人参皂苷Rg3抑制肿瘤生长的作用

1、20（S）人参皂苷Rg3对Lewis肺癌生长及转移的抑制作用【摘要】 目的观察20 （S） 人参皂苷Rg3 （SPG Rg3）抗Lewis肺癌生长及转移的作用并探讨其作用 机制。方法 建立Lewis肺癌实体瘤模型及自发肺转移模型观察SPG Rg3的抗肿瘤作用，并取Lewis肺癌 C57BL/6荷瘤小鼠的脾脏，检测T淋巴细胞转化活性、NK细胞及IL 2活性。结果 实体瘤实验中，3.0mg/kg 和1.0mg/kg SPG Rg3用药组瘤重明显低于溶剂对照组（P0.05） ； SPG Rg3用药组肺转移结节均明显少于溶剂对照组（P99.5%，注射前用 生理盐水稀释成所需浓度，溶剂对照组含有溶剂和生

2、理盐水。环磷酰胺，50mg/kg，上海华联制药有限公司。 纯系C57BL/6N小鼠，雌雄各半，体重1822g,购于本校实验动物部，动物等级为普通级，合格证编号为 101025。高转移Lewis肺癌细胞由本校放射生物实验室惠赠，培养于含10%新生牛血清的RPMI 1640培养液中。1.2SPG Rg3对Lewis肺癌实体瘤生长的作用无菌条件下，取Lewis肺癌实体瘤，用玻璃匀浆器加生理盐水（1 ： 3）磨制成细胞悬液，取0.2ml （含 瘤细胞2 X 106）接种于C57BL/6N小鼠右腋窝皮下，接种后将动物随机分成5组:SPG Rg3 3mg/kg、1mg/kg、 0.3mg/kg组，阳性（环

3、磷酰胺）及阴性（溶剂）对照组。次日腹腔注射SPG Rg3，连续给药10d （1次/ 天），停药24h后处死动物，称体重及瘤重，计算肿瘤生长抑制率（%）,其值为1-（治疗组平均瘤重/ 对照组平均瘤重）X100%。1.3SPG Rg3对Lewis肺癌自发肺转移的作用取体外培养对数生长期Lewis肺癌细胞，以5X105/只接种于C57BL/6N小鼠右后肢爪垫皮下。随机分 为4组，即SPG Rg3 3mg/kg、1mg/kg、0.3mg/kg组及溶剂对照组。次日腹腔注射SPG Rg3，连续用药 5周（1次/天），在第3周截除荷瘤下肢，第5周末处死小鼠，取出肺组织用Bouin s液固定，在解剖显 微镜下

4、（X10）计数肺组织表面肿瘤结节数。1.4SPG Rg3对Lewis肺癌C57荷瘤小鼠免疫功能影响取Lewis肺癌实体瘤，按1 ：3加入生理盐水研磨成细胞悬液，取0.2ml （含瘤细胞1X106）接种于 小鼠右腋皮下，次日腹腔注射SPG Rg3（1.0mg/kg），连续给药21d后处死动物、无菌条件下取脾脏，分 别检测淋巴细胞转化活性、NK细胞活性以及对IL 2反应活性4。1.5统计方法采用SPSS10.0统计软件，应用方差分析处理数据。结果2.1SPG Rg3对Lewis肺癌生长的抑制作用3次体内重复实验均见SPG Rg3用药组瘤重明显低于溶剂对照组，见表1,其中以3.0mg/kg和l.Om

5、g/kg SPG Rg3 组效果非常显著（P0.05），0.3mg/kg 组效果不明显（P0.05），且 3.0mg/kg SPG Rg3 组 抑瘤率3次均在30%以上，说明SPG Rg3具有明显地抑制Lewis肺癌生长的作用。但SPG Rg3组瘤重 明显高于阳性药物组（P0.05），说明SPG Rg3的抑瘤作用较传统的细胞毒性抗肿瘤药物的作用差。2.2SPG Rg3 对 Lewis 肺癌自发肺转移的抑制作用SPG Rg3用药组肺转移结节数明显少于溶剂对照组，0.3mg/kg组即显示出明显的作用，具有显著统 计学意义（P0.05），且随着剂量的增加其作用也有增加趋势，可见SPG Rg3具有明显

