食品中氯丙醇含量的测定（食品安全国家标准）

1、 食品安全国家标准食品中氯丙醇含量的测定范围本标准规定了食品中氯丙醇和氯丙醇脂肪酸酯（氯丙醇酯）的测定方法。本标准适用于食品中氯丙醇含量和氯丙醇脂肪酸酯（氯丙醇酯）总含量的测定。第一法 食品中3-氯-1， 2-丙二醇含量的测定同位素稀释气相色谱质谱法原理本标准采用同位素稀释技术，以d5-3-氯-1，2-丙二醇（d5-3-MCPD）为内标。试样中加入内标溶液，以硅藻土（ExtrelutTM 20）为吸附剂，进行基质固相分散萃取，用正己烷-乙醚（9：1，体积比）淋洗去除非极性脂质组分，用乙醚洗脱3-氯-1，2-丙二醇（3-MCPD），以七氟丁酰基咪唑进行衍生化反应。采用气相色谱质谱联用仪进行测定，

2、以选择离子监测（SIM）模式进行质谱扫描，内标法定量。试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 试剂乙酸乙酯（C4H8O2）：色谱纯。正己烷（C6H14）：色谱纯。无水乙醚（C4H10O）：使用前需于60C重蒸。氯化钠（NaCl）。无水硫酸钠（Na2SO4）：使用前于120C烘烤4 小时。七氟丁酰基咪唑（C7H3F7N2O，CAS号：32477-35-3，缩写为HFBI）。试剂的配制氯化钠溶液（200 g/L）：称取氯化钠20 g，用水溶解并加水80 mL，混匀，使氯化钠充分溶解。正己烷-乙醚溶液（9：1，体积比）：将450 mL正己烷与50 mL

3、无水乙醚混合均匀。标准品3-氯-1，2-丙二醇（3-MCDP）标准品（C3H7ClO2）：CAS号编号96-24-2，纯度98%。d5-3-氯-1，2-丙二醇（d5-3-MCDP）标准品（C3D5H2ClO2）：纯度98%。标准溶液的制备标准溶液配制好后均需转移至密闭性非常好的棕色玻璃容器中，于-20 C贮存。3-MCPD标准储备液（1000 mg/L）：准确称取3-MCPD标准品10 mg（精确至0.01 mg）于10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解，并定容至刻度，混匀。保存期为2年。3-MCPD标准中间液（10 mg/L）：准确移取3-MCPD储备溶液0.5 mL于50 mL容量瓶中，用正己

4、烷稀释至刻度，混匀。保存期为1年。3-MCPD标准工作液（1 mg/L）：准确移取3-MCPD中间溶液0.5 mL于50 mL容量瓶中，用正己烷稀释至刻度，混匀。保存期为6个月。d5-3-MCPD标准工作液（10 mg/L）：准确移取内标标准品d5-3-MCPD储备溶液0.5 mL于50 mL棕色容量瓶中，用正己烷稀释至刻度，混匀。保存期为1年。3-MCPD系列标准工作溶液：分别吸取3-MCPD标准工作溶液（1 mg/L）10 L、50 L、100 L、200 L、400 L、800 L于透明具塞玻璃试管中，分别加入d5-3-MCPD标准工作液（10 mg/L）20 L，加正己烷至2 mL，配

5、制成含3-MCPD质量分别10 ng、50 ng、100 ng、200 ng、400 ng、800 ng和d5-3-MCPD质量为200 ng的系列标准工作溶液。临用现配。材料ExtrelutTM 20硅藻土，或相当的硅藻土。仪器和设备气相色谱-质谱联用仪（GC-MS）。电子天平：感量为1 mg和0.01mg。旋转蒸发仪。恒温箱或其他恒温加热器。涡漩混合器。气密针，1.0 mL。玻璃层析柱：柱长 40 cm，柱内径 2 cm。分析步骤试样制备液态试样摇匀后直接进行提取，基质均匀的半固态试样和粉状固态直接进行提取， 其他试样需匀浆后进行提取。试样提取液态试样称取试样4 g（精确到0.001g）于

