，有抗原性。作（二）产类志贺毒素大肠杆菌（SLTEC）又称产Vero细胞毒素大肠杆菌，系一类在体内或体外生长可产生类志贺毒素的病原性大肠杆菌。可致猪的水肿，以头部，肠素膜和胃壁浆液性水肿为特征，常伴有共济失调，麻痹或惊厥等神经症状，发病率低但致死率高，有两类毒力因子：1粘附性菌毛：F18，它有助于细菌在猪肠粘膜上皮细胞定居和繁殖。G兼性厌氧杆菌18（二）产类志贺毒素大

11、肠杆菌（SLTEC）G兼性厌氧杆菌182致水肿病2型类志贺毒素（SLT-2e）：是蛋白质性细菌毒素，用粗制的或纯化的SLT-2e静脉或腹腔注射适龄仔猪，可复制出水肿病，SLT-2e是致该病发生的主要毒素因子。SLTEC的致病机理：以F18菌毛粘附于小肠上皮细胞，定居和繁殖的细菌在肠内产生SLT-2e并被吸收，造成细胞死亡和组织病变。另外，SLT-2e也是一种血管毒素，可引起血管内皮组织损伤，改变血管的通透性，导致猪出现水肿和典型的神经症状。神经症状是由脑水肿所致并非毒素对神经细胞直接作用。 G兼性厌氧杆菌192致水肿病2型类志贺毒素（SLT-2e）：是蛋白质性细菌毒（六）微生物诊断1取材：肠系

12、膜淋巴结，心，肝，脾，涂片染色镜检：G中等大小杆菌。2分离培养：接种麦康凯平板和血平板划线分离，挑取麦康凯上的红色菌落或血平板上呈溶血的菌落（仔猪黄痢与水肿病菌株）进行以下生化实验。3三糖铁：斜面黄色/底部黄色，有气体产生。4接种普通肉汤：2436h 均匀混浊，底部有粘稠沉淀，液面有菌环。5生化试验： G 蔗 麦 乳 IMViC + + - -6动物致病性试验：24h 肉汤培养小白鼠腹腔0.2-0.4ml，2448h小鼠死亡。G兼性厌氧杆菌20（六）微生物诊断G兼性厌氧杆菌207对ETEC各种粘附性抗原鉴定：应先将待检菌在粘附素专用培养基上培养。培养物用已知的各种粘附素单因子血清或克隆抗体作玻

13、板凝集，或用免疫荧光，ELISA等作其它血清学方法鉴定，也可用MRH及其抑制试验MRHI以及体外肠上皮细胞吸附与吸附抑制试验加以鉴定。G兼性厌氧杆菌217对ETEC各种粘附性抗原鉴定：应先将待检菌在粘附素专用培8对ETEC肠毒素的检测：LT检测方法有 Y1小鼠肾上腺细胞或中国仓鼠卵巢细胞（CHO）培养法，平板免疫溶血试验，夹心红细胞免疫试验，夹心ELISA，兔回肠结扎试验，兔皮肤蓝斑试验法。ST检测方法有乳鼠胃内投服试验GM1-ELISA。9对SLT-2e检测：用该毒素的粗提或纯化物作Vero细胞毒性试验和小鼠神经毒性试验，并以STI-2e血清或单抗作中和试验鉴定之。G兼性厌氧杆菌228对ET

14、EC肠毒素的检测：LT检测方法有 Y1小鼠肾上腺（七）防治1以抗粘附毒素免疫为基础的含单价或多价菌毛抗原的灭活菌苗或亚单位苗。2以抗肠毒素免疫为主的类毒素苗或LI-B亚单位苗。3表达一种或两种粘附素的基因工程苗 K88 K99双价基因工程苗。G兼性厌氧杆菌23（七）防治G兼性厌氧杆菌23二、沙门氏菌属 沙门氏菌属是肠杆菌科一个大属，有2500多个血清型，寄生于人及动物肠道，引起各种疾病。（一）形态染色特征 G中等大小杆菌，除鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌外，都有鞭毛，能运动，无芽胞，无荚膜。G兼性厌氧杆菌24二、沙门氏菌属G兼性厌氧杆菌24（二）培养特性麦康凯平板：无色菌落，伊红美蓝琼脂：无色（大肠杆

