药物分析第五章药物的鉴别

1、第五章 药物的鉴别药品检验工作的主要内容鉴别：判定真伪检查：安全性、有效性、均一性含量测定：有效成分的定量第五章 药品的鉴别试验5.1 鉴别试验的内涵5.3 药物鉴别的方法5.2 药物鉴别的项目5.4 鉴别试验的条件5.5 鉴别反应的灵敏度基本要求5.1 鉴别试验的内涵目的：根据药物的分子结构特征，采用物理、化学或生物学方法，判断（鉴别）药物真伪。适用性：仅用于证实贮藏在有标签容器中的药物是否为其标示的药物，并非对未知物化学结构的确证鉴定。要求：方法专属，每个品种一般2-3项不同类型的鉴别试验。Principles of Identification Test5.1 鉴别试验的内涵分类Prin

2、ciples of Identification Test鉴别试验一般鉴别试验有机药物无机药物专属鉴别试验5.2 鉴别试验的项目一、性状和物理常数二、鉴别项下规定的试验一般鉴别：区分药物的类别专属鉴别：区分个别的药物单体（同类或相同母核）的鉴别原料药制剂鉴别一、性状和物理常数Characters/DescriptionPhysical Constants（一）性状（definition）聚集状态、晶形 外观色泽臭、味性状（呈现状态）：反映了药物特有的物理性质。一、性状和物理常数外观：指药物的聚集状态、 晶型、色泽及臭、味等。溶解度：不同溶剂中的溶解特性 一定程度上反映了药物的纯度。物理常数：内

3、在物理特征 即可鉴别，也可反映纯净的程度。外观溶解度物理常数物理常数: 相对密度、馏程、熔点、比旋度、吸收系数 、 折光率、黏度、酸值、碘值、皂化值、羟值 第一法：测定易碎的固体药品 熔点 第二法：测定不易碎的固体药品（脂肪酸、石蜡等） 第三法：测定凡士林或其他类似的物质传温液加热法电热块空气加热法 比旋度：指在一定波长下，偏振光透过1 dm且每1ml中含有 旋光性物质1g的溶液时测得的旋光度。 旋光度测定在鉴别、检查、含量测定中都有应用。固体供试品液体供试品例如：维生素C的比旋度测定： 取本品，精密称定，加水溶解，并定量稀释成C为0.10g/ml的溶液，依法测定旋光度为+2.05至2.15，

4、求 tD =？吸收系数 吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸收度 摩尔吸收系数 溶液浓度 液层厚度 百分吸收系数 溶液浓度 液层厚度 是指依据药物的化学结构或理化特性，通过化学反应类鉴别药物的真伪。特点：确定（区分）类别，不能够确定个别品种。常见的一般鉴别实验：丙二酰脲类、托烷生物碱类、芳香第一胺类、有机氟类、无机金属类（Na, K, Li, Ca, Ba, Fe,Al, Zn,Cu, Ag,Hg等）、有机酸盐类（水杨酸盐）、无机酸盐类。 二、一般鉴别试验 （general identification test）二、一般鉴别试验1. 有机酸盐(1) 水杨酸水杨酸 + FeCl3中性条件弱酸

5、性条件红色配位化合物紫色配位化合物一般鉴别试验水杨酸盐（1）取供试品稀溶液，加三氯化铁试液1滴，即显紫色。取供试品溶液，加稀盐酸，即析出白色杨酸沉淀，分离，沉淀在醋酸铵试液中溶解。 2.有机氟化物有机氟氧瓶燃烧无机氟离子pH4.3 茜素氟蓝硝酸亚铈蓝紫色络合物阴阳离子的特殊反应酸根名称 检验试剂 现 象 反应方程式 SO42- BaCl2溶液 白色加酸不溶 SO42-+Ba2+BaSO4 CO32- 稀酸，Ca(OH)2 气体使石灰水变混 CO32-+2H+CO2+H2OCa2+CO32-CaCO3 HCO3- 稀酸，Ca(OH)2气体使石灰水变混 Cl- AgNO3试液 白溶于氨水不溶稀硝酸

