糖的呈色反应和还原糖的检验

1、 2一、试验目的试验1糖的呈色反响和复原糖的检验学习鉴定糖类及区分酮糖和醛糖的方法。了解鉴定复原糖的方法及其原理。二、试验原理醛。有色物质，反响式如下：酚如 有色物质，反响式如下： 一萘酚、甲基苯二酚、间苯二酚和间苯三酚等，有时也用芳香胺、胆酸、某些吲哚衍生物和一些嘧啶类化合物等。有人认为，用浓硫酸作为脱水剂时，形成有颜色的产物与酚核的磺化有关，见如下反响式；一糖的呈色反响Molish 反响(萘酚反响) 一萘酚作用，形成红紫色复合物。在糖溶液与浓硫酸两液面间消灭紫环，因此又称紫环反响。自由存在和结合存在的糖均呈阳性反响。此外，各种糠醛衍生物、葡萄糖醛酸、丙酮、甲酸、乳酸等皆呈颜色近似的阳性反响

2、。因此，阴性反响证明没有糖类物质的存在；而阳性反响，则说明有糖存在的可能性，需要进一步通过其他糖的定性试验才能确定有糖的存在。蒽酮反响(10 9，10 一二氢蒽)反响生成蓝一绿色复合物。Seliwanoff 反响(间苯二酚反响)该反响是鉴定酮糖的特别反响。在酸作用下，己酮糖脱水生成羟甲基糠醛。后者与间苯二酚结合生成鲜红色的化合物，反响快速，仅需 2030s。在同样条件下，醛糖形成羟甲基糠醛较慢。只有糖浓度较高时或需要较长时间的煮沸，才给出微弱的阳性反响。蔗糖被盐酸水解生成的果糖也能给出阳性反响。Bial 反响(甲基间苯二酚反响)戊糖与浓盐酸加热形成糠醛，在有Fe3+存在下，它与甲基间苯二酚(地

3、衣酚)缩合，形成深蓝色的沉淀物。此沉淀物溶于正丁醇。己糖也能发生反响，但产生灰绿色甚至棕色的沉淀物。二复原糖的鉴定含有自由醛基(一 CHO)或酮基(C=O)的单糖和二糖为复原糖。在碱性溶液中，复原糖能将金属离子(铜、铋、汞、银等)复原，糖本身被氧化成酸类化合物，此性质常用于检验糖的复原性，并且常成为测定复原糖含量的各种方法的依据。Fehling 反响费林试剂是含有硫酸铜与酒石酸钾钠的氢氧化钠溶液。硫酸铜与碱溶液混合加热， 则生成黑色的氧化铜沉淀。假设同时有复原糖存在，则产生黄色或砖红色的氧化亚铜沉 淀。上述反响可用以下方程式表示：在碱性条件下，糖不仅发生烯醇化、异构化等作用。也能发生糖分子的分

4、解、氧化、复原或 复原作用来写出反响平衡式是不行能的。为了防止铜离子和碱反响生成氢氧化铜或碱性碳酸铜沉淀，Fehling 试剂中参加酒石酸钾钠，它与 Cu2+形成的酒石酸钾钠络合铜离子是可溶性的络离子，该反响是可逆的。平衡。Benedict反响Benedict 试剂是 Fehling 试剂的改进。它利用柠檬酸作为 Cu2+的络合剂，其碱性比Fehling 试剂弱，灵敏度高，干扰因素少，因而在实际应用中有更多的优点。 3Barfoed反响该反响的特点是在酸性条件下进展复原作用。在酸性溶液中，单糖和复原二糖的复原3min Cu2+20min。所以，该反响可 10 min 内水解而发生反响。复原二糖