6、50 mL烧杯中，加入d5-3-MCPD标准工作液（10 mg/L）20 L，加入氯化钠溶液（200 g/L）至8 g，超声混匀5 min，待净化。汤料、固体与半固体植物水解蛋白等称取试样4 g（精确到0.01g）于50 mL烧杯中，加入d5-3-MCPD标准工作液（10 mg/L）20 L，加入氯化钠溶液（200 g/L）6 g，超声混匀5 min，待净化。香肠、奶酪、面粉、面包、咖啡等称取试样4 g（精确到0.001g）于50 mL烧杯中，加入d5-3-MCPD标准工作液（10 mg/L）20 L，加入氯化钠溶液（200 g/L）10 g，超声提取10 min，以5000 r/min离心1

7、0 min，移取上清液，待净化。试样净化取ExtrelutTM20硅藻土5 g，加入制备好的提取液，充分混匀。另取5 g ExtrelutTM20硅藻土装入层析柱中（层析柱下端填以玻璃棉）。将提取液与硅藻土的混合物装入层析柱中，上层加1 cm高度的无水硫酸钠。将10 mL无水乙醚倒入玻璃层析柱中，清洗整个层析柱，弃去 流出液。放置10 min后，用正己烷-乙醚溶液（9：1，体积比）40 mL淋洗非极性组分，并弃去。用150 mL乙醚洗脱3-MCPD（流速约为8 mL/min），收集流出液，加入15 g无水硫酸钠，混匀以吸收水分，放置10 min后过滤。滤液于35 C下旋转蒸发至近干，用2 mL

8、正己烷溶解残渣，并转移至密闭性好的透明具塞玻璃试管中。衍生化用气密针向净化液中加入七氟丁酰基咪唑0.04 mL，立即密塞，涡旋混合30 s，于70 C保温20 min。取出放至室温，加入2 mL氯化钠溶液（200 g/L），旋涡混合30 s，静置使水相和正己烷相分层。取出正己烷相，加入约0.3 g无水硫酸钠进行干燥，将溶液转移至气相进样小瓶中，供GC-MS测定。同时做3-MCPD系列标准工作溶液的衍生化。空白试样溶液制备称取与试样相同质量的氯化钠溶液（200 g/L）或空白基质样品于50 mL烧杯中，以下步骤按5.2、5.3和5.4与试样同时处理。以考察系统空白。仪器参考条件气相色谱质谱联用仪

9、参考条件色谱柱：DB-5MS毛细管色谱柱（30 m0.25 m0.25 m），或等效柱。载气：氦气；载气流速：1 mL /min。 进样口温度：250 C，进样方式：不分流进样；不分流时间：0.5 min；进样体积：1 L。程序升温：50 C保持1 min，以5 C/min升至90 C，再以40 C/min升至235 C，并保持5 min 。质谱参考条件电离方式：电子轰击源（EI）；电离能量：70 eV。检测方式：选择反应离子检测（SIM）。溶剂延迟时间：5 min。离子源温度: 250 C；传输线温度：280 C；四级杆温度：150 C。电子倍增器电压：1000 eV。监测离子：3-MCPD

10、定量离子m/z 253，定性离子m/z 275、289、291；d5-3-MCPD定量离子m/z 257，定性离子m/z 278、294、296。标准曲线的制作将3-MCPD系列标准工作溶液经衍生化处理后的溶液分别注入气相色谱质谱联用仪中进行测定，得到3-MCPD和d5-3-MCPD的色谱峰峰面积，以3-MCPD系列标准工作溶液中的3-MCPD和d5-3-MCPD的质量比为横坐标，以3-MCPD和d5-3-MCPD的峰面积比为纵坐标，绘制标准曲线。试样溶液的测定将试样溶液注入气相色谱质谱联用仪中进行测定，得到峰面积，根据标准曲线得到试样溶液中3-MCPD的含量，平行测定次数不少于两次。6 分析