6、地抑制Lewis肺 癌自发肺转移的作用，见表2。2.3SPG Rg3 对 Lewis 肺癌 C57 荷瘤小鼠免疫功能影响SPGRg3用药组瘤重低于溶剂对照组（P0.05），脾细胞对ConA、IL 2反应性和脾细胞NK活性值均高于溶剂对照组（P0.05），这表明SPG Rg3提高小鼠NK细胞杀伤活性、提高脾淋巴细胞对IL 2及ConA刺激的反应性，说明SPGRg3能明显提高机体免疫功能，见表3。讨论SPG Rg3 属原人参二醇型皂甙，其水溶性好，生物利用率较高，已有研究表明，其有抑制儿茶酚胺 分泌、保护神经元、拮抗血管平滑肌收缩5,6、抗肿瘤等功效。本组实验中观察到，SPG Rg3在体内 具有明

7、显地抑制Lewis肺癌生长和自发肺转移的作用。而我们前期实验结果显示SPG Rg3可明显抑制B16 黑色素瘤肺转移、B16黑色素瘤细胞的侵袭力以及肿瘤新生血管的形成6。这说明SPG Rg3抑制Lewis 肺癌的生长和转移的作用可能与其抗肿瘤血管新生、降低肿瘤细胞侵袭力的活性有关。表1SPG Rg3对 Lewis肺癌生长的抑制作用表2SPGRg3抗Lewis肺癌自发肺转移作用与溶剂对照组比较，*P0.05； *P0.01本次实验还通过检测SPG Rg3对荷瘤小鼠免疫力的影响，从免疫方面探讨其抗肿瘤的作用机制。淋巴细胞增殖能力的强弱，在某种程度上代表了淋巴细胞功能的高低4。ConA诱导的淋巴细胞体

8、外 增殖反应能力的提高提示脾脏淋巴细胞的免疫活性明显增强,SPG Rg3提高脾细胞对ConA刺激的反应性， 说明SPGRg3提高了淋巴细胞的免疫功能。NK细胞是细胞免疫中非特异部分，其可通过表面受体与肿瘤细胞结合释放溶细胞素致肿瘤细胞死亡。 IL 2 其抗肿瘤机制在于刺激和活化效应细胞， IL 2 能促进未 成熟的细胞毒性淋巴细胞增殖和产生溶细胞作用，可解除肿瘤浸润淋巴细胞的免疫抑制状态并增强其免疫 功能，并能促进NK细胞增殖、维持NK细胞长期生长并增强其活性。由此可见，IL2在细胞免疫应答过程中发挥了重要作用。SPGRg3提高了脾淋巴细胞对IL 2的反应性，增强了荷瘤小鼠NK细胞的杀伤活性，

9、说明在SPG Rg3作用下，更多有活性的淋巴细胞和NK细胞参与了肿瘤细胞免疫应答过程，提高机 体的免疫功能，从而对肿瘤的生长和转移起到抑制作用。SPG Rg3 有明显的抗肿瘤活性，并可提高荷瘤机体的免疫力，这说明其不仅可以提高机体对肿瘤的 免疫应答，也可以提高荷瘤机体对其他致病因素的抵抗力。这一点优于其他抗肿瘤药物，对于肿瘤病人， 尤其是放、化疗后的病人是致关重要的。 SPG Rg3 单独应用或与其他肿瘤化疗药物联合应用将给肿瘤治 疗带来新的希望。【参考文献】1Mochizuki M,Yoo YC,Matsuzawa K,et al.Inhibitory effect of tumor met

10、astasis in mice by saponin,ginsenoside Rb2,20（R） and 20（S） ginsenoside Rg3,ofredginsengJ.BiolPharm Bull,1995,18（9）: 11971202.2陈大富，赵扬冰，白绍槐，等裸鼠原位种植人乳腺癌细胞株术后早期应用人参皂貳Rg3对切口愈合的影 响J 肿瘤防治研究，2003，30 （5）： 391392.Ji Yoon Lee,JunWan Shin,KyungSoo Chun,et al.Antitumor promotional effects of a novel intestinalba

11、cterialmetabolite(IH 901)derivedfromtheprotopanaxadiol type ginsenosides in mouse skinJ.Carcinogenesis, 2005,26(2): 359367.杨贵贞免疫生物工程纲要与技术M.长春:吉林科学技术出版社,1991.48.Tachikawa E,kudo K,Nunokawa M,et al. Characterization of ginseng saponin ginsenoside Rg3 TOC o 1-5 h z inhibition of catacholamine sectetion in bovine adrenal chromaffin cells.Biochem Pharm,2001,62(7): 943951.Kim ND,Kang SY,Kim MJ,et al.The ginsenoside Rg3 evoke e