病毒感染和实验诊疗培训课件

1、病毒感染和实验诊疗病毒感染和实验诊疗病毒感染和实验诊疗培训课件病毒感染和实验诊疗培训课件 据卫生部统计，中国自1985年出现第一例艾滋病病人以来，截至2009年10月底，累计报告艾滋病病毒感染者和病人319877例，其中艾滋病病人 102323 例；报告死亡 4 9845例。 据卫生部统计，中国自1985年出现第一例艾滋病病人以病毒感染和实验诊疗培训课件病毒感染和实验诊疗培训课件病毒的基本性状和分类7病毒感染和实验诊疗病毒的基本性状和分类7病毒感染和实验诊疗病毒的大小与形态 一、病毒的大小与测量单位 极其微小，测量单位为纳米 （nanometer，nm），20nm-300nm观察及测量：电镜、

2、滤过、超速离心、X线衍射二、病毒的形态 球形，砖形，杆形，弹形，长丝状， 蝌蚪形8病毒感染和实验诊疗病毒的大小与形态 一、病毒的大小与测量单位 8病毒感染病毒感染和实验诊疗培训课件狂犬病毒 (100-300 x75nm)乳头瘤病毒 (70-90nm)狂犬病毒 (100-300 x75nm)乳头瘤病毒 (70-9轮状病毒 (60-80nm)轮状病毒 (60-80nm)乙型肝炎病毒(42nm)流感病毒 (80-120nm)乙型肝炎病毒(42nm)流感病毒 (80-120nm)病毒的结构与化学组成 一、病毒的结构 核酸，衣壳，包膜 二、病毒的化学组成 核酸，蛋白质，脂质和糖类 13病毒感染和实验诊疗

3、病毒的结构与化学组成 一、病毒的结构 二、病毒的化学组核酸（DNA/RNA) 蛋白质 保护核酸 结构蛋白： 参与感染 具有抗原性 非结构蛋白：病毒酶类（病毒复制， 抑制宿主相应功能）脂类和糖：主要存在于包膜中维护病毒体结构完整性与宿主细胞有亲和及融合的性能表现病毒种、型抗原性与病毒引起机体中毒症状有关核酸（DNA/RNA) 蛋白质脂类和糖：主病毒的增殖 吸附，穿入，脱壳，生物合成，组装成熟释放 一、病毒的复制周期15病毒感染和实验诊疗病毒的增殖 吸附，一、病毒的复制周期15病毒感染和实验诊疗病毒感染和实验诊疗培训课件病毒感染和实验诊疗培训课件病毒受体(viral receptor,VP)是指存

4、在于细胞表面，能被病毒特异识别并与之结合，促进病毒感染的一组分子复合物。受体是病毒侵入的门户，它决定了病毒的宿主范围，组织及细胞嗜性。 病毒受体(viral receptor,VP)是指存在于细胞 二、病毒的异常增殖 缺陷病毒:是指因病毒基因组不完整或者因基因某一点改变而不能进行正常增殖的病毒。 缺陷病毒不能复制，但却能干扰同种成熟病毒体进入易感细胞，故又称为缺陷干扰颗粒(defective interfering particles ） 顿挫感染:病毒进入宿主细胞，若细胞缺乏病毒复制所需的酶、能量和原料等，则病毒不能合成本身成分；或虽合成部分或全部成分，不能装配和释放，称为顿挫感染。 构成顿

5、挫感染的细胞被称为非容纳性细(non-permissive cells) 。 二、病毒的异常增殖 病毒的遗传与变异 一、病毒性状的变异 毒力变异 抗原性变异 空斑变异 对理化因素抵抗力或依赖性的变异 二、病毒变异的机制 基因突变 基因重组 20病毒感染和实验诊疗病毒的遗传与变异 一、病毒性状的变异 20病毒感染和实验诊遗传物质变异的类型1. 基因突变突变株指病毒基因碱基序列改变，导致表型性状改变的毒株条件致死性突变株（conditional-lethal mutant） 温度敏感突变株（temperature sensitive mutant,ts株 ） 为条件致死性突变株中应用最广泛的缺陷型

6、干扰突变株（defective inhibition mutant，DIM）宿主范围突变株（host range mutant,hr突变株）耐药突变株（drug-resistant mutant）遗传物质变异的类型 2. 基因重组与重配 两种不同病毒感染同一细胞时，可发生基因交换而形成新性状的重组体。 基因重组（recombination）不分节段基因组病毒 基因重配（reassortment）分节段基因组的病毒 类型：活病毒之间：N0H0 + N1H1N0H1活病毒与灭活病毒之间（交叉复活）灭活病毒 之间（多重复活） 2. 基因重组与重配 两 3. 基因整合（gene integration