11、结果的表述试样中3-MCPD含量按公式（1）计算： （1）式中：X 试样中3-MCPD的含量，单位为微克每千克（g/kg）或微克每升（g/L）；A 试样溶液中3-MCPD色谱峰与d5-3-MCPD色谱峰的峰面积比值对应的3-MCPD的质量，单位为纳克（ng）； F 试样稀释倍数；M 试样的取样量，单位为克（g）。以重复性条件下获得的两次独立测XX果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。精密度在重复性条件下获得的两次独立测XX果的绝对差值不得超过算术平均值的20 %。其他按照本标准规定的取样量，3-氯-1，2-丙二醇的检出限为5 g/kg。第二法 食品中氯丙醇多组分含量的测定同位素稀释气相色谱

12、质谱法原理本标准采用同位素稀释技术，以d5-3-氯-1， 2-丙二醇（d5-3-MCPD）、d5-2-氯-1， 3-丙二醇（d5-2-MCPD）、d5-1，3-二氯-2-丙醇（d5-1，3-DCP）和 d5-2， 3-二氯-2-丙醇（d5-2，3-DCP）为内标。试样中加入混合内标溶液，以氯化钠溶液提取，采用硅藻土固相萃取小柱净化，用正己烷淋洗去除非极性组分杂质，用乙酸乙酯醚洗脱氯丙醇。洗脱液浓缩后用七氟丁酰基咪唑进行衍生化反应。以气相色谱质谱联用仪测定，采用选择离子监测（SIM）模式进行质谱扫描，内标法定量。试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水

13、。试剂乙酸乙酯（C4H8O2）：色谱纯。正己烷（C6H14）：色谱纯。氯化钠（NaCl）。无水硫酸钠（Na2SO4）。七氟丁酰基咪唑（C7H3F7N2O，CAS号：32477-35-3，缩写为HFBI）。试剂的配制氯化钠溶液（200 g/L）：称取氯化钠20 g，加入80 mL水，搅拌使氯化钠充分溶解。标准品3-氯-1，2-丙二醇（3-MCDP）标准品（C3H7ClO2）：CAS编号96-24-2，纯度98%。d5-3-氯-1，2-丙二醇（d5-3-MCDP）标准品（C3D5H2ClO2）：纯度98%。2-氯-1，3-丙二醇（2-MCDP）标准品（C3H7ClO2）：CAS编号497-04-1

14、，纯度98%。d5-2-氯-1，3-丙二醇（d5-2-MCDP）标准品（C3D5H2ClO2）：纯度98%。1，3-二氯-2-丙醇（1，3-DCP）标准品（C3H6Cl2O）：CAS编号96-23-1，纯度98%。d5-1，3-二氯-2-丙醇（d5-1， 3-DCP）标准品（C3D5HCl2O）：纯度98%。2，3-二氯-1-丙醇（2，3-DCP）标准品（C3H6Cl2O）：CAS号编号616-23-9，纯度98%。d5-2，3-二氯-1-丙醇（d5-2，3-DCP）标准品（C3D5HCl2O）：纯度97%。标准溶液的配制 标准溶液配制好后均需转移至密闭性非常好的棕色玻璃容器中，于-20 C贮

15、存。氯丙醇及氘代氯丙醇标准储备液（1000 mg/L）：分别准确称取3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP、2，3-DCP、d5-3-MCPD、d5-2-MCPD、d5-1，3-DCP和d5-2，3-DCP标准品10 mg（精确至0.01 mg）于8个10 mL容量瓶中，分别用乙酸乙酯溶解并定容至刻度，混匀。保存期为2年。氯丙醇标准中间液（10 mg/L）：分别准确移取3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP标准储备溶液0.1 mL于10 mL容量瓶中，用正己烷稀释至刻度，摇匀。保存期为1年。氯丙醇混合标准工作液（1 mg/L）：准确移取3-MCPD、2-MCPD、1，3

16、-DCP和2，3-DCP标准中间液各1 mL于10 mL容量瓶中，加正己烷稀释至刻度，混匀。保存期为6个月。氯丙醇混合内标标准工作液（10 mg/L）：准确移取d5-3-MCPD、d5-2-MCPD、d5-1，3-DCP和d5-2，3-DCP标准储备溶液各0.1 mL于10 mL容量瓶中，用正己烷溶液稀释至刻度，混匀。保存期为6个月。氯丙醇系列标准工作溶液的制备：分别吸取氯丙醇混合标准工作溶液（1 mg/L）10 L、50 L、100 L、200 L、400 L、800 L于透明具塞玻璃试管中，分别加入混合内标标准工作液（10 mg/L）20 L，加正己烷至2mL，混匀，配制成含各氯丙醇质量分