15、菌黑色带金属光泽）运腾氏：无色（大肠杆菌为红色带金属闪光菌落）。（三）生化特性：三糖铁斜面：斜面红色/底部黄色（若有H2S产生，底部为黑色）5生化试验： G 蔗 麦 乳 IMViC - + - + G兼性厌氧杆菌25（二）培养特性G兼性厌氧杆菌25（四）抗原及变异具有O，H，K和菌毛4种抗原。O和H抗原是其主要抗原，构成血清型鉴定的物质基础。1O抗原：细胞壁表面的耐热多糖抗原，100 2.5h不被破坏，一个菌体可有几种O抗原，以小写阿拉伯数字表示。将具有共同O抗原的各个血清型菌归入一群，以大写英文字母表示，如A（含有共同O2抗原），B（O4），C1C4，D1D3HZ共计51个O群，包括58种O

16、抗原。G兼性厌氧杆菌26（四）抗原及变异G兼性厌氧杆菌262H抗原：蛋白质性质的鞭毛抗原，有63种。H抗原可分为第1相和第2相两种。第1相H抗原用小写英文字母表示，特异性高故称特异相；第2相抗原用阿拉伯数字表示，为许多沙门氏菌所共有故称非特特异相。多数沙门氏菌有第1和第2两相H抗原称为双相菌，常发生位相变异。例如将一个双相菌在平板上划线在所得菌落中，有的有第1相H抗原，有的有第2相H抗原。若任意挑取1个菌落，在培养基上多次传代，其后代又可出现部分是第1相而另一部分是第2相的菌落，这种两个相的H抗原可以交相产生的现象称为位相变异。在鉴别对只能检出1个相，而测不出另一个相。G兼性厌氧杆菌272H抗

17、原：蛋白质性质的鞭毛抗原，有63种。H抗原可分为第13K抗原：被膜抗原，与毒力有关，又称Vi抗原，60 1h破坏其凝集性和免疫原性。有K抗原的菌株不能相应的抗O血清凝集。在多次传代后K抗原会丢失。用已知的沙门氏菌O和H单因子血清作玻板凝集试验，确定一个沙门氏血清型或抗原，对有K抗原的还须用K抗血清鉴定之。如鼠伤寒沙门氏菌血清型为：1，4，5，12i1，2表示该菌有O抗原：1, 4, 5, 12 四种；第1相H抗原为I，若转变为第2相H抗原，则是1，2；括号中抗原表示该抗源可能无。G兼性厌氧杆菌283K抗原：被膜抗原，与毒力有关，又称Vi抗原，60 1h（五）致病性1是一种人畜共患病，最常侵害幼

18、、青年动物使之发生败血症，胃肠炎及其他组织局部炎症。成年动物为散发性或局限性，发生败血症的怀孕母畜可表现流产。主要传播途径为消化道。据其对宿主的嗜好不同分3种类型有广泛嗜性沙门氏菌：能引起人和各种动物的沙门氏菌病，如 鼠伤寒和肠炎沙门氏菌。专嗜性沙门氏菌：只对人或某种动物产生特定的疾病，如鸡白 痢和鸡伤寒沙门氏菌仅使鸡和炎鸡发病。偏嗜性沙门氏菌：如猪霍乱和都柏林沙门氏菌分别是猪和牛羊 的强适应性菌，但也能感染其它动物。G兼性厌氧杆菌29（五）致病性G兼性厌氧杆菌29（六）免疫性体液免疫和细胞免疫都起重要作用。动物注射疫苗后，母牛的初乳和奶中含有特异抗体，阻断了细菌对肠道上皮的吸附和穿入，为后代

19、提供抗感染能力。用无毒性的沙门氏菌或热灭活的菌体免疫动物后，尽管其有高滴度特异抗体，但仍可免疫失败，这肯定了细胞免疫在抗沙门氏菌中具有重要作用，致敏T细胞的转移可以提供保护卫. G兼性厌氧杆菌30（六）免疫性G兼性厌氧杆菌30（七）微生物诊断1取材：肠系膜淋巴结，粪便，心血，肝，脾，涂片染色镜检可见G中等大小杆菌。2分离培养：麦康凯，伊红美蓝，SS琼脂等培养基上，挑取中等大小的无色菌落，接种三糖铁培养基上。3三糖铁：斜面红色，底部黄色或黑色（H2S产生）4生化试验 G 蔗 麦 乳 IMViC - + - +G兼性厌氧杆菌31（七）微生物诊断G兼性厌氧杆菌315血清型鉴定： 分群：取一张洁净玻片