6、 Cl-+ Ag+AgCl Br- AgNO3试液 黄微溶氨水不溶稀硝酸 Br-+ Ag+AgBr 阴阳离子的特殊反应离子鉴别方法鉴别原理现 象Na+焰色反应光谱主要谱线589nm可见光区鲜黄色K+焰色反应光谱主要谱线766nm，769nm紫色Ca2+焰色反应光谱主要谱线622nm可见光区砖红色Ba2+焰色反应光谱主要谱线553nm，500nm黄绿色Li+焰色反应光谱主要谱线670nm胭脂红色NH4+NaOH 石蕊试液NH4+OH-NH3+H2O有刺鼻气味，湿石蕊试纸变兰 通过一般鉴别试验只能证实是某一类药物，而不能证实是哪一种药物。例如: 钠盐的焰色试验,不能辨认是氯化钠、苯钾酸钠或者是其它

7、某一种钠盐药物。 必须在一般鉴别试验的基础上,再进行专属鉴别试验，方可确认。一般鉴别试验三、专属鉴别试验 (specific identification test)依据：特定药物分子中的特殊性质、特征基团或官能团的专属反应或测定进行鉴别药物的真伪。5.3 药物鉴别的方法鉴别方法化学鉴别法颜色变化鉴别法沉淀生成鉴别法气体生成鉴别法荧光反应鉴别法制备衍生物测定熔点光谱鉴别法紫外可见光谱鉴别法红外光谱鉴别法色谱鉴别法薄层色谱法高效液相色谱法气相色谱法生物学法5.3 药物鉴别的方法药物的鉴别方法要求专属性强，耐用性好，灵敏度高，操作简便，快速。常用方法：化学法、光谱法、色谱法和生物学法。中药材鉴别方

8、法：还有显微鉴别法和特征图谱或指纹图谱鉴别法。制剂的鉴别：尽可能与原材料相同：必须：排除辅料干扰；多组份或微量成分，需用更灵敏、专属的方法。特殊性质：采用特定方法，如手性、晶型等。 三氯化铁呈色反应(Ar-OH, Ar-OCOCH3) 异羟肟酸铁反应(Ar-COOH; Ar-COOR) 1. 颜色变化鉴别法 茚三酮呈色反应(脂肪氨基，氨基酸） 重氮化-偶合呈色反应(Ar-NH2;-NHCOR) 氧化还原显色反应及其它颜色反应指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成易于观测的有色产物。一、化学鉴别法一、化学鉴别法 2. 沉淀生成鉴别法 与硫氰化铬铵的沉淀反应 其它沉淀反应(如

9、生物碱沉淀剂） 一、化学鉴别法 药物本身在可见光下发射荧光 药物溶液加硫酸后在可见光下发射荧光 3. 荧光反应鉴别法 药物与溴反应后，在可见光下发出荧光 药物与间苯二酚溴反应后，发射出荧光 药物其它反应后，发射出荧光 制备衍生物： 药物试剂 具有荧光的衍生物一、化学鉴别法 胺类、酰脲类、酰胺类药物经强碱处理 生成氨气 ( NH3 ；NH(C2H5)2) 含硫药物经强酸处理后，加热，生成硫 4. 气体生成反应鉴别法 化氢气体(H2S+Pb2+ PbS +2H+) 含碘有机药物，加热。生成紫色碘蒸汽 含醋酸酯和乙酰胺类药物酸水解后，加 乙醇可产生乙酸乙酯一、化学鉴别法制备衍生物测定熔点法 药物试剂

10、 新化合物有一定mp; 药物酸化或碱化生成游离酸或碱。操作繁琐费时 间，应用较少。二、光谱鉴别法 测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长 规定浓度的供试液在最大吸收波长测定吸收度1.紫外光谱鉴别法 规定吸收波长和吸收系数法 规定吸收波长和吸收度比值法 经化学处理后, 测定其反应产物吸收光谱特性 氟胞嘧啶紫外光谱鉴别 本品的8g/mL盐酸溶液91000.1mol/L)，最大吸收波长286nm，吸光度约为0.57，最小吸收波长244nm。 二、光谱鉴别法 压片法2. 红外光谱鉴别法 糊法 膜法 溶液法氯羟去甲安定红外光谱鉴别ChP和BP均采用标准图谱法例中国药典对某药物的鉴别：本品的红外吸收图谱

