鞣酸小檗碱口服结肠定位包衣片的制备及体外释药性

1、鞣酸小檗碱口服结肠定位包衣片的制备及体外释药性【摘要】目的研究鞣酸小檗碱结肠定位包衣片的制备工艺，并考察体外释放条件对包衣片结肠定位及结肠释放行为的影响。方法以壳聚糖和聚丙烯酸树脂为包衣材料，采用喷雾包衣的方法制备pH依赖与酶降解相结合型结肠定位包衣片,并研究包衣片在模拟人体胃肠道环境中的释放情况。结果鞣酸小檗碱结肠定位包衣片在模拟胃液中2h不释药、模拟小肠液(pH6.8的磷酸盐缓冲液)的介质中5h释药小于5%，在模拟结肠环境的介质(pH7.6磷酸盐缓冲液，含30%大鼠结肠内容物)中累积释放度大于85%。结论鞣酸小檗碱结肠定位包衣片可在结肠定位，且体外释放度满足结肠定位制剂的要求。【关键词】鞣

2、酸小檗碱结肠定位包衣片体外释放度结肠定位释药系统可进步结肠部位药物浓度，防止药物的首过效应，进步药效，有利于治疗结肠部分病变1，包括结肠溃疡、克罗恩氏病(节段性结肠病)、结肠癌和便秘等疾玻文献报道小檗碱对溃疡性结肠炎、肠易激综合征、结肠癌细胞有抑制作用2-4。鞣酸小檗碱(berberinetannate)又叫无味黄连素，其在肠液中易分解产生游离的鞣酸和小檗碱5。小檗碱系异喹啉生物碱，具有增强细胞吞噬功能、抑制细菌和收敛作用，可增强肠道对水的回吸收，高浓度时对某些菌株有杀菌作用，另外还有促进机体免疫功能，具有广谱抗菌作用6。鞣酸能在发炎的肠黏膜外表沉淀蛋白质形成一层保护膜，肠黏膜被一层保护膜覆盖

3、后，降低了毛细血管的通透性，使炎性渗出减少，有利于炎症的消除7。因此鞣酸小檗碱起到抗菌和收敛双重作用。广东药学院学报第25卷第3期李雪,等.鞣酸小檗碱口服结肠定位包衣片的制备及体外释药性1仪器与材料1.1仪器1.2材料2方法与结果2.1鞣酸小檗碱片芯的制备将聚维酮K30(PVPK30)溶解于适量乙醇中，然后参加过200目筛的鞣酸小檗碱，搅拌使其分散均匀，挥干乙醇后过100目筛，再与微晶纤维素、交联聚维酮(PVPP)等混合均匀，压片。制得片芯片径为8，压片压力约60N，片质量为250g。2.2鞣酸小檗碱结肠定位包衣片的制备2.2.1隔离层包衣取适量的HP溶于体积分数80%乙醇中，制备成质量浓度为

4、2%的包衣液。将上述制得的片芯置包衣锅内，吹入约40热空气，待片床温度约为35时，进展喷雾包衣，至包衣膜的厚度到达预定标准时，35固化30in。经考察隔离层的增重对释放度无影响，因此确定隔离层的增重为2%。2.2.3肠溶层包衣称取一定量的聚丙烯酸树脂和(质量比119，溶于体积分数95%乙醇，参加增塑剂邻苯二甲酸二丁酯(聚丙烯酸树脂和的量的20%)、抗粘剂单硬脂酸甘油酯(聚丙烯酸树脂和的量的5%)，制成聚丙烯酸树脂和(质量比11)质量浓度为6%的包衣溶液。将包壳聚糖层后的包衣片置包衣锅中，吹入热空气，待片床温度约30时开场喷雾包衣，至包衣膜的厚度到达预定标准时，30固化30in，即得pH依赖与酶

5、降解相结合的鞣酸小檗碱结肠定位包衣片。2.2.4包衣增重计算公式如下：2.3包衣片释放度测定的方法学考察2.3.1测定波长确实定称取鞣酸小檗碱对照品适量，分别溶解于pH6.8及pH7.6的磷酸盐缓冲液中，并按处方比例参加辅料，按照中国药典(2022年版二部附录IVA)于200500n波长范围内进展紫外扫描，两种pH值溶液在272n、342n处均有吸收且辅料无干扰;在pH7.6的鞣酸小檗碱溶液中参加大鼠结肠内容物后进展紫外扫描，在272n处有干扰，而在342n处没有干扰，因此本试验选择342n作为鞣酸小檗碱的测定波长。2.3.2标准曲线的制备精细称取鞣酸小檗碱对照品约25g，置500L量瓶中，分