17、别10 ng、50 ng、100 ng、200 ng、400 ng、800 ng和各氯丙醇内标质量为200 ng的系列标准工作溶液。临用现配。材料硅藻土固相萃取小柱（规格为5 g或10 g），或相当的产品。仪器和设备气相色谱-质谱联用仪（GC-MS）。电子天平：感量为1 mg和0.01mg。旋转蒸发仪。恒温箱或其他恒温加热器。涡漩混合器。气密针，1.0 mL。分析步骤试样制备液态试样摇匀后直接进行提取，基质均匀的半固态试样和粉状固态直接进行提取， 其他试样需匀浆后进行提取。试样提取液态试样称取试样4 g（精确到0.001g）于50 mL烧杯中，加入氯丙醇混合内标标准工作液（10 mg/L）20

18、 L，超声混匀5 min，待净化。半固态及固态试样称取试样4 g（精确到0.001g）于15 mL玻璃离心管中，加入氯丙醇混合内标标准工作液（10 mg/L）20 L，加入氯化钠溶液（200 g/L）4 g，超声提取10 min，以5000 r/min离心10 min，移取上清液，再重复提取1次，合并上清液。试样净化将上清液全部转移至硅藻土固相萃取小柱中，平衡10 min。以10 mL正己烷淋洗非极性杂质，弃去流出液，以15 mL乙酸乙酯洗脱氯丙醇，收集洗脱液于玻璃离心管中，以氮气浓缩至近干（切忌浓缩至全干），以2 mL正己烷溶解残渣，并转移至密闭性好的透明具塞玻璃试管中，待衍生化。衍生化用气

19、密针向净化液中加入七氟丁酰基咪唑0.04 mL，立即密塞，涡旋混合30 s，于70 C保温20 min。取出冷却至室温，加入氯化钠溶液（200 g/L）2 mL，旋涡混合30 s，使水相和正己烷相分层。转移正己烷相，加入约0.3 g无水硫酸钠进行干燥，转移溶液至进样小瓶中，供GC-MS测定。同时做系氯丙醇列标准工作溶液的衍生化。空白试样溶液制备称取与试样相同质量的氯化钠溶液（200 g/L）或空白基质样品，以下步骤按12.2、12.3和12.4与试样同时处理。考察系统空白。仪器参考条件气相色谱质谱联用仪参考条件色谱柱：DB-5MS毛细管色谱柱（30 m0.25 m0.25 m），或等效柱。载气

20、：氦气；载气流速：1 mL /min。 进样口温度：250 C；进样方式：不分流进样；不分流时间：0.5 min；进样体积：1 L。程序升温：50 C保持1 min，以5 C/min升至90 C，再以40 C/min升至235 C，并保持5 min 。质谱参考条件电离方式：电子轰击源（EI）；电离能量：70eV。检测方式：选择反应离子检测（SIM）。溶剂延迟时间：5 min。离子源温度: 250 C；传输线温度：280 C；四级杆温度：150 C。电子倍增器电压：1000 eV。监测离子：3-MCPD定量离子m/z 253 ，定性离子m/z 275、89、 291；2-MCPD定量离子m/z

21、253 ，定性离子m/z 75、289、291；d5-3-MCPD定量离子m/z 257，定性离子m/z 278、294、296；d5-2-MCPD定量离子m/z 257，定性离子m/z 79、294、296；1，3-DCP定量离子m/z 75，定性离子m/z 77、275、277；2，3-DCP定量离子m/z 75，定性离子m/z 77、111、263；d5-1，3-DCP定量离子m/z 79，定性离子m/z 81、278、280；d5-2，3-DCP定量离子m/z 79，定性离子m/z 81、116、257。标准曲线的制作将氯丙醇系列标准工作溶液经衍生化处理后的溶液分别注入气相色谱质谱联用

