菠菜叶中叶绿素的提取和分离

1、实验 菠菜叶中叶绿素的提取和分离一实验目的掌握从镀菜叶中提取叶绿素的方法；二实验原理叶绿素提取高等植物体的叶绿体色素有叶绿素和类胡萝卜素两类，主要囊括叶绿素 a (Cs.sH72OsN.Mg),b(CToOeNtMg),B胡萝卜素(GJL)和叶黄素(GoHsA4ab、B、丫三种异构体，其中，0 的化学特性，可将它们从植物叶片中提取出来，并且经过萃取、沉淀和色谱方法 将它们分离开来。薄层色谱4罰卜1|R=H；叶黄素R= OH(Rf)表示物质移动的相关于距离：色斑最高浓度中心至原点中心的距离展开剂前沿至原点中心的距离Rf 值计算示意图色斑最高浓度中心至原点中心的距离展开剂前沿至原点中心的距离溶剂中

2、。关于照，即可关于未知化合物辨别。薄层层析的器材选择：基板：玻璃、塑料、金属箔，常用玻璃板。吸附剂：吸附剂要有合适的吸附力，并且且必需与展开剂和被吸附物质均不起化学庾应。可用作吸附剂 的物质很多，常用的有硅胶和氧化铝，由于吸附性好，适用于各类化合物的分离， 应用最广。选择吸附剂时主要根据样本的溶解度、酸戚性及极性。氧化铝一般是微 碱性吸附剂，适用于碱性物质及中性物质的分离；而硅胶是微酸性吸附剂，适用于 酸性物质及中性物质的分离。以下简单介绍吸附剂的几个基本参数。不常用：硅藻土、纤维素、糖类、活性碳符号：H无任何添加剂；G加有锻石膏(Gypsum, CaS04 1/2 H20)粘合剂；F-加有荧

3、光素(Fluorescein)CMC-加有竣甲基纤维素钠(Carboxymethylcellulose)GF254 254nm 的紫外 光下激发出荧光粒度：目：lcn)2200目,硅胶为 100、150 目。U：颗粒的平均直径，以微米表示。例如：40“的颗粒与 100 目相当。活性：吸附剂按其含水呈的多少各分为五个等级：I 级含水量最少，活性最高；V 级含水量最多， 活性最低；但并且不是活性越高分离效果越好，选用哪种活性级别的吸附剂，要用实验的方法 来确定。酸戚性：pH 4、9-10；其中以中性氧化铝应用最广，可用来分离 各种化合物，特别是那些关于酸、戚敏感的化合物。硅胶没有酸碱性之分。展开剂

4、在样本组分-吸附剂-展开剂三个因素中。关于一确定组分，样本的结构和性质可看作是一不 变因素，吸附剂和展开剂是可变因素。而吸附剂的种类有限，因此选择合适的展开剂就成为 解决问題的关键。展开剂的选择有以下要求：关于待测组分有很好的溶解度。能使待测组分与杂质分开，与基线分离。便展开后的组分斑点圆而集中，不应有拖尾现象。Rf 0.40.5,如样本中待测组分较多，Rf 0.25 0.75 圈， Rf0. 1左右。由于薄层色谱法用途非常广泛，国外均有现成的铺 有吸附剂的薄层板出售。一般实验室中也可自己制备。不与组分发生化学反映，或在某些吸附剂存在下发生聚合。具有适中的沸点和较低的粘滞度。Rf 0.5 左右

5、。常用溶剂极性次序是： 石油瞇环己烷苯 乙瞇氯仿 乙酸丁酯 正丁醇 丙雨 乙醇甲醇。如一种溶剂不能充分展开，可选用二元或多元溶剂系统。展开槽与展开：展开：合适的展开剂用量为浸及下端硅胶，但不浸及样点；点样端向下，每次只展开一块，放在 正中，以免爬斜(进而展开倾斜)。显色：显色的，可放在含少量碘墓气的容器中显色来检查色点 (因为许多化合物都能和碘成 黄棕色斑用显色剂：药三酮、三氯化铁溶液等。三、实验仪器与药品仪器：半微量玻璃仪器一箱，小烧杯，层析缸（槽），载玻片（100mmX25mm）干燥器，电吹风, 毛细管，移液管，研钵，布氏漏斗，抽滤装置。试剂：硅胶，1% CMC,石油瞇（6090C）,乙醇

6、，丙酮，乙瞇，饱和 NaC 1 溶液，无水 NazSCL四、实验步骤1、 制板：1% （硅胶在平铺玻璃板上能晃动但不能流动将其涂在载玻片上（100mniX25mni）,为使其坦平，可将载玻片用手端平晃动，至平坦为止, 放105P 1 小时，取出放入干燥器待用。2、 叶绿素的提取在研钵中放入几片（约菠菜叶（中轻压吸左水分）。加人10mL2： 1 10 mL NaCl 溶液（防止生成乳浊液）除去水溶性物质，分去比0 2g N/SOi 干燥。干燥后 的液体倾至另一锥形瓶中（如溶液颜色太浅，可在通风柜中适当蒸发浓缩）。3、 点样用一根径1mm 的毛细管，吸取适量提取液，轻轻地点在距薄板一端1.5cm 处，平行点两点两点相距lcm左右。若一次点样不够，可待样本溶剂挥发后.再在原处点第二次，但点样斑点直径不得越过2mmo4、 展开先在层析缸中放入展开剂（6090 乜）-丙酮一乙瞇（加盖使lOmin,lcrm 晾干或用电吹风吹干薄层。五、实验注意事项制板时用注意使板上硅胶厚度尽快一致。六、实验思考題1、 在混合物薄层色谱中，如何判定各组分在薄层上的位置？2,展开剂的高度若超过了点样线，关于薄