甘草RNA提取方法研究

1、甘草RNA提取要领研究【摘要】目的从甘草差异构造中提取高质量的RNA，为进一步合成双链DNA，构建甘草DNA文库奠基基矗要领接纳几种常用要领(高盐溶液法、Lil沉淀法、TAB法和SDS法)提取甘草差异构造的RNA，并以1%琼脂糖凝胶电泳和A260/A280，A260/A230的值作为指标。结果Lil沉淀法对付甘草差异构造中的RNA具有更好的提取结果，条带清楚，完备性较好，且A260/A280和A260/A230值均靠近于2.0，根部构造产量达0.220g/g，叶片构造产量达0.275g/g。结论接纳Lil沉淀法提取甘草差异构造中的RNA具有更好的结果，适于从富含多糖的植物构造中提取RNA。【关

2、键词】甘草RNA提取多糖Keyrds:RadixGlyyrrhizae；RNAextratin；Aylase甘草(RadixGlyyrrhizae)是一种富含多糖的中药材，临床应用普及。随着甘草分子研究的不竭深化，探究快速而有用的RNA提取要领，从甘草差异构造中得到高质量的RNA成为了研究的关键，也为进一步的研究如构建DNA文库，RT-PR，Nrthern杂交、基因芯片等奠基基矗有关植物RNA的提取要领已有不少报道1，但由于植物构造具有多样性，在现实应用中必要探究出顺应自身研究的植物质料的RNA提取要领。本实行通过比拟高盐溶液法、Lil沉淀法等4种常用的植物RNA提取要领，对甘草差异构造的RN

3、A举行分散研究，从而寻到高效、轻便、实用于甘草差异构造的RNA提取要领。1质料与要领1.1质料一年生甘草的叶片和根部构造。用0.1%生理盐水洗净，用干净吸水纸擦干，分成1g/份存于离心管中，于液氮中敏捷冻存，然后转入-70冰箱保存。1.2要领2结果2.1RNA的产率和纯度别离应用4种要领对甘草的叶片和根部构造的RNA举行了提取，产率和纯度结果见表1，此中所列数据均为均匀值。表1差异要领提取甘草差异构造的产率和纯度阐发略理论上，对付较纯洁的RNA其A260/A280和A260/A230均应靠近2.0，A260/A280过低会有卵白质的污染，A260/A230过低会有大分子多糖的污染。由表1中数据

4、可以看出，TAB法和SDS法固然可以去除小分子杂质和卵白的污染，但是提取的总RNA的含量较低，比拟之下使用高盐溶液法和Lil沉淀法提取总RNA的产率较高。但是由于甘草构造富含多糖，应用高盐溶液沉淀RNA的同时也将大分子的多糖沉淀下来，固然产率较高，但是多糖污染严峻，将得到的RNA溶液离心可以或许在管底富集大量的胶状物，影响下一步操纵。因此，Lil沉淀法具有较好的提取结果，A260/A280和A260/A230靠近2.0，且产量较高，叶片及根部构造均到达0.2g/g以上。2.2RNA的完备性别离应用4种要领对甘草的两个构造的RNA举行了提取，1%琼脂糖凝胶电泳检测RNA提取的完备性，详细结果见以

5、下图1，2。由图中可以看出，S1和S2的要领提取的总RNA完备性较好，即高盐溶液法和Lil沉淀法对付甘草叶片及根部构造均具有较好的提取结果。3讨论3.1RNA提取必要留意的题目实行历程中要严酷操纵无酶的环境，所用试剂都必要灭酶处置惩罚，实行职员要带一次性手套和口罩，整个历程只管在超净台事情，超净台要提早30in用紫外灯照耀消毒，以淘汰RNase的污染。液氮研磨历程中要研磨彻底，不然影响细胞的破裂完全，提出的RNA量少或提不出。3.2防范酚类氧化甘草含有大量酚类化合物，在提取历程中非常轻易氧化，导致提取历程中构造颜色渐渐加深酿成红棕色，严峻影响了所提的RNA的质量，其重要缘故原由是由于酚类化合物

6、氧化后不成逆地结合到核酸上并与RNA共沉淀2。为办理酚类氧化题目，用PVP和-巯基乙醇作为复原剂3，可以或许进步RNA的质量，减轻氧化而产生的配景颜色。3.3降服多糖污染甘草富含多糖，尤以根构造中多糖含量较多，在完备的细胞内这些物质在空间上与核酸是分散的，但当构造被研磨细胞破裂后，这些物质就会与RNA彼此作用，形成难溶的胶状物与RNA共沉淀下来，给提取RNA带来了很大的难度。这也是富含多糖植物举行分子生物学操纵中常见的困难。本实行起首在K+离子存在的环境下，用预冷的(-20)异丙醇沉淀RNA，进一步用高浓度的Lil重沉RNA，到达撤除多糖的目的。本要领实用于从含糖量高、黏度大或表达品貌较低的植物构造中提取总RNA，尤其实用于根类构造，为从富含多糖的根类构造中提取RNA提供了根据。【参考文献】1FangG,HaarS,GrnetR.AquikandinexpensiveethdfrrevingplysaharidesfrplantgeniDNAJ.Bitehniques,1992(13):52.2ShnEiderbauerAH,SanderannJ,ErnstD.IslatinffuntinalRN