实验一分子生物学实验室常用仪器设备简介

1、实验一分子生物学实验室常用仪器设施简介一、实验目的熟习分子生物学实验室常用仪器并娴熟使用二、实验原理、恒温气浴摇床：用于对温度和振荡频次有较高要求的细菌培育，发酵，杂交，生化反响及酶和组织研究等。、超净工作台：用于分子生物学无菌操作。、低温台式高速离心计：用于分别纯化DNA和蛋白质等，如基因片段的分别，蛋白酶的积淀和回收等。、微量移液管：是连续可调的，计量和转移液体的专用仪器，其装有直接读数容量计。有多种规格：0.5-10L10-100L20-200L100-1000L。、电泳仪：用于确立大分子物质的分子量以及判断物种亲缘关系的仪器。6、PCR仪：用于目的基因的扩增，是一对寡糖核苷酸引物联合到

2、正负DNA链上的靶序列双侧，进而酶促合成拷贝数为百万倍的靶序列DNA片段。主要用于基础研究和应用研究等领域。、灭菌锅：用于细菌和细胞培育及核酸等有关实验使用的试剂，器皿及实验器具的严格灭菌。三、实验仪器恒温气浴摇床、超净工作台、低温台式高速离心计、微量移液管、灭菌锅、PCR仪、电泳仪。四、实验步骤（一）、恒温气浴要穿的使用：1、样品瓶坚固放入弹簧夹中2、接通电源开关，仪器进入准备状态3、参数设定，（设定温度、时间、转速等参数）4、按启动键仪器开始工作，按暂停键可暂停托盘的旋转；、按电源键，显示屏显示消逝，封闭电源总开关（二）、超净工作台的使用1、使用工作台时，先经过洁净液浸泡的纱布擦抹台面，此

3、后用消毒剂擦抹消毒。2、接通电源，提早30分钟翻开紫外灯照耀消毒，办理净化工作区内工作台表面积累的微生物，15分钟后，封闭紫外灯，开启送风机。、工作台面上，不要寄存不用要的物件，以保持工作区内的洁净气流不受搅乱。4、操作结束后，清理工作台面，采集各荒弃物，封闭风机及照明开关，用洁净剂及消毒剂擦抹消毒。5、最后开启工作台紫外灯，照耀消毒30分钟后，封闭紫外灯，切断电源。（三）、低温台式高速离心计的使用1、把离心计搁置于平面桌或平面台上，目测使之均衡，用手轻摇一下离心计，检查离心计能否搁置均衡。2、翻开门盖，将离心管放入转子内，离心管必然成偶数对称放入，且要起初均衡，完成用手轻轻旋转一下转子体，使

4、离心管架运行灵巧。3、关上门盖，注意必然要使门盖锁紧，完成用手检查门盖能否关紧。4、插上电源插座，按下电源开关（电源开关在离心计反面，电源座上方）。5、设置转子号、转速、时间：在停止状态下时，用户可以设置转子号、转速、时间，此时离心计处于设置状态，停止灯亮、运行灯闪耀；按下启动离心开始（常用，最高转速为13000r/min，时间最长为20分钟）；注意：对应的转子必然要设置在相应的转速范围内，不可以超速使用，不然对试管或转子有破坏。6、离心计时间倒计时到“0”时，离心计将自动停止，当转子停转后，翻开门盖拿出离心管，关断电源开关。（四）、微量移液管的使用1将微量移液器装上吸头（不一样样规格的移液器

5、用不一样样的吸头）2将微量移液器按钮轻轻压至第一停点；3垂直握持微量移液器，使吸嘴浸入液样面下几毫米，千万不要将吸嘴直接插到液体底部；4迟缓、安稳地松开控制按钮，吸上样液。不然液体进入吸嘴太快，致使液体倒吸入移液器内部，或吸入体积减少；5等一秒钟后将吸嘴提离液面6安稳地把按钮压到第一停点，再把按钮压至第二停点以排出节余液体；7提起微量移液器，此后按吸嘴弹射器除掉吸嘴。（五）、PCR的使用1、开机：翻开开关，视窗上显示“SELFTEST”。2、放入样品管，关紧盖子。3、假如要运行已经编好的程序，则直接按Proceed，用箭头键选择已积蓄的程序，按Proceed，则开始履行程序。4、假如要输入新的

6、程序，则在RUN-ENTER菜单上用箭头键选择ENTERPROGRAM,按Proceed，1）命名新的程序，最多8个字母，输入后按Proceed确认(怎样输入字母、数字)。2）输入程序步骤：名字输入后，确认，此后输入有关程序5、输入完成的程序后，到RUN-ENTER菜单，选择新程序，开始运行。6、其余：用pause可以暂停一个运行的程序，再按一次连续程序。用stop或Cancel可停止运行的程序。（六）、电泳仪的使用1第一用导线将电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端联接，注意极性不要接反。2按电源开关，显示屏出现“欢迎使用DYY-12型电脑三恒多用电泳仪”等字样后，同时系统初始化，蜂鸣4声，设