5、浓度过高时，也会很快呈现阳性反响，假设样品中含有少量氯化钠也会干扰此反响。三、试验试剂和材料仪器测试糖液2阿拉伯糖，葡萄糖，果糖，麦芽糖，蔗糖，12 种未知糖液。试剂Molish 氏试剂称取萘酚2 克，溶于9乙醇中并定容到100m于棕色瓶中。蒽酮(Anthrone)试剂溶解0.2g蒽酮于100mL(A.1.8，含量95%中。当日配制、使用。Fehling氏试剂4试剂A34.5g 硫酸铜(CuSO 5H20)500mI。蒸馏水中。4试剂B125g 137g 500mL 蒸馏水中，储于带橡皮塞瓶中。临用时，将试剂A 和B 等量混合。Benedict 氏试剂溶解85g(Na3C6HllH20及50g

6、无水碳酸钠于400m8.5g硫酸铜于 50mL。热水中。将硫酸铜溶液缓缓倾人柠檬酸钠一碳酸钠溶液中，边加边搅，如有沉淀，可过滤本试剂可长期使用。如放置过久，消灭沉淀可取用其上清液。Bial 氏试剂1.5g 地衣酚(orcin01)500mL2030 10三氯化铁溶液。Seliwanoff氏试剂溶解50mg(resorcin01于100rn=1:2V)12，否则，它将导致糖形成糠醛或其衍生物。浓硫酸。器材试管，试管架，煤气灯和沸水浴等。四、试验方法一.糖的呈色反响Molish反响8 支已标号的试管，分别参加各种测试糖液lmL(15 滴)Molish 试剂 2滴，摇匀。逐一将试管倾斜，分别沿管壁渐

7、渐参加浓硫酸 l mL，然后，留神竖直试管，使温热几分钟。记录各管消灭的颜色，说明缘由，检定未知糖液。蒽酮反响取 8 lmL 蒽酮溶液，再将测试糖液分别滴加到各试管内，混匀，观看颜色变化，鉴定未知糖液。Seliwanoff反响8 支，编号，各加人Seliwanoff ImL。再依次分别参加测试糖液各4 滴，混匀，同时放人沸水浴中，比较各管颜色变化及消灭颜色的先后挨次，分析说明缘由。留意 蔗糖的反响。bial反响2 1ml Bial 试剂的试管中,沸水浴中加热,观看颜色变化.如遇到未知糖呈色不明显,3 倍体积水稀释,1ml 戊醇,摇动,醇液呈蓝色,即为阳性反响。二复原糖的鉴定Fehling反响8

8、 支试管，各加Fehling A B lmL4 滴，沸23min，取出冷却，观看沉淀和颜色的变化。Benedict反响8 支试管中先各参加Benedict 2ml,4 滴,2-3min,冷却后,观看颜色变化.barfoed反响2-3 1ml Barfoed 试剂的试管中,3min,20min 以上,比较各管颜色变化及红色消灭的先后挨次.五、留意事项Molisch 反响格外灵敏，000100001蔗糖即能呈现阳性反响。因此， 红色及褐色而不呈紫色。需稀释糖溶液后重做。果糖在 Seliwanoff。试剂中反响格外快速，呈鲜红色，而葡萄糖所需时间长，且只能产Seliwanoff 生成绿色到蓝色产物。酮根本身并没有复原性，只有在变为烯醇式后，才显示复原作用。糖的复原作用生成氧化亚铜沉淀的颜色打算于颗粒的大小，Cu2O 颗粒的大小又打算于反响速度。反响速度快时，生成的Cu2O 颗粒较小，呈黄绿色；反响慢时，生成的Cu2O 颗粒较大，呈红色。有保护胶体存在时，常生成黄色沉淀。实际生成的沉淀含有大小不同的Cu2O 颗粒，因而每次观看到颜色可能略有不同。溶液中复原糖的浓度可以从生成沉淀的多少来估量，而不能依据沉淀的颜色来区分。Barfoed 反响产生的Cu2O 色的消灭，它与一般复原性试验不一样，观看不到反响液由蓝色变绿变黄或变红的过程。六