7、） 病毒基因组（DNA病毒与逆转录病毒）与细胞细胞基因组的重组过程。 整合可引起宿主细胞基因改变细胞遗传性改变细胞转化个别可发生细胞恶化肿瘤 3. 基因整合（gene integration） 病毒感染和实验诊疗培训课件病毒对理化因素的抵抗力 一、物理因素 温度，电离辐射，紫外线 二、化学因素 氧化剂，脂溶剂，酚，甲醛，甘油, 酸碱等25病毒感染和实验诊疗病毒对理化因素的抵抗力 一、物理因素25病毒感染和实验 病毒的分类与命名原则 1.病毒体特征 颗粒大小，颗粒形状，有无包膜，衣壳对称性和结构2.基因组特征 核酸类型（DNA或RNA），核酸链数（单链/双链），核酸极性（正链/负链），核酸片段数

8、3.蛋白质特征 蛋白质数目，大小，蛋白质功能（转录酶，血凝素，蛋白融合） 4.复制特征 核酸复制类型，转录特征5.理化特征 pH稳定性，离子强度，抵抗力 6.生物学特征 血清学关系，宿主范围，致病性，组织嗜性，传播途径，媒介关系，地理分布 26病毒感染和实验诊疗 病毒的分类与命名原则 1.病毒体特征 颗粒大小，颗粒形状病毒的感染与免疫 27病毒感染和实验诊疗病毒的感染与免疫 27病毒感染和实验诊疗1.杀细胞性感染：病毒在宿主细胞内复制完毕，短时间内释放大量子代病毒即造成细胞死亡，多见于无包膜杀伤性强的病毒。 抑制宿主细胞代谢（阻断细胞的核酸和蛋白质合成）某些衣壳蛋白具有直接杀伤宿主细胞的作用细

9、胞病变效应（CPE）对细胞的影响1.杀细胞性感染：病毒在宿主细胞内复制完毕，短时间内释放大量ABL929 cells + EMCVABL929 cells + EMCV 2. 稳定状态感染： 某些病毒进入细胞后能够复制，却不引起细胞裂解、死亡，在相当长的一段时间内细胞和病毒并存，同时增殖，细胞病变缓慢且轻。多见于有包膜病毒，出芽方式释放子代。有些病毒蛋白有融膜特性，细胞膜融合使病毒扩散，结果形成多核巨细胞。细胞膜成份改变，嵌合有病毒特异性抗原，被机体抗体或CTL所识别并清除。对细胞的影响 2. 稳定状态感染： 某些病毒进入细胞后能够复制，却不引起细胞融合细胞融合 3. 包涵体形成概念：某些受病

10、毒感染的细胞内，用普通光学显微镜可看到与正常细胞结构和着色不同的圆形或椭圆形斑块。位置意义胞质内（痘病毒）胞核内（疱疹病毒）两者都有（麻疹病毒）具有诊断意义，如内基小体 3. 包涵体形成概念：某些受病毒感麻疹病毒包涵体 麻疹病毒包涵体 4. 细胞凋亡： 病毒感染细胞后，直接由病毒本身的作用或间接地作为诱导因子引发细胞凋亡。4. 细胞凋亡：细胞凋亡后基因组DNA梯状电泳条带细胞凋亡后基因组DNA梯状电泳条带5. 基因整合与细胞转化： 少数病毒感染细胞后病毒的DNA整合到宿主细胞的染色体上，促进细胞的DNA合成，促进细胞增生或细胞转化即细胞形态转变，增殖加快，失去细胞间的接触抑制等。 是病毒致肿瘤

11、的原因之一5. 基因整合与细胞转化：病毒致肿瘤的原因宫颈癌肝癌鼻咽癌恶性淋巴瘤白血病病毒致肿瘤的原因宫颈癌（二）病毒感染的免疫病理作用抗体介导的免疫病理作用：、型超敏反应细胞介导的免疫病理作用：CTL、自身抗原免疫抑制作用：HIV、CMV（二）病毒感染的免疫病理作用抗体介导的免疫病理作用：、型二、病毒感染的传播方式二、病毒感染的传播方式传播方式水平传播 病毒在人群不同个体间的传播，也包括从动物到动物再到人的传播垂直传播 通过胎盘或产道，病毒由宿主的亲代传给宿主的子代的方式HBV、CMV、 HIV、风疹病毒（其他微生物种少见）。传播方式水平传播 传播途径呼吸道消化道创伤感染接触感染血液传播性传播