22、仪中进行测定，得到3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP与d5-3-MCPD、d5-2-MCPD、d5-1，3-DCP和d5-2，3-DCP的色谱峰峰面积，以各氯丙醇和其对应的氘代氯丙醇的质量比为横坐标，以各氯丙醇和其对应的氘代氯丙醇的峰面积比为纵坐标，绘制标准曲线。试样溶液的测定将试样溶液注入气相色谱仪中，测定3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP和和d5-3-MCPD、d5-2-MCPD、d5-1，3-DCP和d5-2，3-DCP的色谱峰面积，平行测定次数不少于两次。分析结果的表述试样中3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP的含量

23、，按公式（2）计算含量： （2）式中：X 试样中3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP的含量，单位为微克每千克（g/kg）；A 试样色谱峰与内标色谱峰的峰面积比值对应的氯丙醇的质量，单位为纳克（ng）； f试样稀释倍数；m试样的取样量，单位为克（g）。以重复性条件下获得的两次独立测XX果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。精密度在重复性条件下获得的两次独立测XX果的绝对差值不得超过算术平均值的20 %。其他按照本标准规定的取样量，3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP的检出限均为5 g/kg。第三法 食品中氯丙醇脂肪酸酯（氯丙醇酯）总含量的测定气相色

24、谱质谱法原理试样中加入氘代氯丙醇酯，以正己烷提取出试样中的氯丙醇酯。向提取液中加入甲醇钠/甲醇溶液进行酯键断裂反应，使提取液中的氯丙醇酯转化为氯丙醇和相应的脂肪酸甲酯，以冰醋酸终止反应。用正己烷萃取去除脂肪酸甲酯和其他脂溶性杂质，用氯化钠溶液将反应生成的氯丙醇提取出来。提取液以硅藻土小柱进行净化，用正己烷淋洗去除提取液中的非极性组分，以乙酸乙酯为洗脱液洗脱氯丙醇。以七氟丁酰基咪唑进行衍生化反应。采用气相色谱质谱联用仪检测，采用选择离子监测（SIM）模式进行质谱扫描，内标法定量。试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。试剂甲醇（CH4O）。叔丁基甲基

25、醚（C5H12O）。甲醇钠（CH3ONa）。冰醋酸（CH3COOH）：优级纯。乙酸乙酯（C4H8O2）：色谱纯。正己烷（C6H14）：色谱纯。无水硫酸钠（Na2SO4）。氯化钠（NaCl）七氟丁酰基咪唑（C7H3F7N2O）：CAS编号32477-35-3。试剂的配制氯化钠溶液（200 g/L）：称取氯化钠20 g，加入80 mL水，搅拌使氯化钠充分溶解。10%硫酸钠溶液：称取无水硫酸钠10 g，加水90 mL，搅拌并充分混匀00 mL。叔丁基甲基醚-乙酸乙酯溶液（8：2，体积比）：量取40 mL叔丁基甲基醚，加入10 mL乙酸乙酯，混匀。甲醇钠-甲醇溶液（0.5 mol/L）：称取2.7 g

26、甲醇钠，加入50 mL甲醇，搅拌并充分混匀。标准品3-氯-1，2-丙二醇（3-MCDP）标准品（C3H7ClO2）：CAS编号96-24-2，纯度98%。d5-3-氯-1，2-丙二醇（d5-3-MCDP）标准品（C3D5H2ClO2）：纯度98% 。2-氯-1，3-丙二醇（2-MCDP）标准品（C3H7ClO2）：CAS编号497-04-1，纯度98%。d5-2-氯-1，3-丙二醇（d5-2-MCDP）标准品（C3D5H2ClO2）：纯度98%。1，3-二氯-2-丙醇标准品（1，3-DCP）（C3H6Cl2O）：CAS编号96-23-1，纯度98%。d5-1，3-二氯-2-丙醇（d5-1， 3

