与甲状腺相关的免疫分析技术

1、与甲状腺相关的免疫分析技术“simplex” Michael M. Kaplan第一页，共五十九页。主 题免疫检测技术甲状腺疾病与免疫测量指标相关问题讨论第二页，共五十九页。免疫分析技术换个角度看问题多方面认识影响技术发展的因素：检测技术本身的衍变临床循证医学的需要和对疾病的新认识医疗产业链的发展第三页，共五十九页。标记免疫分析可能是免疫学最显著的进展放射免疫分析、免疫放射分析、放射受体分析酶免疫分析 化学发光免疫分析时间分辨荧光免疫分析电化学发光免疫分析第四页，共五十九页。放射免疫分析-RIA独特的测量技术可能也是人类历史上最戏剧性的测量技术 Ag + Ab AgAb Ag* Ag*Ab第五

2、页，共五十九页。免疫学可能是现代科学最难的学科之一表达多元化结构复杂化方法多样化个体多变化第六页，共五十九页。免疫分析独特性利用异种免疫反应性测量含量!可测物与被测物只是相似而不是一致(RIA)！被测物的含量是通过计算推测得到的! Ag + Ab AgAb Ag* Ag*Ab第七页，共五十九页。免疫检测是不是临床需要的技术?其实我们期待检测到：生物活性量生物效应量第八页，共五十九页。免疫测量的现实多数被测物的抗原性不完全清楚目前我们对多数大分子待测物的空间结构不清楚测量抗体只针对多数被测物的一部分抗原性抗体的种类多方法学之间有差异第九页，共五十九页。PSA 复合物第十页，共五十九页。第十一页，

3、共五十九页。微量物质的免疫性_我们知道不充分为什么形成抗原和抗体? 为什么不?半抗原的T3（rT3）、T4（T2、T1）为什么有不同抗体？体内究竟有没有自身自身抗体!甲状腺激素小分子的免疫性与生产（药物）和定标的抗原抗体有没有差异？抗原性与生物活性之间有多少相关性？非生物活性和单纯定性诊断不是大问题激素、药物要对疾病分期、分级和疗效分析及预后判断是个关键问题。第十二页，共五十九页。微量物质的免疫测量_是比较和筛查的结果抗体的筛选仍然、也只能是综合因素的选择！非统一化的抗体可比性差批间差异几乎不可避免免疫反应性与个体样品测量的差异（以及干扰因素）很难解决。质控是必要的，而标准化只能是一个相对的概

4、念！第十三页，共五十九页。免疫测不准法则多数情况下，免疫分析的结果与临床期望值一致！免疫性与生物表达量不相一致！且免疫性尚没有确定！激素、药物、定量分析等临床解释要慎重待测样品中的干扰因素仍过于复杂我们实验室不清楚（只能做好流程管理）实验室研究成本比较高，答案可能比较模糊！第十四页，共五十九页。免疫技术的临床实用价值绝大多数情况下 ，测量结果与病人临床表现基本符合；存在波动是正常的实验室之间的差异也可能是很大的疾病因素（包括个体差异）是比较复杂的为临床疾病诊疗提供客观依据标记免疫分析技术第十五页，共五十九页。相关问题探讨 2甲状腺免疫测量指标第十六页，共五十九页。甲状腺实验室诊断指标功能指标总

5、T4（TT4），游离T4（FT4）总T3（TT3），游离T3（FT3） 反T3（rT3）促甲状腺激素TSH游离甲状腺素指数TRH兴奋试验蛋白和自身免疫指标甲状腺素结合球蛋白（TBG）甲状腺球蛋白（TG）甲状腺过氧化物酶抗体TPOAb甲状腺球蛋白抗体（TGAb） TSH-受体抗体（TRAb） 游离甲状腺素指数甲状腺激素自身抗体（THAAb）第十七页，共五十九页。甲状腺血清功能指标 TSH：理论上最重要第十八页，共五十九页。关于TSH “代” 和“超敏”20%0.01 to 0.020.1 to 0.21 to 2Interassay CV TSH concentration (IU/mL)Thi

6、rd generationSecond generationFirst generation提高灵敏度, 提高临床应用.第十九页，共五十九页。超敏TSH的传统临床意义正常人群=0.35.0 uIU/ml甲状腺亢进人群0.1uIU/mlGrave氏甲状腺毒症 0.02uIU/ml甲状腺减低人群10uIU/ml第二十页，共五十九页。超敏TSH的新临床要求正常人群=0.44.0 uIU/ml甲状腺亢进人群0.1uIU/ml（变化中）Grave氏甲状腺毒症 0.02uIU/ml （变化中）甲状腺减低人群510uIU/ml接受治疗的甲状腺病人：分化型甲状腺癌 0.1uIU/ml（变化中）孕妇补充第二十一

