比色法测定甘草中总皂苷的含量

1、比色法测定甘草中总皂苷的含量DeterinatinfTtalSapninsinGlyyrrhizabylrietryKeyrds：Glyyrrhiza;Ttalsapnins;Vanillin-Hl4甘草为豆科Leguinsae甘草属Glyyrrhiza植物，为我国重要的传统中草药。甘草属植物在世界上共有30余种，我国有8种，分布在内蒙、西北、东北等地。目前，被?中国药典?认定的甘草药材原植物有3种1，即乌拉尔甘草、胀果甘草和光果甘草的根及根茎。其中以乌拉尔甘草分布最广，产量最多，质量最好。研究发现甘草属植物中三萜类皂苷具有含量高、生理活性强的特点，不仅具有抗溃疡、消炎、解毒等生理活性，今年研

2、究还发现具有抗病毒、抗癌活性。1器材1.2试剂高氯酸，甲醇，香草醛，冰醋酸以上试剂均为分析纯，甘草酸单铵盐标准品甘草酸单铵盐10g溶解于甲醇中定容至10l，浓度为1gl-1，甘草购于黑龙江省大庆市大同区。2方法2.1最大波长确实定准确汲取0.5l标准品溶液，置于10l具塞试管中，70水浴挥干溶剂，参加0.2l的5%香草醛冰醋酸溶液，再参加0.8l的高氯酸，摇匀，于55水浴中加热20in，立即取出用流水冷却至室温，参加冰醋酸5l稀释，摇匀，以不加标准品的样品管为空白，于400700n波长处进展扫描。2.2比色条件的优化2.2.1最正确显色时间确实定取5份0.2l对照品溶液，分别置具塞试管中，70

3、水浴挥干溶剂，各参加0.2l的5%香草醛冰醋酸溶液，再参加0.8l的高氯酸，摇匀，于60水浴中加热不同时间5，10，15，20，25in，立即取出用冷水冷却至室温，参加冰醋酸5l，摇匀，于最大吸收波长处测定其吸收值。2.2.2最正确显色温度确实定分别取5份0.2l对照品溶液，依上法操作，在不同温度50，55，60，65，70水浴20in，同上进展测定。2.3显色稳定性的考察准确汲取标准样溶液0.2l，按2.1中的香草醛高氯酸法显色，在1h内，每隔5in测定吸收值的变化情况。2.4标准曲线绘制准确汲取标准液0.1，0.15，0.2，0.25，0.3l分别置于10l具塞试管中，按2.1中的香草醛高

4、氯酸法显色后测定吸光值，每个浓度平行测定3次，以皂苷的质量为横坐标，吸光度为纵坐标作图得到回归方程。2.5样品待测液的制备准确称取脱脂后的甘草粉0.2g40目于10l具塞试管中，准确参加甲醇4l(含1%氨水)，加塞后放入超声波清洗器中超声1h，然后取出试管置于离心机中以3000rin-1离心15in，上清液作为待测液。2.6精细度的测定准确汲取待测液60l共6份，按2.1中的香草醛高氯酸法显色后测定吸收值。2.7加标回收率实验准确量取6份浓度的供试样品25l，再分别参加标准溶液30l，按2.1中的香草醛高氯酸法显色后测定吸收值，计算加标回收率。2.8样品的测定汲取上述2.5项下提取纯化的3种样

5、品溶液各60l，按2.1中的香草醛高氯酸法显色后测定吸收值，根据工作曲线计算皂苷含量。转贴于论文联盟.ll.3结果与讨论3.1最大波长确实定香草醛高氯酸是常用的一类显色剂，显色灵敏度高，试剂空白溶液色浅，常用作三萜皂苷的显色剂。其反响机理可能是皂苷在强氧化性酸的作用下脱氢，氧化后再与香草醛加成。显色后，香草醛高氯酸能与皂苷反响形成特征的紫红色。扫描结果说明，甘草酸单铵盐标准品溶液在589n处有最大吸收，应选取589n为测定波长。3.2比色条件确实定3.2.1最正确显色时间确实定结果见图1。3.2.2最正确显色温度确实定结果见图2。3.3显色的稳定性显色反响的1h内试样的吸光值下降较小V0.68

6、%，在1h内测定的数据是根本稳定的，可以满足测定的要求。3.4标准曲线回归曲线数据见表1。表1测定的回归曲线数据略以3次测定的吸光值的平均值A为纵坐标，以甘草酸单铵盐量/g为横坐标，绘制成标准曲线，如图3所示，该标准曲线的回归方程0为：y=2.3343x-0.0011，r=0.99963.5样品待测液的制备测定样品皂苷含量一般采用索氏抽提的方法,这种制备样品方法既繁琐、费时,又难以抽提完全，不能满足样品批量测定制样的要求。吉宏武8发现20倍的甲醇超声波提取1h可将材料中的皂苷提取完全。由于甘草酸在甘草皂苷中所占比例最大,且在甘草中以钠盐或钾盐的形式存在,参加稀氨水(0.5%5%),那么可与甘草酸形成铵盐而增加其水溶性,使提取效率进步。稀醇(甲醇或乙醇50%70%)溶液对皂苷的溶解性较好,对植物细胞组织的穿透性也较强,多糖、蛋白质等在醇溶液中易产生沉淀,因此提取液的杂质较少9，所以在选用样品的提取溶剂时采用甲醇(含1%氨水)。在对样品测定之前要脱脂,否那么对香草酸-高氯酸比色体系干扰较大。3.6精细度的测定结果见表2。表2精细度实验结果略3.7加标回收率实验结果如表3。表3加标回收率实验结果略平均回收率X99.03%，测定的标准差S=5.0