肿节风浸膏对氧自由基作用的研究

1、肿节风浸膏对氧自由基作用的研究秦俭，王仁生，滕家安，陈健，黄仁彬【摘要】目的研究肿节风浸膏对羟自由基H和超氧阴离子自由基2的作用。要领接纳邻二氮菲-Fe2氧化法检测差异浓度肿节风浸膏水溶液对H202/Fe2体系产生的H的扫除作用；邻苯三酚自氧化法测定肿节风浸膏溶液对2的作用。效果肿节风浸膏溶液浓度别离为0.2，0.4，0.6，1.2gl-1时的H扫除率别离为0.89%，17.52%，49.35%，89.89%，组间有量效干系；肿节风浸膏溶液浓度为0.01gl-1时对2按捺率为-76.84%。结论肿节风浸膏溶液在体外有明显扫除H的作用，促进2天生。【关键词】肿节风浸膏羟自由基超氧阴离子自由基肿节

2、风为金粟兰科植物草珊瑚SarandraglabraThunb.Nakai的枯燥全株。肿节风含有黄酮苷、氰苷、香豆素、内酯、挥发油等。味微苦、辛、平，归心、肝经。具有清热凉血、活血消斑、祛风通络的成效1。主用于炎症性疾病的治疗。拟从氧自由基xygenfreeradial，FR的角度来相识其机制，本实行研究了肿节风浸膏对羟自由基H和超氧阴离子自由基2的作用。1东西1.1药品肿节风干浸膏0.091g浸膏/g生药，广西南宁东兰制药厂提供。1.2试剂H22，重庆川江化学试剂厂；邻苯三酚，中国医药上海化学试剂公司，阐发纯；邻二氮菲，上海试剂三厂，阐发纯；FeS4，上海试剂三厂，阐发纯；pH7.34的磷酸缓

3、冲液(PBS)用磷酸二氢钾和氢氧化钠配制；pH8.34的磷酸缓冲液(PBS)用磷酸二氢钾和磷酸氢二钾配制。1.3仪器BekanDU640紫外分光光度计，722型分光光度计，pH数字表现酸度计.2要领2.1样品制备取肿节风干浸膏0.091g浸膏/g生药2g，用单蒸水40l稀释成浓度为50g/l的肿节风浸膏溶液。2.2羟自由基H的天生及扫除率的测定按参考文献的要领2，3，接纳H22/Fe2体系，通过Fentn反响天生H，促使邻二氮菲-Fe2被氧化为邻二氮菲-Fe3，造成其水溶液在波长510n处最大汲取消散，来测算其扫除率。实行要领如下：邻二氮菲0.35lL-1，FeS40.4lL-1，pH7.34

4、的PBS150lL-1，加0.015%H22损或不加H22未损，37保温90in，于波长510n处测吸光度值，得A损与A未损。邻二氮菲0.35lL-1，FeS40.4lL-1，PBSpH7.34150lL-1，0.015%H22，参加必然量肿节风浸膏溶液，各加药管以PBSpH7.34加等量药液得同浓度的肿节风浸膏溶液作参比，将上述试管同时置于恒温水槽中，37保温90in，测得A样。每处置惩罚重复10次，取其均匀值按下式盘算H扫除率。H扫除率S%=A样-A损/A未损-A损100%2.32天生的按捺率测定使用2扫除剂能使邻苯三酚自氧化产物在322n处的汲取峰受到按捺的特点，举行光化学要领测定，间接

5、测得2天生及按捺率。按参考文献的要领4，接纳如下实行要领：总体积4.5l的PBSpH8.3450lL-1，邻苯三酚0.2lL-1，反响温度为25，参加必然量肿节风浸膏溶液，加药管以PBSpH8.34加等量药液得同浓度的肿节风浸膏溶液作参比。用动态要领测定2天生的反响初速率V0(Ain-1)。反响启动后每30s测一相应A322n值，至4.5in止。将所得A322n值与时间t(in)举行回归阐发，其歪率为V样。另取试剂同上，不加肿节风浸膏溶液以作比较，用pH8.34的PBS作为参比，余步调同上，测得歪率V空。每处置惩罚重复10次，取其均匀值按下式盘算2天生的按捺率：2按捺率%=(V空-V样)/V空