6、别用人工小肠液(pH6.8磷酸盐缓冲液)、人工结肠液1(pH7.6磷酸盐缓冲液)溶解，定容，得50g/L的贮备液。再分别精细汲取人工小肠液、人工结肠液1贮备液6、8、10、12、14、16、18L置50L量瓶中，定容，摇匀，于342n处分别测定吸光度。以浓度对吸光度值进展线性回归，回归方程分别为：A小肠液=0.0248+0.0101(r=0.9996);A结肠液1=0.0226+0.0145(r=1.0000)。说明鞣酸小檗碱的质量浓度在618g/L范围内与吸光度呈良好线性关系。精细称取鞣酸小檗碱对照品约25g，置500L量瓶中，用人工结肠液2(pH7.6磷酸盐缓冲液，含30%大鼠结肠内容物)

7、溶解，定容，制成50g/L的贮备液。分别精细量取2、8、14、20、26、32L于50L量瓶中，用人工结肠液2定容，摇匀，4000r/in离心15in，取上清液(除去结肠杂质)，在342n处测定吸光度。以浓度对吸光度进展线性回归，得回归方程：A结肠液2=0.0242+0.0023(r=0.9994)。说明鞣酸小檗碱的质量浓度在232g/L范围内与吸光度呈良好线性关系。转贴于论文联盟.ll.2.3.3精细度试验精细称取鞣酸小檗碱对照品约25g，置500L量瓶中，分别用人工小肠液、人工结肠液1、人工结肠液2溶解，定容，得50g/L的贮备液。分别精细量取贮备液3L置10L量瓶中，稀释至刻度(质量浓度

8、为15g/L);重复测定6次，结果其RSD分别为0.56%、0.34%、0.68%，显示该方法精细度良好。2.3.4稳定性试验劝2.3.3项下质量浓度为15g/L的鞣酸小檗碱溶液，在37、自然光下放置，于0、6、12、24h取样测定吸光度并计算RSD值。结果说明鞣酸小檗碱在各释放介质中稳定，其在人工小肠液、人工结肠液1、人工结肠液2中的RSD分别为0.21%、0.36%和0.27%，符合要求。2.3.5回收率试验精细称取鞣酸小檗碱对照品约25g，分别置500L量瓶中，参加处方比例的各辅料，按“2.3.1项操作，人工小肠液和人工结肠液1配制质量浓度为18、12、6g/L，人工结肠液2配制质量浓度

9、为32、20、8g/L，于342n处测定吸光度，计算回收率，见表1。结果说明鞣酸小檗碱在各介质中的回收率良好,RSD均小于2%。表1回收率试验结果2.4鞣酸小檗碱结肠定位包衣片体外释放度的测定2.4.1鞣酸小檗碱结肠定位包衣片的释放度试验10按中国药典2022年版二部附录的第三法测定，取鞣酸小檗碱结肠定位包衣片6片，置250L的介质中，温度为37，转速为100r/in，定时取样2L，同时补充等量同温介质，用0.8微孔滤膜过滤，精细汲取续滤液1L，用相应介质稀释至5L后于342n处测定吸光度，通过标准曲线计算释放度(Q)。释放介质依次为0.1l/LHl(2h)、pH6.8磷酸盐缓冲液(5h)、人

10、工结肠液2(7h，在人工结肠液2试验过程中不断通入2)。2.4.2酶降解材料的挑选分别以果胶、瓜尔豆胶、壳聚糖为包衣膜材料，制备鞣酸小檗碱包衣片，根据释放度情况，选择适宜的酶降解包衣材料。果胶、瓜尔豆胶、壳聚糖在人工小肠液(5h)、人工结肠液1(7h)中释放结果见图1。从图1可见，果胶包衣膜的水溶性较高，在人工小肠液中5h释放度到达57%，在人工结肠液1中7h释放度为36%;瓜尔豆胶包衣膜在人工小肠液中5h释放度到达21%，在人工结肠液1中7h释放度为21%;壳聚糖包衣膜在人工小肠液中5h释放度为5.2%，在人工结肠液1中7h释放度为9%。根据药典规定结肠定位制剂在规定的酸性介质与pH6.8磷