7、页，共五十九页。TSH应用的实际情况正常人群的波动。TSH属于慢反应激素，上升和下降的速度都很慢TSH属于大分子多肽，血液内生物降解的速度比较慢。HCG（LH、FSH等）与TSH有共同亚单位，测量有误差。亚单位很相类似口服甲状腺素替代治疗后，TSH参考范围需要改变。TSH自身抗体？第二十二页，共五十九页。六种TSH检测比较研究的初步结果RIA方法比较差（对几乎甲亢组无意义）。IMRA方法一般（对甲亢组有价值，但与自动化检测有显著差异）四种自动化检测有差异，对临床判断影响不一：总体差异不太大（515%）高灵敏度：ROCHE and ABBOTT回收率：谨慎使用第二十三页，共五十九页。未来TSH分

8、析的临床要求测量范围和灵敏度同样重要最好采用多元测量同时要保证特异性TSH变化与T3、T4相一致第二十四页，共五十九页。甲状腺血清功能指标在实际应用中要谨慎TSH(以及其他指标)多数是正确的，有时仅供参考!影响因素包括:受到药物的干扰受到垂体慢反应的影响受到垂体其他激素的干扰受到孕期的影响受到自身抗体的干扰和动物皮毛的影响受到测量试剂和设备稳定性的影响人为误差第二十五页，共五十九页。甲状腺激素分子特点和代谢均为小分子激素大多数与蛋白结合T4是有生物活性T3的前体T4通过外环脱碘产生T3, T3起主导的生物效应。T4内环脱碘只能生成无活性T3甲状腺激素进一步代谢T3通过内环脱碘形成3，3二碘甲状

9、腺氨酸rT3通过外环脱碘也可产生3，3二碘甲状腺氨酸。通过磺基转移酶的催化作用，苯环上的羟基被硫酸酯化。降解的主要部位在肝脏胆道和尿路排泄第二十六页，共五十九页。甲状腺激素的临床免疫学意义小分子激素的抗原性比较单一抗体的交叉反应性仍然不同程度存在？测量方法有多重性，没有统一的标准免疫测量受多种因素影响抗甲状腺素抗体？第二十七页，共五十九页。甲状腺功能指标理论上较为简明第二十八页，共五十九页。FT4二种检测结果对比(1) 六院（11.522.7pmol/L) 瑞金（9.019.0pmol/L)1 49.77 32.72 55.24 34.46 38.09 25.96 30.37 22.94 48

10、.78 35.58 50.96 35.87 30.74 23.40 24.03 18.55 26.27 19.34 33.21 27.10 34.98 23.86 22.80 13.40 25.22 16.59 第二十九页，共五十九页。FT4二种检测结果对比(2) 六院（11.522.7pmol/L) 瑞金（9.019.0 pmol/L)1 83.44 44.06 25.08 16.48 27.95 18.48 24.57 23.67 29.36 23.90 25.68 23.66 25.10 18.84 23.27 13.79 23.05 12.88 25.13 17.16 31.72 24

11、.44第三十页，共五十九页。FT4二种检测结果对比可能对临床的影响如果单指标性诊断：32% 甲亢非甲亢如进行病期或疗效判断：50%差异为什么？ 第三十一页，共五十九页。甲状腺功能指标 药物的影响第三十二页，共五十九页。甲状腺功能指标 药物的影响第三十三页，共五十九页。甲状腺功能指标的影响因素 值得进行临床分类研究检验技术人员做好室间质量控制，减少人为误差临床医生:熟悉常用药物对甲状腺功能指标测量的影响熟悉常见病对甲状腺功能指标测量的影响分析一过性异常指标的临床观察动态检测比单次检测更重要第三十四页，共五十九页。甲状腺疾病的实验室诊断临床更多的问题:现在有些病人甚至表面健康人的抗体指标很高，与病

12、人临床表现不符合。为什么其他甲状腺指标检测很快，TRAb要等几天？第三十五页，共五十九页。甲状腺疾病的免疫学指标甲状腺疾病究竟有哪些抗体指标？有些病人的抗体指标很高，与病人临床表现不符合；第三十六页，共五十九页。与AITD密切相关的抗体甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）甲状腺球蛋白抗体 ATg（TGAb）促甲状腺素受体抗体 (TRAb)协助诊断甲状腺疾病的（病因或分类）诊断用于甲状腺疾病的治疗监测和评价第三十七页，共五十九页。甲状腺疾病中:自身免疫性甲状腺疾病最多自身免疫性甲状腺疾病 AITDGraves (GD)Hashimotos甲状腺炎 (HT)二者均为免疫失控 T和B淋巴细胞侵入甲状腺