27、-DCP）标准品（C3D5HCl2O）：纯度98%。2，3-二氯-1-丙醇（2，3-DCP）标准品（C3H6Cl2O）：CAS号编号616-23-9，纯度98%。d5-2，3-二氯-1-丙醇（d5-2，3-DCP）标准品（C3D5HCl2O）：纯度97%。3-氯-1，2-丙二醇棕榈酸酯（3-MCPD棕榈酸酯）标准品（C19H37ClO3）：CAS编号30557-04-1，纯度98%。d5-3-氯-1，2-丙二醇棕榈酸酯（d5-3-MCPD棕榈酸酯）标准品（C19 D5H32ClO3）：纯度98%。标准溶液的制备 标准溶液配制好后均需转移至密闭性非常好的棕色玻璃容器中，于-20 C贮存。氯丙醇标

28、准储备液（1000 mg/L）：分别准确称取3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP、d5-3-MCPD、d5-2-MCPD、d5-1，3-DCP和d5-2，3-DCP标准品10 mg（精确到0.01 mg）于8个10 mL容量瓶中，分别用乙酸乙酯溶解并定容至刻度，混匀。保存期为2年。氯丙醇标准中间液（10 mg/L）：分别准确移取3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP标准储备溶液0.1 mL于10 mL容量瓶中，用正己烷稀释至刻度，摇匀。保存期为1年。氯丙醇混合标准工作液（1 mg/L）：准确移取3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP

29、标准中间液各1 mL于10 mL容量瓶中，加正己烷稀释至刻度，混匀。保存期为6个月。氯丙醇混合内标标准工作液（10 mg/L）：准确移取d5-3-MCPD、d5-2-MCPD、d5-1，3-DCP和d5-2，3-DCP标准储备液各0.1 mL于10 mL容量瓶中，用正己烷溶液稀释至刻度，混匀。保存期为1年。氯丙醇酯标准储备液（1000 mg/L，以氯丙醇计）：分别准确称取3-MCPD棕榈酸酯和d5-3-MCPD棕榈酸酯标准品各32 mg（精确到0.01 mg）于2个10 mL棕色容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并定容至刻度，混匀。保存期为2年。氯丙醇酯标准工作液（10 mg/L，以氯丙醇计）：分别准确

30、移取3-MCPD棕榈酸酯和d5-3-MCPD棕榈酸酯标准储备溶液0.1 mL于2个10 mL棕色容量瓶中，用正己烷稀释至刻度，混匀。保存期为1年。系列标准工作溶液的制备：分别吸取氯丙醇混合标准工作溶液（1 mg/L）10 L、50 L、100 L、200 L、400 L、800 L于透明具塞玻璃试管中，分别加入氯丙醇混合内标标准工作液（10 mg/L）20 L，加正己烷至2 mL，混匀，配制成含各氯丙醇质量分别10 ng、50 ng、100 ng、200 ng、400 ng、800 ng和各氯丙醇内标质量为200 ng的系列标准工作溶液。临用现配材料硅藻土固相萃取小柱（规格为5 g），或相当的

31、产品。仪器和设备气相色谱-质谱联用仪（GC-MS）。电子天平：感量为1 mg和0.01mg。旋转蒸发仪。恒温箱或其他恒温加热器。涡漩混合器。气密针，1.0 mL。分析步骤试样制备液态试样摇匀后直接进行提取，基质均匀的半固态试样和粉状固态直接进行提取， 其他试样需匀浆后进行提取。试样提取植物油、动物油等油脂类试样称取试样0.1 g （精确至0.001g），加入d5-3-MCPD棕榈酸酯60 L、d5-2-MCPD、d5-1，3-DCP和d5-2，3-DCP标准工作液（10 g/ mL）各20 L。面包等烘烤类固体试样称取试样4 g（精确至0.001g），加入d5-3-MCPD棕榈酸酯标准工作液（

32、10 g/ mL，以d5-3-MCPD计）60 L。加入4 mL正己烷，充分振摇混匀，超声萃取20 min，静置分层后，转移出上层正己烷相。重复提起3次，合并正己烷相，加入d5-2-MCPD、d5-1，3-DCP和d5-2，3-DCP标准工作液（10 g/ mL）各20 L，以氮气浓缩至约1 mL。乳与乳制品、烹调加工后的膳食样品等称取试样2 g（精确至0.001g），加入d5-3-MCPD棕榈酸酯标准工作液（10 g/ mL，以d5-3-MCPD）60 L。用2 mL正己烷超声萃取20 min，静置分层后，转移出上层正己烷相。重复提取3次，合并正己烷相，加入d5-2-MCPD、d5-1，3-