11、酸盐缓冲液中不释放或几乎不释放，而在要求的时间内，于pH7.58.0磷酸盐缓冲液中大部分或全部释放。以果胶包衣的片在人工小肠液(pH6.8磷酸盐缓冲液)中释放度已到达57%，超过药典关于结肠定位制剂在pH6.8磷酸盐缓冲液中的释放度要求;以瓜尔胶包衣的片在人工小肠液(pH6.8磷酸盐缓冲液)中释放度到达21%，也超出了药典要求;以壳聚糖包衣的片在人工小肠液(pH6.8磷酸盐缓冲液)中释放度为5.2%，符合药典规定，而在人工结肠液1释放度为9%，未到达结肠定位释放的要求。由于壳聚糖可被结肠中的特异酶降解，因此在人工结肠液1中参加30%大鼠结肠内容物制成人工结肠液2，并考察以壳聚糖包衣的片的释放度

12、。结果见图2。从图2可见，以壳聚糖包衣的片在人工小肠液中5h释放度为5.3%，在人工结肠液2中7h释放度大于85%，其释放度符合药典要求。因此本试验选择壳聚糖为酶降解层的包衣材料。2.4.3壳聚糖包衣膜增重的选择壳聚糖包衣膜的厚度对在人工结肠液2中的释放有影响，所以分别考察了壳聚糖包衣膜增重为4%、5%、6%的包衣片的释放情况。结果见图3。从图3可见，壳聚糖包衣膜增重为4%时，在人工小肠液中释放度为24.4%，超出药典规定的要求;壳聚糖包衣膜增重为6%时，在人工结肠液2中7h释放度为57.8%，未到达药典规定的释放度要求;壳聚糖包衣膜增重为5%时，在人工小肠液中释放度为5.1%、在人工结肠液2

13、中7h释放度大于85.0%，符合药典规定。因此确定壳聚糖包衣膜的增重为5%2.4.4肠溶层包衣增重的影响由于壳聚糖在酸性条件下溶解，为了保证药物在胃液中不释放，需要在壳聚糖包衣膜外包肠溶层，所以分别考察了肠溶层包衣增重为2%、3%、4%、5%时包衣片在人工胃液中的释放情况。结果，肠溶层包衣增重为2%时，在人工胃液中2h内鞣酸小檗碱释放为15.6%;当肠溶层增重为3%、4%、5%时，在人工胃液中2h内鞣酸小檗碱释放为0%，因此确定肠溶层包衣增重为3%。2.4.5包衣片的批内批间稳定性试验以壳聚糖增重为5%，肠溶层增重3%制备包衣片，以在不同介质中的释放度作为指标，考察批内批间稳定性(每批500片

14、)。结果见表2、表3。由表2可见，包衣片在人工胃液、人工小肠液中的批内和批间重现性良好。其在人工胃液中无释放;在pH6.8的人工小肠液中释放度为4.48%，RSD为1.27%(n=3)。由表3可见，鞣酸小檗碱结肠定位包衣片在人工结肠液2中的释放度批内和批间稳定性良好，2h的释放度为20.62%，RSD为2.0%;4h释放度为67.95%，RSD为1.18%;6h释放度为86.09%，RSD为0.36%;7h累积释放度为86.89%，RSD为0.96%，在6h时释放度已大于85%。表2不同批次包衣片在人工胃液、人工小肠液1中的累积释放度表3不同批次包衣片在人工结肠液2中的累积释放度3讨论本研究采用多层包衣使鞣酸小檗碱结肠定位包衣片到达结肠定位的目的，其中壳聚糖包衣层起主要的结肠定位作用。壳聚糖能在胃液中溶解，在小肠液中不溶解，而被结肠特异酶降解，为防止壳聚糖包衣膜在胃液中溶解，在壳聚糖包衣膜外层包肠溶性丙烯酸树脂并且通过控制肠溶衣膜的厚度，既保证壳聚糖在胃液中不溶解，又使其不影响药物