12、节肢动物媒介 传播途径呼吸道三、临床感染类型 隐性感染显性感染急性感染持续性感染慢性感染潜伏性感染慢发病毒感染急性感染的迟发并发症三、临床感染类型 隐性感染显性感染急性感染持续性感染慢性感染隐性感染 病毒感染后不引起临床症状显性感染病毒感染后引起临床症状隐性感染 病毒感染后不引起临床症状显性感染病毒感染后 病毒在体内持续数月至数年，甚至数十年，且经常反复间断地向外排毒，可出现症状，引起慢性进行性疾病，也可不出现症状而长期带病毒。 携带者为重要的传染源持续性感染 病毒在体内持续数月至数年，甚至数十年，且经 病毒感染后有很长的潜伏期，经数年，数十年后，可发生某些进行性疾病，最终死亡。（HIV） 病

13、程长，病毒可检出（HBV）潜伏感染：病毒的基因存在于一定的组织或细胞中并不产生感染性的病毒体，但在一定的条件下，病毒被激活而进入复制状态，引起临床症状（疱疹病毒）慢发病毒感染 持续性感染 慢性感染 潜伏感染急性病毒感染的迟发并发症急性感染后1年或数年，发生致死性的病毒病，如亚急性硬化性全 脑炎（SSPE）。 病毒感染的实验诊断 46病毒感染和实验诊疗病毒感染的实验诊断 46病毒感染和实验诊疗儿童腮腺炎病毒感染儿童腮腺炎病毒感染HSV-I 感染引起的唇疱疹HSV-I 感染引起的唇疱疹乳头瘤病毒感染引起的各种症状乳头瘤病毒感染引起的各种症状病毒感染诊断的意义病毒诊断是治疗的前提用于判断预后用于疾病

14、的预防用于疾病的监测指导用药病毒感染诊断的意义病毒诊断是治疗的前提病毒学实验室诊断的四个方面 检测病毒体极其所致宿主细胞的病理改变（直接检测和分离鉴定） 检测病毒蛋白抗原和核酸 检测抗体 其他非特异性物质病毒学实验室诊断的四个方面 检测病毒体极其所致宿主细胞的病理一、标本采集与送检标本采集时间的选择发病早期 标本的储存和运送 低温、含抗生素培养基标本采集部位及种类的选择血液、脑脊液、宫腔拭子、粪便、含漱液、咽喉拭子、尿液或尿道拭子、尸检标本一、标本采集与送检标本采集时间的选择标本的储存和运送 标本采病毒感染和实验诊疗培训课件甲型肝炎标本采集及时间的选择甲型肝炎标本采集及时间的选择常规分离与鉴定

15、动物接种鸡胚接种组织培养器官培养移植培养 细胞培养 原代细胞培养二倍体细胞培养传代细胞培养三大培养方法常规分离与鉴定动物接种鸡胚接种组织培养器官培养移植培养 细胞病毒感染和实验诊疗培训课件病毒在细胞内增殖的指标1、CPE2、红细胞吸附正常细胞病变细胞病毒在细胞内增殖的指标1、CPE2、红细胞吸附正常细胞病变细内基氏小体内基氏小体病毒感染和实验诊疗培训课件病毒的鉴定形态学鉴定：细胞病变效应（CPE）、包含体血吸附和血凝作用干扰作用病毒成分的直接检测病毒的鉴定形态学鉴定：细胞病变效应（CPE）、包含体电镜技术标本制备：超薄切片法（正染法）和负染法病毒的识别：有包膜和无包膜的病毒电镜技术的应用：分类

16、及诊断电镜技术标本制备：超薄切片法（正染法）和负染法病毒的免疫学诊断方法标记法不标记法免疫酶法、免疫荧光法血凝法、乳胶凝集法免疫转印法SPA法、凝集抑制法放射免疫法补体结合法、中和试验法化学发光法沉淀反应、免疫电镜测热及其他其他颗粒凝集法免疫PCR法病毒的免疫学诊断方法标记法不标记法免疫酶法、免疫荧光法血凝法 病毒的血清学诊断中和试验补体结合试验血凝抑制试验免疫扩散等免疫荧光免疫酶技术病毒的血清学诊断中和试验补体结合试验血凝抑制试验免疫扩散等免血凝抑制试验血凝抑制试验双向免疫扩散试验双向免疫扩散试验病毒的快速诊断光镜-包涵体电镜免疫荧光ELISA分子生物学技术杂交Southern blotPCRNorthern blotbiochip病毒的快速诊断光镜-包涵体电镜免疫荧光ELISA分子免疫酶技术免疫酶技术免疫荧光技术免疫荧光技术Western blot技术Western blot技术病毒感染和实验诊疗培训课件123bp246bp369bp492bpM 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13PCR技术123bp246bp369bp492bpM 1 病毒感染和实验诊疗培训课件Integrated