33、DCP和d5-2，3-DCP标准工作液（10 g/ mL）各20 L，以氮气浓缩至约1 mL。酯键断裂反应向试样提取液中加入500 L叔丁基甲基醚-乙酸乙酯溶液（8：2，体积比）和1 mL 甲醇钠-甲醇溶液（0.5 mol/L），盖紧盖子，涡旋振荡30 s。室温反应4 min 后，加入100 L 冰醋酸终止反应。加入3 mL 10%硫酸钠溶液和3 mL 正己烷，涡旋振荡30 s ，静置1 min，弃去上层正己烷相，再用3 mL正己烷萃取一次，弃去上层正己烷相，下层的水相溶液待净化。试样净化将水相溶液倒入5g 硅藻土小柱中，平衡15 min后，用15 mL乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液，在洗脱液中加入

34、无水硫酸钠4 g ， 放置10 min 后过滤，滤液转移至12 mL透明玻璃瓶样品瓶中，于35氮气浓缩至近干（切忌浓缩至全干），用2 mL正己烷溶解残渣，涡旋混匀，待进行衍生化反应。衍生化用气密针向净化液中加入七氟丁酰基咪唑0.04 mL，立即密塞。涡旋混合后，于70保温20 min。取出放至室温，加氯化钠溶液（200 g/L）2 mL，旋涡混合30 s，使两相分层，取出上层有机相，加无水硫酸钠0.3 g吸水干燥，将溶液转移至样品小瓶中，供GC-MS测定。同时做系列标准工作溶液的衍生化反应空白试样溶液制备称取与试样相同质量的10%硫酸钠溶液或空白基质样品，以下步骤按19.2、19.3、19.4

35、和19.5与试样同时处理，以考察系统空白。仪器参考条件气相色谱参考条件色谱柱：DB-5MS柱（30 m0.25 m0.25 m），或等效柱。载气：氦气；载气流速：1 mL /min。 进样口温度：250 ；进样方式：不分流进样，不分流时间为0.5 min；进样体积：1 L。程序升温：50 C保持1 min，以5 C/min升至90 C，再以40 C/min升至235 C，并保持5 min。质谱参考条件电离方式：电子轰击源（EI）；电离能量：70 eV。检测方式：选择反应离子检测（SIM）。溶剂延迟时间：5 min。离子源温度：250 ；传输线温度：280 ；四级杆温度：150 。电子倍增器电压

36、：1000 V。监测离子：3-MCPD衍生物定量离子m/z 253 ；定性离子m/z 275、289、291；2-MCPD衍生物定量离子m/z 253 ；定性离子m/z 75、289、291；d5-3-MCPD衍生物定量离子m/z 257； 定性离子m/z 278、294、296；d5-2-MCPD衍生物定量离子m/z 257； 定性离子m/z 79、294、296；1，3-DCP衍生物定量离子m/z 75 ；定性离子m/z 77、275、277；2，3-DCP衍生物定量离子m/z 75；定性离子m/z 77、111、263；d5-1，3-DCP衍生物定量离子m/z 79；定性离子m/z 81

37、、278、280；d5-2，3-DCP衍生物定量离子m/z 79；定性离子m/z 81、116、257。标准曲线的制作将系列标准工作溶液分别注入气相色谱质谱联用仪中，测定3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP和d5-2，3-DCP和d5-3-MCPD、d5-2-MCPD、d5-1，3-DCP和d5-2，3-DCP相应的色谱峰面积，以标准工作液的质量比为横坐标，以响应值峰面积比为纵坐标，绘制标准曲线。试样溶液的测定将试样溶液注入气相色谱质谱联用仪中，得到峰面积，根据标准曲线得到试样溶液中3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP 的含量，平行测定次数不少于两次。分析结果的表述试样中3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP与d5-3-MCPD、d5-2-MCPD、d5-1，3-DCP和d5-2，3-DCP的峰面积比作线性回归，由回归方程计算3-MCPD酯、2-MCPD酯、1，3-