泡桐花总黄酮抗哮喘豚鼠气道炎症的作用机制探讨

1、泡桐花总黄酮抗哮喘豚鼠气道炎症的作用机制讨论【关键词】豚鼠；,慢性气道变应性炎症；,泡桐花总黄酮摘要：目的通过豚鼠哮喘模型研究泡桐花总黄酮抗哮喘气道变应性炎症的作用。方法以卵蛋白A致敏豚鼠为动物模型，灌胃途径予以泡桐花总黄酮大、小剂量，观察各组豚鼠支气管肺泡灌洗液BALF中白细胞总数、嗜酸性粒细胞ES数和嗜酸性粒细胞特异性趋化因子Etaxin的改变。结果泡桐花总黄酮可显著延长致敏豚鼠的引喘埋伏期，不同程度地抑制BALF中的ES和白细胞总数及气道上皮Etaxin的过度表达。结论泡桐花总黄酮对哮喘具有一定的保护作用，其中泡桐花总黄酮可能通过调控Etaxin在气道黏膜上皮的过度表达，进而抑制Es向哮

2、喘气道的募集，消除气道炎症，成为其发挥抗过敏性哮喘的重要环节。关键词：豚鼠；慢性气道变应性炎症；泡桐花总黄酮Abstrat：bjetiveThisstudyasdesignedtinvestigatetheeffetsfflavnidsinFrutusPaulniaenIARandLAR.ethdsAnguineapigasthatidel,induedbyVAasadinisteredbyintragastrigavage(ig)ithdifferentdsesfflavnidsinFrutusPaulniae.Thelatentperid,thenuberfaidphilsandtheEt

3、axininbrnhalvelarlavagefluid(BALF)erebserved.ResultsTheflavnidsinFrutusPaulniaeulddelaythelatentperidfairayinflaatinsignifiantly.Thenuberfaidphilsandttalhitebldellinbrnhalvelarlavagefluid(BALF)asrestrainedbyflavnidsinFrutusPaulniae.Inadditin,theflavnidsinFrutusPaulniaeuldinhibittheverexpressinfEtaxi

4、ninthetraheaepitheliu.nlusinTheresultssuggestthatflavnidsinFrutusPaulniaeanantagnizeairayinflaatinbyinhibitingtheverexpressinftheEtaxinintraheaepitheliu.Keyrds：PauluniafrtunEi(Sesl.)Hesl;Flavnids;Brnhiaastha气道炎症是支气管哮喘(astha)的病理根底，有多种炎症细胞、炎症介质和细胞因子参与其炎症过程1。研究发现2嗜酸性粒细胞ES趋化聚集，在气道炎症的形成过程中起重要作用，Etaxin是ES

5、的选择性趋化剂3，也是ES在哮喘发病过程中选择性增加的原因。因此，调控Etaxin的过度表达，抑制ES在气道内的募集，消除气道炎症，对治疗哮喘具有关键性意义。根据文献报道4，5，少常用草药泡桐花在支气管哮喘的临床治疗上具有一定的效果；泡桐花浸膏可以明显改善哮喘豚鼠肺组织的病理损伤，对哮喘豚鼠有显著的治疗作用；泡桐花主要成分6为挥发油、总黄酮、熊果酸等，其中总黄酮含量较丰富3.081%。我们以泡桐花总黄酮为研究对象，采用ig给药途径，结合图象分析技术讨论其抗哮喘作用及其机制。1材料与方法1.1动物与分组安康白化豚鼠，雌雄各半，体重20050g，由河南省实验动物中心提供。随机分为模型、阳性、空白对

6、照组和泡桐花总黄酮大、小剂量组。10只/组。1.2药品与试剂卵白蛋白valbuin，A：Siga公司，Grade；Etaxin一抗(BA1469，Rabbitanti-Etaxin)武汉博士德生物工程，相应二抗试剂盒及阳性对照片购自北京中山生物技术；醋酸地塞米松片，浙江仙琚制药股份，批号051247。泡桐花总黄酮由郑州大学药学院生药学研究室提供。1.3动物诱喘及用药参照宫兆华7方法，常规饲养观察3d无异常后，予10A生理盐水(N.S)溶液200g/kgip致敏，并于当天开场按表1剂量给药。第15天时，予5%A的N.S溶液雾化吸入诱导哮喘发作。用哮喘发作动物取出后的表现为咳嗽、呼吸困难、烦躁、抽

7、搐、跌倒甚至死亡)的动物进展实验。1.4用药过程中哮喘防治作用观察用药第5，12天及第15天，3次对豚鼠进展激发实验。予5%A的N.S溶液雾化吸入激发10s，封闭时间共20s，观察记录各组动物哮喘严重程度，取第15天的引喘埋伏期自雾化开场至豚鼠腹肌痉挛、腹部凹陷出现的时间作为引喘埋伏期，超过6in者以360s计算为统计指标。在第5，12天的激发过程中，先后有8只动物大、小剂量组各2只，模型组3只，阳性组1只因反响剧烈，抢救不及而窒息死亡。1.5BALFbrnhalvelarlavagfluidBALF的采集与细胞计数暴露豚鼠气管肺，用丝线结扎右肺门处，行气管插管灌洗左肺。灌入N.S5l抽吸2次