20、，取2满杯沙门氏菌多价O血清（A-F群）至玻片上，再挑取沙门氏菌纯培养物与多价O血清混匀，2min内凝集者可初步确定为沙门氏菌。同时设立空白对照。再用代表A群（A群中都含有O2血清）B（O4），C1（O7），C2（O8）D（O9），E（O3）的O因子血清作同样玻板凝集反应，视其被哪一群O因子血清所凝集，则确定被检菌为该群。定型：菌群确定后，用该群所含的各种O因子血清与被检菌作玻板凝集反应，以确定其含有哪些O抗原，同样用该群中H因子血清与被检菌作玻片凝集反应，以确定H抗原。据O和H抗原查沙门氏菌抗原表可检出为哪种沙门氏菌。G兼性厌氧杆菌325血清型鉴定： G兼性厌氧杆菌32G兼性厌氧杆菌33G兼

21、性厌氧杆菌33（八）免疫防治1灭活疫苗或弱毒疫苗有一定作用。2加强卫生检验，防止饲料和环境污染。三 耶尔森氏菌属，克雷伯菌属，变形杆菌属 G兼性厌氧杆菌34（八）免疫防治G兼性厌氧杆菌34G兼性厌氧杆菌培训课件3里氏杆菌属：鸭疫里氏杆菌（过去叫鸭疫巴氏杆菌）。4放线杆菌属：猪胸膜肺炎放线杆菌，林氏放线杆菌，驹放线杆菌，猪放线杆菌。5嗜血杆菌属：昏睡嗜血杆菌，副猪嗜血杆菌，血红蛋白杆菌，流感嗜血杆菌8种。6泰勒菌属：马生殖道泰勒菌（过去叫马生殖道嗜血杆菌）（1种）。 G兼性厌氧杆菌363里氏杆菌属：鸭疫里氏杆菌（过去叫鸭疫巴氏杆菌）。G兼性厌（二）培养特性需氧兼性厌氧，营养要求严格，普通培养基上

22、生长贫瘠，加入血液血清生长好。1血平板：圆形光滑，湿润，边缘整齐的露珠状小菌落，不溶 血。2血清肉汤：开始清度混浊，46天后管底出现粘稠沉淀，表 面有菌环。3麦康凯平板：不生长。G兼性厌氧杆菌37（二）培养特性G兼性厌氧杆菌374血清琼脂：菌落在45折光下观察，新分离的强毒株可见到荧光，据有无荧光及荧光色彩可分为三型：Fg型：菌落小，蓝绿色带金光，边缘有狭窄的红黄光带，对牛羊猪为强毒菌，对鸡等禽类毒力弱。Fo型：菌落大，桔红色带金光，边缘有乳白色光带，对鸡兔为强毒菌，对猪，牛，羊毒力弱。Nf型：无荧光，为Fg和Fo型经多次传代后毒力下降转为无毒株G兼性厌氧杆菌384血清琼脂：菌落在45折光下观

23、察，新分离的强毒株可见到荧（三）生化特征葡萄糖 果糖 甘露糖 半乳糖 大多数甘露醇 山梨醇 木糖 + + + + + + +乳糖 鼠李糖 杨甘 菊糖 靛基质+ 触酶+ 氧化酶+ VP- MR- H2S+ 石蕊牛乳无变化G兼性厌氧杆菌39G兼性厌氧杆菌39（四）抗原性 2种抗原K抗原（荚膜抗原）有6种：A B C D E F（另一种不详）。O抗原（菌体抗原）有16种：116。用符号表示时荚膜抗原用大写英文字母表示放在前面，菌体抗原用阿拉伯数字放在后边中间用冒号隔开。如出血型败血菌株，用B6表示。G兼性厌氧杆菌40（四）抗原性 2种抗原G兼性厌氧杆菌40（五）致病性对鸡鸭鹅，马牛羊猪兔均可致病。急