7、置常设置。屏幕转成参数设置状态，依据工作需要选择稳压稳流方式及电压电流范围。3确认各参数无误后，按“启动”键，启动电泳仪输出程序。在显示屏状态栏中显示Start!并蜂鸣4声，提示操作者电泳仪将输出高电压，注意安全。今后渐渐将输出电压加至设置值。同时在状态栏中显示“Run”，并有两个不停闪耀的高压符号，表示端口已有电压输出。在状态栏最下方，显示实质的工作时间（精准到秒）4电泳结束，仪器显示：“END”，并连续蜂鸣提示。此时按任一键可止鸣（七）、高压灭菌锅1、开盖：转着手轮，使锅盖走开密封圈，增添蒸馏水刚没至板上2、通电：将控制面板上电源开关按至ON处，若水位低（LOW）红灯亮3、堆放物件：需包扎

8、的灭菌物件，体积不超出200mm100mm100mm为宜，各包装之间留有空隙，堆放在金属框内，这样有益于蒸汽的穿透，提升灭菌见效，灭菌时间：121，20min，；如为液体，液体必然装在可耐高温的玻璃器皿中，且不可以装满，2/3即可，121，18-20min4、密封高压锅：推横梁入立柱内，旋转手轮，使锅盖下压，充分压紧5、设准时间和温度，开始灭菌6、灭菌结束，全部东西放入干燥箱干燥，排尽水气五、思虑题1、列出分子生物学常用仪器的名称，用途及操作时的注意事项。答：恒温气浴摇床：常用于液体摇匀以培育微生物、细菌和细胞等。注意要依据不一样样的用途设置不一样样的参数。超净工作台：常用于为微生物学实验供给

9、无菌操作环境。注意操作时关掉紫外灯，防备给人类带来损害。低温台式高速离心计：常用于分别纯化蛋白、病毒、细胞等。使用时不可以随意挪动离心计或翻开盖子；离心计运行时要处于锁定状态；离心管的搁置要处于均衡状态。微量移液管：用于计量和转移微量液体的专用仪器。操作时注意防备枪头的污染；调理刻度时不宜超出最大批程；使用完后将刻度调到最大珍藏。电泳仪：可对不一样样物质进行定性或定量分析，或将必然混淆物进行组分分析或单个组分的提取制备。操作时不可以把导线极性接反；当电泳仪进入工作状态后，防备人体与其各部分的接触，不一样样介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪进步行；若使用时出现异样，要马上切断电源。PCR仪：用

10、于扩增DNA片断。操作时应注意盖子要盖紧，按正确步骤进行。高压高温灭菌锅：用于杀菌消毒。使用时应严格依据规程操作，防备发生安全事故。实验二琼脂糖凝胶电泳的制备及核酸检测一.二.实验目的1、掌握琼脂糖凝胶电泳的原理;2、学习琼脂糖凝胶电泳的操作。实验原理琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，开水中溶解，45开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不一样样DNA，其分子量大小及构型不一样样，电泳时的泳动率就不一样样，进而分出不一样样的区带。琼脂糖凝胶电泳法分别DNA，主假

11、如利用分子筛效应，迁徙速度与分子量的对数值成反比关系。溴化乙锭（EB）未扁平状分子，在紫外照耀下发射荧光。EB可与DNA分子形成EB-DNA复合物，其发射的荧光强度较游离状态EB发射的荧光强度大10倍以上，且荧光强度与DNA含量成正比。三、仪器和试剂仪器：微量移液器，电泳仪，电泳槽，微波炉试剂：琼脂糖：1.0%；电泳缓冲液（50TAE电泳缓冲液取Tris24.2g，冰醋酸5.7ml，0.25mol/LEDTA(pH8.0)20ml，加蒸馏水至100ml）EB：5l/100mlTBE电泳资料：标准分子量核酸（DL2000）四.操作步骤（1）制胶（以20mL为例）a.b.c.d.称取0.2g琼脂糖

12、，加入20ml的1XTAE缓冲液（pH8.0），摇匀；微波炉加热，至琼脂糖完满溶解（要防备过热溢出三角瓶）；将制胶板放入制胶槽中，插入适合的梳子，将溶解的琼脂糖（约50）加入2ulEB后，混平均，倒入此中，直至厚度为46mm（若有气泡要把气泡赶出），在室温下冷却凝结(约3045min)；当心垂直向上拔出梳子,以保证点样孔圆满,将胶板置于电泳槽中。（2）点样用微量移液器将5l含蓝色染液的DL2000加入点样孔下部。（3）电泳翻开电源开关，调理电压至35V/cm(约100V)，可见到溴酚蓝条带由负极向正极挪动，约30-40分钟后即可察看结果。4）察看将电泳好的胶置于紫外透射检测仪上，翻开紫外灯，可见到橙红色核酸条带，依据条带粗细，可大体预计该样品DNA的浓度。忧如时有已知分子量的标准DNA进行电泳，则可经过线性DNA条带的相对地点初步预计样品的分子量。五、实验结果点样时见效较好的照片点出的白色荧光芒比较亮，条带粗细平