8、2次，灌洗回收率大于80%，无菌离心1500r/in10in，沉淀细胞以Hanks液处理后即刻在显微镜下计数细胞总数，细胞浓度调至2106/l，涂片，瑞氏染色，计数白细胞总数和ES数。1.6免疫组化Etaxin检测摘取右肺中叶，放入乙醇、醋酸和甲醛混合固定液中固定48h。石蜡切片43张脱蜡至水，行免疫组化EtaxinES趋化性细胞因子染色。免疫组化操作按说明书进展，DAB显色。另设不加一抗的切片作阴性对照。每只动物在细支气管黏膜各随机选择5个Ht视野，计算机图像分析系统检测每个Ht视野Etaxin表达阳性信号的积分光密度ID，以平均值表示该动物气道Etaxin阳性表达程度。1.7统计学处理所有

9、数据以s表示，使用SPSS11.0统计软件进展分析。转贴于论文联盟.ll.2结果2.1泡桐花总黄酮对豚鼠引喘埋伏期的影响结果说明，各组造模动物的引喘埋伏期均较正常组缩短，说明造模动物皆发生了哮喘反响；各用药组与模型对照组比拟具有显著性意义，P0.05或0.01，说明各用药组对哮喘具有不同程度的保护作用。结果见表1。表1泡桐花总黄酮对豚鼠引喘埋伏期的影响略与模型对照组比拟，*P0.05，*P0.012.2对BALF中白细胞总数与ES计数的影响结果说明，泡桐花总黄酮大剂量和阳性药对BALF中白细胞总数和ES计数有抑制作用，与模型组比拟，差异有极显著性意义P0.01。结果见表2。表2对BALF中白细

10、胞总数与ES计数的影响略与模型对照组比拟，*P0.05，*P0.012.3豚鼠气道上皮表达Etaxin阳性蛋白信号的图象分析镜下Etin阳性信号主要位于支气管黏膜上皮、肺泡上皮和平滑肌细胞、肺微血管内皮细胞胞浆，内含棕黄色颗粒物质。图象分析结果显示，模型组支气管黏膜上皮Etaxin表达阳性信号的ID显著高于空白组，差异有显著性意义P均0.01；与模型组比拟，阳性药和总黄酮大剂量组表达Etin阳性蛋白信号细胞的ID明显降低，差异有显著性意义P0.05。结果见表3。表3对豚鼠气道Etaxin阳性细胞数量的影响略与模型对照组比拟，*P0.05,*P0.013讨论哮喘(astha)是一种由多种因素引起

11、的以可逆性气道阻塞、气道高反响和气道炎症为特征的免疫变态反响性疾病1，2。慢性气道炎症是哮喘发病的一个重要因素，有多种炎症细胞、炎症介质和细胞因子参与其炎症过程。气道炎症是气道高反响(BrnhialHyperrespnsiveness，BHR)的根底，无论过敏性还是非过敏性哮喘，气道炎症都以Es的浸润募集和激活为最终途径，而哮喘时异常高表达于气道上皮的Etaxin作为ES高度选择性的化学趋化剂，成为ES在哮喘发病过程中选择性增加的原因2。研究发现，浸润于哮喘模型动物细支气管黏膜的ES数与该部位Etaxin阳性表达程度呈显著正相关8。因此，调控Etaxin的过度表达，抑制Es在气道内的募集，消除

12、气道炎症，对治疗哮喘具有关键性意义。在哮喘的治疗药物中，甾体类抗炎药糖皮质激素等是目前较有效的药物，但因其副作用多，不宜长期使用，导致哮喘的控制率不尽人意，死亡率较高1。中药成分虽然复杂，但其具有整体调节且毒副作用相对较小的优点，因此，从中药中挖掘抗炎平喘成分是将来哮喘研究的重要内容。本实验以引喘埋伏期、ES和Etaxin作为观察指标，讨论泡桐花总黄酮抗支气管哮喘变应性炎症的防治作用及其可能的机制。实验结果显示，泡桐花总黄酮可显著延长致敏豚鼠的引喘埋伏期，不同程度地抑制BALF中的ES和白细胞总数及气道上皮Etaxin的过度表达，与模型组比拟有显著差异。给药5d和12d，泡桐花总黄酮大小剂量不

13、能预防再次吸入卵蛋白抗原后的哮喘发作，并且动物死亡率高，这很可能是动物对抗原敏感度高所致。给药第15天，再次吸入卵蛋白抗原后的哮喘发作较平稳，无死亡发生，可能与药效发挥和免疫耐受有关。本实验结果说明，泡桐花总黄酮对哮喘具有一定的保护作用，其中泡桐花总黄酮可能通过调控Etaxin在气道黏膜上皮的过度表达，进而抑制Es向哮喘气道的募集，消除气道炎症，成为其发挥抗过敏性哮喘的重要环节。参考文献：1王国斌重视哮喘，正确诊治和控制哮喘J.中原医刊，2002，2911：402LuisTeranLhekinesandasthaJ.Iunlgytday，2000，21(5)：2353刘新，张苏，崔毅豚鼠气道炎症中Etaxin基因表达的意义J.微生物学杂志，2022，253：33.4全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编.北京：人民卫生出版社，1975：466.5张永辉，刘宗花，杜红丽，等中药泡桐花浸膏对哮喘豚鼠肺组织作用的病理学研究J.新乡医学院学报，2002，19(6):473.6王晓，程传格，刘建华.泡桐花精油化学