24、性型：出血性败血症迅速死亡。禽霍乱亚急性型：粘膜，关节部位发生出血性炎症。慢性型：猪羊的萎缩性鼻炎，关节炎，局部化脓炎症G兼性厌氧杆菌41（五）致病性G兼性厌氧杆菌41（六）微生物学诊断1取材：取新鲜的病料如渗出液，心血，肝、脾，淋巴结制成涂片或触片。美蓝或瑞特氏染色，镜检可见两极着色的小杆菌，G染色为G，初诊为巴氏杆菌。2分离培养：血平板：湿润露珠样小菌落，不溶血。麦康凯：不生长。3生化特征：三糖铁：斜面黄色/底部黄色，不产生气体。糖发酵：葡萄糖+ 麦+ 肌醇+ 棉子糖+4动物致病性：血清肉汤培养物0.1ml小白鼠腹腔注射，7020h死亡，而后剖检可分离到该菌。5血清试验鉴定荚膜抗原和菌体抗

25、原。G兼性厌氧杆菌42（六）微生物学诊断G兼性厌氧杆菌42（七）免疫防治1患病动物痊愈后，可获得较强免疫。2疫苗：猪肺疫弱毒疫苗（猪三联疫苗：猪瘟、猪丹毒、猪肺 疫），禽霍乱疫苗。3高免多价血清紧急预防和治疗。如抗出败多价血清。4抗生素：四环素，土霉素，磺胺，链霉素。二、曼氏杆菌属 溶血性曼氏杆菌：牛、绵羊的肺炎，新生羔羊的败血症。三、里氏杆菌属 鸭疫里氏杆菌（原叫鸭巴氏杆菌）：引起雏鸭传染性浆膜炎，引 起死亡。G兼性厌氧杆菌43（七）免疫防治G兼性厌氧杆菌43四、放线杆菌属1猪胸膜肺炎放线杆菌：引起猪的传染性胸膜肺炎。在普通培养基上不生长需添加V因子，常用巧克力培养基培养，血平板上溶血，产生

26、CAMP现象。2林氏放线杆菌：致牛羊的放线杆菌病，主要侵害皮肤和软组织，引起化脓及肉芽肿，尤其致下颌淋巴结的脓肿，牛舌肉芽肿使舌肿大，称为“木舌病”。也可致绵羊的皮肤，肺脏及猪的乳房脓肿。G兼性厌氧杆菌44四、放线杆菌属G兼性厌氧杆菌443驹放线杆菌：引起幼驹化脓性肾炎，关节炎，马的流产，败血症，肾炎，心内膜炎，幼猪的关节炎，猪流产及心内膜炎。4猪放线杆菌：引起猪的败血症，肺炎，肾炎，关节炎，马败血症，牛流产，存在正常的组织中，属于条件性致病菌。G兼性厌氧杆菌453驹放线杆菌：引起幼驹化脓性肾炎，关节炎，马的流产，败血症五、嗜血杆菌属 是一群酶系统不完全的G杆菌，生长需要血液中的生长因子，尤其

27、是x因子和V因子（5、10因子）故得名为嗜血杆菌。（一）形态及染色特征： G短杆状，也有呈球状，杆状或长丝状，无鞭毛，无芽孢，新分离株有荚膜，美蓝染色两极着色。G兼性厌氧杆菌46五、嗜血杆菌属G兼性厌氧杆菌46（二）培养特性：必须供给x因子和v因子。x因子：是血红蛋白中的血红素，耐热120 30min不破坏，它是细菌合成细胞色素、细胞色素氧化酶，接触酶，过氧化物酶的辅基。V因子：（尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸）是细菌呼吸过程中起传递 氢的两种脱氢酶的辅酶。是辅酶和辅酶。12030min灭活。血液中的V因子一般处于抑制状态，加热后，抑制物被破坏，V因子释放出来，将血液加热8090，15min，即制成巧克力培养基。巧克力琼脂上：圆形，光滑，边缘整齐，灰 半透明的小菌落。G兼性厌氧杆菌47（二）培养特性：必须供给x因子和v