11、应与对照的图谱（光谱集XX图）一致。USP采用对照品法例阿莫西林的鉴别试验：取本品，经干燥后用溴化钾压片法测定，所得的图谱与USP阿莫西林参考标准品图谱一致。红外光谱鉴别法 JP采用规定条件下测定一定波数处的特征吸收峰 例氯羟去甲安定的测定：取本品，干 燥后用KBr压片法测定，其红外吸收光谱图中3440cm-1,3220cm-1,1695cm-1,1614cm-1,1324cm-1,1132cm-1,828cm-1处有吸收。对于中药材的真伪鉴别及掺杂检查可提供有价值的信息例1：熊胆、牛胆、猪胆的红外图谱比较在特征区和指纹区三者则有明显的差别光谱法红外分光光度法熊胆牛胆猪胆（1）辅料无干扰，与原

12、料药标准图谱对照（2）辅料干扰不能完全消除，用指纹区特征峰鉴别二、光谱鉴别法（三）近红外光谱法（四）原子吸收法（五）核磁共振法（六）质谱鉴别法（七）X射线粉末衍射法三、色谱鉴别方法（ HPLC GC TLC) 适用于复杂环境下药物有效成分及杂质鉴别,具有分离、分析同时进行的特点。采用与对照品（或经确证的已知药品）在相同的色谱条件下进行色谱分离，并进行比较其保留行为。三、色谱鉴别方法1、相同浓度的供试品与对照品比较，主斑点，颜色与位置应一致。2、供试品与对照品等体积混合，主斑点，位置应一致。3、结构相似的其他药物与供试品溶液的主斑点比较：应区分4、3项下两种溶液等体积混合，应得到清晰分离的斑点：

13、应区分sr混sRsRTLC(二）高效液相色谱法(HPLC) （含量测定）供试品和对照品色谱峰保留时间一致。内标（三）气相色谱法 (GC) 同HPLC要求四、显微鉴别法灵芝孢子的电镜扫描照片 灵芝破壁孢子的电镜扫描照片 Electron scanning microscope 泽泻内皮层细胞 牡丹皮草酸钙簇晶 茯苓菌丝 山药淀粉粒 山茱萸果皮表皮细胞 地黄薄壁组织六味地黄丸中药材的显微特征图 药物鉴别方法新动向仪器用于药物鉴别的数量大大增加，尤其是红外和HPLC法。英美采用仪器鉴别法和化学鉴别法的比例为2:1。制剂广泛采用IR法鉴别，采用提取分离后再压片绘谱。鉴别条目简练，选择专属的方法鉴别，平

14、均每个品种收2条左右。 （一）溶液的浓度 （二）溶液的温度 （三）溶液的酸碱度 （四）试验时间 （五）干扰成分的存在5.4 鉴别试验条件（一）溶液的浓度 溶液的浓度主要指被鉴别物质的浓度，其大小影响结果的判断。 （如化学法中要观察沉淀、颜色；UV法中max, A, E1%1cm)（二）溶液的温度 温度过高可使产物分解，导致颜色变浅，甚至观察不到结果。5.4 鉴别试验条件5.4 鉴别试验条件 （三）溶液的酸碱度 试反应物处于活化状态、反应产物处于稳定和以观察状态。 （四）试验时间 有机化合物的化学反应较慢，需要一定的反应时间和条件。 （五）干扰成分的存在 药物制剂的鉴别，其它成分则会干扰检查结果的现象观察。 1、反应灵敏度和空白试验5.5 鉴别试验的灵敏度（sensitivity）最低检出量（minimum detectable quantity）最低检出浓度（minimum det