13、部分淋巴结和骨髓细胞第三十八页，共五十九页。甲状腺过氧化物酶（TPO）TPO细胞膜蛋白，分子量约为107KDa93氨基酸残基糖蛋白空间结构仍不完全明确，临床不能常规检测TPO在甲状腺激素的生物合成中的反应：甲状腺素残基的碘化。甲状腺球蛋白上两个碘化甲状腺残基的氧化偶联。第三十九页，共五十九页。甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）TPOAb基本由B淋巴细胞产生一般属于IgG1，或IgG4，(呈亚型或个体差异)已经发现有近200种（H和L链的不同以及组合不同）一定程度上代表甲状腺自身免疫障碍。第四十页，共五十九页。甲状腺球蛋白TgTG分子量约660 kDa、二聚体糖蛋白复合物甲状腺激素合成的基质，受

14、到转译后碘化作用的影响在甲状腺滤泡中以胶体形式贮存生理条件下，血循环中可测出少量的TG。目前还不清楚血浆中的TG的特殊功能。TSH 是TG生理性释放的主要刺激因子。第四十一页，共五十九页。甲状腺球蛋白抗体TgAb （ATg)TgAb基本也由B淋巴细胞产生与TPOAb可能存在共同的亚链已经发现有数十种TgAb亚型（H和L链的不同及组合不同）与Tg共同存在于血液内。第四十二页，共五十九页。TgAb和TPOAb在测量方面技术关键因素寻找和确定特异性的抗体链提高特异性保持高的灵敏度减少和避免自身抗原的干扰不同的技术方法、测量时间可能影响不同第四十三页，共五十九页。TPOAb 和TgAb检测的临床应用第

15、四十四页，共五十九页。TPOAb 和TgAb检测的临床应用（一）甲状腺高危人群的筛查富含碘食品的高龄妇女有精神、情绪波动的女性产后妇女（尤其有不舒适的表现）患有甲状腺结节的无症状患者进行过甲状腺手术和其他手术患有其他免疫性疾病第四十五页，共五十九页。TPOAb 和TgAb检测的临床应用（一）甲状腺高危人群的筛查家族性甲状腺疾病使用过减肥药物甲状腺癌患者其他内分泌代谢异常第四十六页，共五十九页。TPOAb和TSH的筛查第四十七页，共五十九页。TPOAb 和TgAb检测的临床应用（二）颈部不适患者的诊断和鉴别诊断临床考虑有甲状腺炎（HT)、甲亢(GD)（HT)、甲亢(GD)的鉴别诊断结合其他指标第

16、四十八页，共五十九页。TPOAb 和TgAb检测的临床应用（三）病程监测TPOAb和TgAb持续阳性AITD仍处于活动期，与症状无必然关系TPOAb和TgAb恢复正常AITD仍处于免疫抑制或正常状态或可能预示有甲状腺机能减退出现第四十九页，共五十九页。TPOAb 和TgAb持续阳性异常B淋巴细胞活动持续存在临床意义需要继续研究预后作用的报道有差异第五十页，共五十九页。GD和HD的TPOAb 和Tg阴性问题？真阴性？假阴性？测量抗体和表达抗体的区别测量方法的差异血液中的干扰因素TG第五十一页，共五十九页。TSH receptor autoantibodies (TRAb)Elecsys Anti

17、-TSHR52第五十二页，共五十九页。TSH ReceptorRapoport B et al, Tue thyrotropin (TSH) receptor: Interaction with TSH and Autoantibodies.53第五十三页，共五十九页。TSH受体抗体TRAb三个类别：TSH结合抑制免疫球蛋白TSH受体抗体甲状腺刺激抗体TSAbGRAVEs致病性抗体甲状腺刺激阻断抗体TSBAb可能是部分甲状腺炎发生甲减的致病性抗体第五十四页，共五十九页。TSAb与Graves病TRHThyreotropin Releasing HormoneTSHThyroidea Stimulating HormoneT4Thyroxine, TetraiodothyronineT3TriiodothyroninefT3free T3fT4free T4TSAbThyroid Stimulating AntibodiesTRHTSHT4T3fT3, fT4TSAb55第五十五页，共五十九页。TRAbTRAb与甲状腺细胞上的促甲状腺激素受体结合后引起以下作用：兴奋腺苷酸环化酶活性。激活第二信使CAMP的分泌。甲状腺激素的产生和分泌的增加。直接抗受体的抗体的性质属于异原性的，同时有兴奋和阻断性质，但整体的效果是对受体有刺激作用。第五十六页