6、100%2.4数据处置惩罚全部数据均以s表现，接纳t查验、线性相干和回归阐发举行统计处置惩罚。效果3.1对H的作用在本实行条件下，由A510n的测定值不雅察肿节风浸膏溶液对H的扫除作用。效果表现肿节风浸膏溶液对其具有明显的扫除作用效果见表1及图1，并随浓度的增长扫除作用加强，相干系数r=0.9855。表1肿节风浸膏溶液对H的作用组别浓度/gl-1A510nH扫除率S略3.2对2天生的作用用动态要领测得反响的初速率V0Ain-1。本实行直线回归方程别离拟合如下：比较组y=0.1317x-0.015，肿节风组y=0.233x+0.041。其回归相干系数比较组在0.99930.9999之间，肿节风组

7、在0.98910.9997之间。参加肿节风浸膏溶液后，其歪率显着大于比较组，即2天生速率V0明显上升效果见表2及图2，差异有统计学意义P0.05。表白肿节风浸膏溶液能促进2的天生。表2肿节风浸膏溶液对2天生的作用略4讨论FR是生物体在物理和化学的作用下产生或衍生出来，包罗H，2，单线态氧(12)等。在正常环境下，由于体内存在自由基扫除剂，体内FR的产生与扫除保持相对平衡，并到场很多正常的生理生化反响。假设自由基扫除剂的合成恶性化或自由基反响产生紊乱，那么可引起机体一系列病理生理改变5，导致某些疾病的产生与生长。一方面FR可以或许调治花生四烯酸的代谢，刺激吞噬细胞和中性粒细胞的吞噬杀菌成效和免疫

8、历程，有利于机体康健；另一方面，FR可使很多生物大分子如核酸、卵白、膜多不饱和脂肪酸产生超氧化反响，使生物大分子出现交联或断裂，引起细胞布局和成效的粉碎6，7。如今已证明机体多个体系的多种疾病的产生、生长都与氧自由基有关8。放射治疗时，辐射的生物效应在很大程度上是间接通过辐射对水的作用形成H，2等FR，通过物理化学生物如许一个庞大的连锁反响而终极导致放射损伤9。肿节风是一种活血化淤、清热凉血、祛风通络的中药，也有必然的抗肿瘤作用。其身分庞大，含有挥发油、黄酮、香豆精、有机酸等。临床上常被用于炎症性疾病的治疗。有学者1012应用肿节风注射液治疗急性乳腺炎、小儿支气管肺炎、老年慢性支气管炎急性爆发

9、期，均有较好疗效，且未见显着毒副作用。表白肿节风注射液有显着的抗炎作用。Fentn反响是生物体内产生H的紧张机制，本研究即模拟机体在体外接纳H22/Fe2体系通过Fentn反响产生H来检测肿节风浸膏溶液扫除H的本领。效果是肿节风浸膏溶液在体外有显着扫除H的作用，并随剂量的增长扫除作用加强。如许就提示肿节风浸膏溶液在体内对H大概也会有明显的扫除作用。剂量组别离为0.2，0.4，0.6，1.2gl-1时的H扫除率别离为0.89%，17.52%，49.35%，89.89%，并存在显着的量效干系。0.2gl-1剂量组与比较损比力无明显性差异P0.05，大概是由于药物剂量低于0.2gl-1不克不及有用扫除H。肿节风浸膏溶液对H高效的扫除作用是否为其抗炎的重要机制之一，如今另有待进一步证明。刘兆乾等13研究表白：肿节风总黄酮苷对小鼠移植性肿瘤S180腹水型肉瘤细胞在体外有显着的按捺作用。早期遵义医学院肿瘤研究组14对肿节风抗癌作用做了开端研究，提示肿节风干浸膏、注射液、挥发油等均有差异程度的抗癌效应，肿节风挥发油对EA，L615，L7712等瘤细胞